Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Результаты поиска -- Найденные сообщения --

страницы (9):  1 2 3 > » 

Нужна помощь с пробоподготовкой ПЦР ВИЧ TaqMan
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 23.02.2017 08:20  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1658330  |  Ответов: 5  |  Просмотров: 3 462
мда

Нужна помощь с пробоподготовкой ПЦР ВИЧ TaqMan
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 22.02.2017 11:03  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1658217  |  Ответов: 5  |  Просмотров: 3 462
(Panaev @ 22.02.2017 13:50)
Ссылка на исходное сообщение  Я может чего не знаю, но сорбция - это метод экстракции, а ТакМан - это метод детекции ампликонов и эти вещи не взаимоисключающие.
Пока ваш вопрос выглядит как "Летели два крокодила. Один на север, другой зеленый...".


Спасибо за поправку полное название теста: COBAS® TaqMan® HIV-1 Test, v2.0.
По привычке и набор и аппарат называем ТакМанами

Нужна помощь с пробоподготовкой ПЦР ВИЧ TaqMan
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 22.02.2017 08:03  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1658192  |  Ответов: 5  |  Просмотров: 3 462
Образцы плазмы, стабилизированные RNAlater (стабилизатор/общий объем = 2/3) тестируем с помощью разных ПЦР тест-систем/платформ. При экстракции методом сорбции все идет гладко. А вот с COBAS® TaqMan® HIV-1 Test, v2.0. получаем много невалидных результатов. Пишет QS_INVALID.
Стабилизированная плазма имеет консистенцию кефира)))) и мне кажется фильтры забиваются при выделении РНК.
Что по вашему можно сделать?
Почитал статьи. У людей проблем нет, в главах "Материалы и Методы" тоже ничего нет.
Может они все таки как то модифицируют процедуру экстракции?

Как сделать простейший магнитный штатив?
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 26.04.2016 09:00  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1616789  |  Ответов: 184  |  Просмотров: 128 620
Приехал штатив

Как сделать простейший магнитный штатив?
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 15.04.2016 13:47  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1614989  |  Ответов: 184  |  Просмотров: 128 620
(genseq @ 15.04.2016 13:09)
Ссылка на исходное сообщение  Казахи хотели сравнить их со штативами Вектор-Бест.


В понедельник привезут в Усть-Каменогорск. Через пару недель съезжу туда сам и отпишусь smile.gif

Трансплантация ВИЧ-резистентности
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 15.04.2016 07:28  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1614927  |  Ответов: 189  |  Просмотров: 78 272
(Alex100 @ 15.04.2016 09:19)
Ссылка на исходное сообщение 

Вот и я все о том же! а тут все СПИД, СПИД. 
Я им  "да нурафен-ультра выпейте и все" а они мне "нет, нет, что Вы! фармкомпании же в общемировом заговоре! только гильотина!"
wink.gif


Ну я бы не стал сравнивать ВИЧ с другими хроническими инфекциями.
Препараты надо принимать постоянно, отсюда две большие проблемы:
1. Токсичность препаратов
2. Низкая приверженность

Вторая проблема будет практически решена, если удастся сделать препараты действующие полгода. Для практикующих врачей центров СПИД это будет просто манна небесная. И лабораторным сотрудникам меньше геморра и склок с лечащими врачами smile.gif

Трансплантация ВИЧ-резистентности
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 15.04.2016 07:20  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1614926  |  Ответов: 189  |  Просмотров: 78 272
(NMR-guy @ 15.04.2016 01:46)
Ссылка на исходное сообщение  Это что, по-Вашему, хорошо работающие и простые культивационные протоколы обсуждаются? Когда чувак едет учиться в другую лабу специально, чтобы узнать как HIV культивировать? Это что, такая наука, которую передают не статьями, а обучением тайным знаниям? wink.gif


confused.gif

1. Кто вам сказал, что они простые? Они, на минуточку только в лабораториях BSL3 делаются.
2. Учиться в лабе, где методика уже поставлена на ноги - нормальная практика.
3. Какие тайные знания? Есть много нюансов, которые не прописываются в статьях, но есть в СОП, с которыми можно ознакомиться только на месте. Плюс конечно организация процесса и практический опыт местного персонала

Трансплантация ВИЧ-резистентности
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 14.04.2016 11:10  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1614741  |  Ответов: 189  |  Просмотров: 78 272
(NMR-guy @ 12.04.2016 23:56)
Ссылка на исходное сообщение  1. Просто наглая ложь. Интернет полон осторожными мнениями, что ВИЧ крайне сложно (если вообще возможно) культивировать в культурах клеток. И в них он по какой-то причине ведет себя не так как в организме.


https://www.researchgate.net/post/What_are_...for_HIV_culture

Трансплантация ВИЧ-резистентности
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 11.04.2016 07:30  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1614022  |  Ответов: 189  |  Просмотров: 78 272
(NMR-guy @ 08.04.2016 05:54)
Ссылка на исходное сообщение  
Если Вы верите, что он культивируется вне зараженных людей - прошу опубликовать ФИО первого, кому это удалось. И желательно ссылку на статью. За настоящую науку в Вашем понимании - это к изобретателю ПЦР-а как метода Кэрри Маллису. Он Вам и всем подобным свободно обоснует, почему нельзя наживаться на враках. Или он тоже не ученый с Вашей Высокой Точки Зрения?

Свои аббревиатуры будете у студентов спрашивать, если допустят до приема экзаменов.


lol.gif

1. Кто первым стал автором методики культивирования в PBMC? Не знаю, никогда не интересовался. Протоколов культивирования ВИЧ - полон интернет.
2. Что такое IRB я спросил потому, что именно этот комитет обычно занимается вопросами этики исследований. А раз вы даже с аббревиатурой незнакомы, то и о принципах этики медицинских исследований ничего не знаете.
3. Я и без изобретателя ПЦР прекрасно вижу, что в вашей аргументации нет никакой науки. Одни спекуляции и ссылки на этические вопросы, суть которых вам не ясна.

Трансплантация ВИЧ-резистентности
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 07.04.2016 11:19  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1613306  |  Ответов: 189  |  Просмотров: 78 272
(NMR-guy @ 06.04.2016 12:32)
Ссылка на исходное сообщение  Вы, похоже, врач по образованию, алекс100, простите что нагрузил сверх меры.
Вещи Вы пишете довольно странные, начинаете оправдываться и отрицать очевидное.

Экспериментальные модели устойчивых вирусов получить и не удастся, поскольку ВИЧ не культивируется, насколько я помню, а в продажу препарат еще не поступил - откуда бы взяться устойчивым штаммам? Это всегда дело времени. Как подсказывает реальность, штаммы начинают возникать обычно близко к окончанию патента на новый препарат. Ну, и обычно сразу за возникновением находится новый уникальный инновационный препарат, который всё уникально-эффективно побеждает. Это обычная цыганщина, только чудовищно крупномасштабная, и потому незаметная. Кто ж усомнится в эффективности, если КИ сделаны так, что всё подтвердили? Находятся среди тех, кто их проводит, до сих пор и честные люди, которые иногда не подписывают откровенный фальсификат, но их не продвигают. А тех, кого такие испытания продвинули, начинают всю мерзость нагло отрицать (даже не договариваясь между собой! страх за взятые обязательства и кредиты всегда перевешивает.) и не терпеть тех, кто поступает по-другому.

Потому, пенициллины с ампициллинами перестают работать, а сколько времени еще проработают фторхинолоны - неизвестно. Но новые работающие драги - это все больше уникальные случаи, а на новые аспирины и парацетамолы уже очень давно по загадочным причинам никто не натыкается. wink.gif


Уважаемый, гонору убавьте и не позорьтесь, а то на Шарикова больно смахиваете.
То что вы тут нагородили свидетельствует о том что вы вообще не в теме.
Вирус уже более 30 лет культивируют причем в промшленных масштабах. ИФА первого поколения и иммуноблот на основе лизата вируса делаются.
Про врачей и "нагрузил сверх меры" просто смешно. Ваши аргументы и близко с настоящей наукой не стояли. Бабкины суждения на лавке, а не аргументы. Спорим вы даже не в курсе что такое IRB?

Трансплантация ВИЧ-резистентности
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 04.04.2016 13:15  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1612653  |  Ответов: 189  |  Просмотров: 78 272
(Alex100 @ 04.04.2016 14:22)
Ссылка на исходное сообщение  Вот, может быть интересно будет: http://www.croiconference.org/sessions/lon...-or-prophylaxis

Особенно поразила фраза : "MK-8591 QW oral and long-acting parenteral formulations with potential for six months or longer duration would represent a potential paradigm shift as a single agent for prevention of HIV infection"

Т.е. по сути речь идет о вполне обоснованных надеждах получить препарат для моно(ди) терапии с дозированием один раз в полгода-год и возможно будет не только прорыв в удобстве и качестве жизни больных, но и с приверженностью все будет в основном ок.
Во всяком случае надежды есть.


это круто!
спасибо

какой ифа вошер выбрать?
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 31.03.2016 08:58  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1611852  |  Ответов: 3  |  Просмотров: 1 640
с биосаном не работал

Статфакс в соотношении цена/качество - норм. За такую цену грех требовать чего-то большего.

Подсчет клеток
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 25.03.2016 08:38  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1610609  |  Ответов: 5  |  Просмотров: 1 944
объем в маленькой клетке - 0,00025 мкл или 1/4000 мкл

Стандартизировать мениски в 96-луночном планшете
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 24.03.2016 14:50  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1610504  |  Ответов: 10  |  Просмотров: 2 362
А в каком режиме читаете?
Endpoint, kinetic, linear scanning?

Как стерилизуют глицерин?
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 11.03.2016 13:57  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1608185  |  Ответов: 52  |  Просмотров: 18 887
(ship @ 11.03.2016 16:32)
Ссылка на исходное сообщение  это тоже бессмысленно. например, по моему протоколу из 200 мл LB в конечном итоге получается 6 мл компетешек, которые аликвотятся по 100 мкл.
6 мл - это глицерин, магний,кальций хлориды и ацетат. каждый из них стерилизуется отдельно и хранится годы. поэтому фильтровать среду для заморозки не имеет смысла,  тому же объем слишом мал.
мне почему-то кажется, что вы сами ни разу не делали компетентные клетки.


вам не кажется, компетентными клетками не занимался. вроде как в условиях задачи про это ничего не сказано.

а вот среды и растворы стерилизовал фильтрацией.

Как сделать простейший магнитный штатив?
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 11.03.2016 13:17  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1608178  |  Ответов: 184  |  Просмотров: 128 620
(пацанчег @ 11.03.2016 16:14)
Ссылка на исходное сообщение  Или сразу берите вылизанный и раза в 3 более дорогой робот эппендорф, если Вы не в России.

И привязывайтесь к его фирменной расходке. О них ничего плохого ни от кого не слышал в плане работы. Только о цене... smile.gif


примерно сколько?

Как сделать простейший магнитный штатив?
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 11.03.2016 13:16  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1608177  |  Ответов: 184  |  Просмотров: 128 620
(пацанчег опять же @ 11.03.2016 16:09)
Ссылка на исходное сообщение  Не иногда, а регулярно. А то что у них нет спец. службы, долизывающей приборы и обновляющей микрокод, как только то-то вычищает очередной их ляп (большинство которых находится в стандартном библиотечном управлении работой манипулятора жидкостей), - это большая проблема.

Азато - захотите с ними связываться если, сразу нанимайте программиста с их сертификатом обучения. Иначе Вам конец.


Инженер сертифицированный имеется, но все равно после такой рекомендации связываться боязно. Тут с ИФА геморр, а с экстракцией что начнется? Мне еще только кросс-контаминации не хватало ))))

Как стерилизуют глицерин?
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 11.03.2016 13:10  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1608175  |  Ответов: 52  |  Просмотров: 18 887
(ship @ 11.03.2016 15:44)
Ссылка на исходное сообщение  это вы предлагаете 100% глицерин фильтровать?


см. последнюю строчку.
я предлагаю фильтровать уже готовую среду. ибо не вижу причин париться со стерилизацией ингридиентов

Как стерилизуют глицерин?
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 11.03.2016 12:31  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1608161  |  Ответов: 52  |  Просмотров: 18 887
Есть такие вот 0,22 uМ фильтры. У нас они были объемом до 500 мл.

user posted image

Подключаешь к вакуумному насосу и все быстро фильтруется и перетекает в нижнюю емкость. Закручивается крышка и вуаля!
Мы фильтровали жидкие питательные среды. Думаю что и с глицерином проблем не будет.
Кстати в вашем случае, может лучше приготовить среду с глицерином, а потом профильтровать?

Трансплантация ВИЧ-резистентности
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 11.03.2016 12:19  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1608157  |  Ответов: 189  |  Просмотров: 78 272
(genseq @ 11.03.2016 13:56)
Ссылка на исходное сообщение  Немного о резистентности ВИЧ к ВААРТ:
"Высокая мутационная активность ВИЧ и необходимость длительного применения приводят к появлению и все более широкому распространению лекарственно-устойчивых штаммов вируса. В настоящее время в некоторых регионах России распространенность лекарственно-устойчивых форм ВИЧ достигает 6%.
В области тестирования все более актуальной становится разработка быстрых тестов определения лекарственной чувствительности ВИЧ, позволяющих своевременно назначать и изменять схемы лечения с учетом лекарственной чувствительности вируса."


Цитата взята из разрабатываемого проекта "Стратегии противодействия ...":


Непонятно, имеется в виду первичная резистентность среди тех, кто еще не получал АРТ (т.е. заражены уже резистентным штаммом) или те у кого развилась резистентность в процессе лечения?
Первое вероятнее, учитывая что первичная резистентность в Европе 8-10%, но у них В-субтип, а в РФ более распространен А-субтип, который менее вариабелен.

Как сделать простейший магнитный штатив?
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 11.03.2016 11:59  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1608150  |  Ответов: 184  |  Просмотров: 128 620
(Guest @ 11.03.2016 02:04)
Ссылка на исходное сообщение  Роботы у них, дейтсвительно с открытым кодом и протоколами управления, встравиваются куда угодно (в теории!) и в которые можно напихать хоть печек, хоть насосов, хоть трясучек с подогревом. Walk away это системы. Но сырые пока. Потому все тратят свое время и деньги на их доработку, а текан стрижет прибыль и не заморачивается вообще ничем.


Я просто несколько негативных отзывов слышал об их ИФА автоматах. К каждому приставлен лаборант, чтобы следил за ходом постановки. Потому как, иногда бывает, портачат.

Как сделать простейший магнитный штатив?
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 11.03.2016 11:54  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1608145  |  Ответов: 184  |  Просмотров: 128 620
(avial @ 11.03.2016 11:22)
Ссылка на исходное сообщение  Евы их обычные, как-будто у них моделей прям сто штук. Отзывов нет, их не на попробовать берут и лайки в фейсбучеке понаставить, а в продакшен. Странно, что для кого-то это откровение.


Моделей у них не сотня конечно, но достаточно и в различных форматах. Я думал у вас есть опыт работы с ними в КДЛ. Поэтому хотел узнать какая модель наиболее оптимальная на среднюю лабораторию. Лайки мне ни к чему, а вот преимущества и недостатки хотел бы знать.
Если я вас так раздражаю своими вопросами, то отвечать не надо. Спасибо и на том.

Как сделать простейший магнитный штатив?
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 10.03.2016 13:25  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1607926  |  Ответов: 184  |  Просмотров: 128 620
(avial @ 10.03.2016 16:06)
Ссылка на исходное сообщение  У теканов открытая система, под них уже все кому не лень наделали и наборов, и протоколов.


я имею в виду, что за модель?
какие отзывы? действительно "walk away" система или как в случае с xiril надо следить, чтобы ничего не пропустил

Как сделать простейший магнитный штатив?
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 10.03.2016 07:45  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1607892  |  Ответов: 184  |  Просмотров: 128 620
(avial @ 10.03.2016 02:09)
Ссылка на исходное сообщение 
А в кдлах уже давно теканы стоят, за них не беспокойтесь.


пардон, Теканы? А что, австрийцы уже делают аппараты для автоматической экстракции? Можно поподробнее?

Как сделать простейший магнитный штатив?
Azato2000
Постоянный участник


Отправлено: 10.03.2016 07:41  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1607890  |  Ответов: 184  |  Просмотров: 128 620
(Panaev @ 09.03.2016 13:16)
Ссылка на исходное сообщение  Я видел совсем другие штативы от Беста.
Там особенность в том, что используется одна магнитная вставка, а тонкие полистироловые штативы просто на неё одеваются вместе с пробирками на нужном этапе.


Скоро расскажу мнение лаборантов, у которых будет шанс сравнить штативы уважаемого genseqа и Вектор-Бест.
страницы (9):  1 2 3 > »  

Новые сообщения  Есть новые сообщения
Нет новых сообщений  Нет новых сообщений
Нет новых сообщений*  Тема с вашим участием
Горячая тема - новые сообщения  Горячая тема (есть новые сообщений)
Горячая тема - нет новых сообщений  Горячая тема (нет новых сообщений)
Важно - нет новых сообщений  Важная тема
Опрос - есть новые голоса  Опрос — есть новые голоса
Опрос - нет новых голосов  Опрос — нет новых голосов
Опрос -нет новых голосов  Опрос с вашим участием
Объявление  Объявление
Тема закрыта  Закрытая тема
Тема перемещена  Перемещённая тема


Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.04.24 21:37
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft