Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Нужна помощь с пробоподготовкой ПЦР ВИЧ TaqMan | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 23.02.2017 08:20 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1658330 |
Ответов: 5 |
Просмотров: 3 462
мда
|
Нужна помощь с пробоподготовкой ПЦР ВИЧ TaqMan | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 22.02.2017 11:03 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1658217 |
Ответов: 5 |
Просмотров: 3 462
(Panaev @ 22.02.2017 13:50) Я может чего не знаю, но сорбция - это метод экстракции, а ТакМан - это метод детекции ампликонов и эти вещи не взаимоисключающие. Пока ваш вопрос выглядит как "Летели два крокодила. Один на север, другой зеленый...". Спасибо за поправку полное название теста: COBAS® TaqMan® HIV-1 Test, v2.0. По привычке и набор и аппарат называем ТакМанами |
Нужна помощь с пробоподготовкой ПЦР ВИЧ TaqMan | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 22.02.2017 08:03 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1658192 |
Ответов: 5 |
Просмотров: 3 462
Образцы плазмы, стабилизированные RNAlater (стабилизатор/общий объем = 2/3) тестируем с помощью разных ПЦР тест-систем/платформ. При экстракции методом сорбции все идет гладко. А вот с COBAS® TaqMan® HIV-1 Test, v2.0. получаем много невалидных результатов. Пишет QS_INVALID.
Стабилизированная плазма имеет консистенцию кефира)))) и мне кажется фильтры забиваются при выделении РНК. Что по вашему можно сделать? Почитал статьи. У людей проблем нет, в главах "Материалы и Методы" тоже ничего нет. Может они все таки как то модифицируют процедуру экстракции? |
Как сделать простейший магнитный штатив? | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 26.04.2016 09:00 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1616789 |
Ответов: 184 |
Просмотров: 128 620
Приехал штатив
|
Как сделать простейший магнитный штатив? | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 15.04.2016 13:47 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1614989 |
Ответов: 184 |
Просмотров: 128 620
|
Трансплантация ВИЧ-резистентности | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 15.04.2016 07:28 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1614927 |
Ответов: 189 |
Просмотров: 78 272
(Alex100 @ 15.04.2016 09:19) Вот и я все о том же! а тут все СПИД, СПИД. Я им "да нурафен-ультра выпейте и все" а они мне "нет, нет, что Вы! фармкомпании же в общемировом заговоре! только гильотина!" Ну я бы не стал сравнивать ВИЧ с другими хроническими инфекциями. Препараты надо принимать постоянно, отсюда две большие проблемы: 1. Токсичность препаратов 2. Низкая приверженность Вторая проблема будет практически решена, если удастся сделать препараты действующие полгода. Для практикующих врачей центров СПИД это будет просто манна небесная. И лабораторным сотрудникам меньше геморра и склок с лечащими врачами |
Трансплантация ВИЧ-резистентности | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 15.04.2016 07:20 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1614926 |
Ответов: 189 |
Просмотров: 78 272
(NMR-guy @ 15.04.2016 01:46) Это что, по-Вашему, хорошо работающие и простые культивационные протоколы обсуждаются? Когда чувак едет учиться в другую лабу специально, чтобы узнать как HIV культивировать? Это что, такая наука, которую передают не статьями, а обучением тайным знаниям? 1. Кто вам сказал, что они простые? Они, на минуточку только в лабораториях BSL3 делаются. 2. Учиться в лабе, где методика уже поставлена на ноги - нормальная практика. 3. Какие тайные знания? Есть много нюансов, которые не прописываются в статьях, но есть в СОП, с которыми можно ознакомиться только на месте. Плюс конечно организация процесса и практический опыт местного персонала |
Трансплантация ВИЧ-резистентности | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 14.04.2016 11:10 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1614741 |
Ответов: 189 |
Просмотров: 78 272
(NMR-guy @ 12.04.2016 23:56) 1. Просто наглая ложь. Интернет полон осторожными мнениями, что ВИЧ крайне сложно (если вообще возможно) культивировать в культурах клеток. И в них он по какой-то причине ведет себя не так как в организме. |
Трансплантация ВИЧ-резистентности | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 11.04.2016 07:30 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1614022 |
Ответов: 189 |
Просмотров: 78 272
(NMR-guy @ 08.04.2016 05:54) Если Вы верите, что он культивируется вне зараженных людей - прошу опубликовать ФИО первого, кому это удалось. И желательно ссылку на статью. За настоящую науку в Вашем понимании - это к изобретателю ПЦР-а как метода Кэрри Маллису. Он Вам и всем подобным свободно обоснует, почему нельзя наживаться на враках. Или он тоже не ученый с Вашей Высокой Точки Зрения? Свои аббревиатуры будете у студентов спрашивать, если допустят до приема экзаменов. 1. Кто первым стал автором методики культивирования в PBMC? Не знаю, никогда не интересовался. Протоколов культивирования ВИЧ - полон интернет. 2. Что такое IRB я спросил потому, что именно этот комитет обычно занимается вопросами этики исследований. А раз вы даже с аббревиатурой незнакомы, то и о принципах этики медицинских исследований ничего не знаете. 3. Я и без изобретателя ПЦР прекрасно вижу, что в вашей аргументации нет никакой науки. Одни спекуляции и ссылки на этические вопросы, суть которых вам не ясна. |
Трансплантация ВИЧ-резистентности | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 07.04.2016 11:19 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1613306 |
Ответов: 189 |
Просмотров: 78 272
(NMR-guy @ 06.04.2016 12:32) Вы, похоже, врач по образованию, алекс100, простите что нагрузил сверх меры. Вещи Вы пишете довольно странные, начинаете оправдываться и отрицать очевидное. Экспериментальные модели устойчивых вирусов получить и не удастся, поскольку ВИЧ не культивируется, насколько я помню, а в продажу препарат еще не поступил - откуда бы взяться устойчивым штаммам? Это всегда дело времени. Как подсказывает реальность, штаммы начинают возникать обычно близко к окончанию патента на новый препарат. Ну, и обычно сразу за возникновением находится новый уникальный инновационный препарат, который всё уникально-эффективно побеждает. Это обычная цыганщина, только чудовищно крупномасштабная, и потому незаметная. Кто ж усомнится в эффективности, если КИ сделаны так, что всё подтвердили? Находятся среди тех, кто их проводит, до сих пор и честные люди, которые иногда не подписывают откровенный фальсификат, но их не продвигают. А тех, кого такие испытания продвинули, начинают всю мерзость нагло отрицать (даже не договариваясь между собой! страх за взятые обязательства и кредиты всегда перевешивает.) и не терпеть тех, кто поступает по-другому. Потому, пенициллины с ампициллинами перестают работать, а сколько времени еще проработают фторхинолоны - неизвестно. Но новые работающие драги - это все больше уникальные случаи, а на новые аспирины и парацетамолы уже очень давно по загадочным причинам никто не натыкается. Уважаемый, гонору убавьте и не позорьтесь, а то на Шарикова больно смахиваете. То что вы тут нагородили свидетельствует о том что вы вообще не в теме. Вирус уже более 30 лет культивируют причем в промшленных масштабах. ИФА первого поколения и иммуноблот на основе лизата вируса делаются. Про врачей и "нагрузил сверх меры" просто смешно. Ваши аргументы и близко с настоящей наукой не стояли. Бабкины суждения на лавке, а не аргументы. Спорим вы даже не в курсе что такое IRB? |
Трансплантация ВИЧ-резистентности | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 04.04.2016 13:15 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1612653 |
Ответов: 189 |
Просмотров: 78 272
(Alex100 @ 04.04.2016 14:22) Вот, может быть интересно будет: Особенно поразила фраза : "MK-8591 QW oral and long-acting parenteral formulations with potential for six months or longer duration would represent a potential paradigm shift as a single agent for prevention of HIV infection" Т.е. по сути речь идет о вполне обоснованных надеждах получить препарат для моно(ди) терапии с дозированием один раз в полгода-год и возможно будет не только прорыв в удобстве и качестве жизни больных, но и с приверженностью все будет в основном ок. Во всяком случае надежды есть. это круто! спасибо |
какой ифа вошер выбрать? | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 31.03.2016 08:58 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1611852 |
Ответов: 3 |
Просмотров: 1 640
с биосаном не работал
Статфакс в соотношении цена/качество - норм. За такую цену грех требовать чего-то большего. |
Подсчет клеток | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 25.03.2016 08:38 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1610609 |
Ответов: 5 |
Просмотров: 1 944
объем в маленькой клетке - 0,00025 мкл или 1/4000 мкл
|
Стандартизировать мениски в 96-луночном планшете | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 24.03.2016 14:50 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1610504 |
Ответов: 10 |
Просмотров: 2 362
А в каком режиме читаете?
Endpoint, kinetic, linear scanning? |
Как стерилизуют глицерин? | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 11.03.2016 13:57 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1608185 |
Ответов: 52 |
Просмотров: 18 887
(ship @ 11.03.2016 16:32) это тоже бессмысленно. например, по моему протоколу из 200 мл LB в конечном итоге получается 6 мл компетешек, которые аликвотятся по 100 мкл. 6 мл - это глицерин, магний,кальций хлориды и ацетат. каждый из них стерилизуется отдельно и хранится годы. поэтому фильтровать среду для заморозки не имеет смысла, тому же объем слишом мал. мне почему-то кажется, что вы сами ни разу не делали компетентные клетки. вам не кажется, компетентными клетками не занимался. вроде как в условиях задачи про это ничего не сказано. а вот среды и растворы стерилизовал фильтрацией. |
Как сделать простейший магнитный штатив? | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 11.03.2016 13:17 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1608178 |
Ответов: 184 |
Просмотров: 128 620
|
Как сделать простейший магнитный штатив? | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 11.03.2016 13:16 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1608177 |
Ответов: 184 |
Просмотров: 128 620
(пацанчег опять же @ 11.03.2016 16:09) Не иногда, а регулярно. А то что у них нет спец. службы, долизывающей приборы и обновляющей микрокод, как только то-то вычищает очередной их ляп (большинство которых находится в стандартном библиотечном управлении работой манипулятора жидкостей), - это большая проблема. Азато - захотите с ними связываться если, сразу нанимайте программиста с их сертификатом обучения. Иначе Вам конец. Инженер сертифицированный имеется, но все равно после такой рекомендации связываться боязно. Тут с ИФА геморр, а с экстракцией что начнется? Мне еще только кросс-контаминации не хватало )))) |
Как стерилизуют глицерин? | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 11.03.2016 13:10 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1608175 |
Ответов: 52 |
Просмотров: 18 887
|
Как стерилизуют глицерин? | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 11.03.2016 12:31 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1608161 |
Ответов: 52 |
Просмотров: 18 887
Есть такие вот 0,22 uМ фильтры. У нас они были объемом до 500 мл.
Подключаешь к вакуумному насосу и все быстро фильтруется и перетекает в нижнюю емкость. Закручивается крышка и вуаля! Мы фильтровали жидкие питательные среды. Думаю что и с глицерином проблем не будет. Кстати в вашем случае, может лучше приготовить среду с глицерином, а потом профильтровать? |
Трансплантация ВИЧ-резистентности | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 11.03.2016 12:19 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1608157 |
Ответов: 189 |
Просмотров: 78 272
(genseq @ 11.03.2016 13:56) Немного о резистентности ВИЧ к ВААРТ: "Высокая мутационная активность ВИЧ и необходимость длительного применения приводят к появлению и все более широкому распространению лекарственно-устойчивых штаммов вируса. В настоящее время в некоторых регионах России распространенность лекарственно-устойчивых форм ВИЧ достигает 6%. В области тестирования все более актуальной становится разработка быстрых тестов определения лекарственной чувствительности ВИЧ, позволяющих своевременно назначать и изменять схемы лечения с учетом лекарственной чувствительности вируса." Цитата взята из разрабатываемого проекта "Стратегии противодействия ...": Непонятно, имеется в виду первичная резистентность среди тех, кто еще не получал АРТ (т.е. заражены уже резистентным штаммом) или те у кого развилась резистентность в процессе лечения? Первое вероятнее, учитывая что первичная резистентность в Европе 8-10%, но у них В-субтип, а в РФ более распространен А-субтип, который менее вариабелен. |
Как сделать простейший магнитный штатив? | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 11.03.2016 11:59 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1608150 |
Ответов: 184 |
Просмотров: 128 620
(Guest @ 11.03.2016 02:04) Роботы у них, дейтсвительно с открытым кодом и протоколами управления, встравиваются куда угодно (в теории!) и в которые можно напихать хоть печек, хоть насосов, хоть трясучек с подогревом. Walk away это системы. Но сырые пока. Потому все тратят свое время и деньги на их доработку, а текан стрижет прибыль и не заморачивается вообще ничем. Я просто несколько негативных отзывов слышал об их ИФА автоматах. К каждому приставлен лаборант, чтобы следил за ходом постановки. Потому как, иногда бывает, портачат. |
Как сделать простейший магнитный штатив? | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 11.03.2016 11:54 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1608145 |
Ответов: 184 |
Просмотров: 128 620
(avial @ 11.03.2016 11:22) Евы их обычные, как-будто у них моделей прям сто штук. Отзывов нет, их не на попробовать берут и лайки в фейсбучеке понаставить, а в продакшен. Странно, что для кого-то это откровение. Моделей у них не сотня конечно, но достаточно и в различных форматах. Я думал у вас есть опыт работы с ними в КДЛ. Поэтому хотел узнать какая модель наиболее оптимальная на среднюю лабораторию. Лайки мне ни к чему, а вот преимущества и недостатки хотел бы знать. Если я вас так раздражаю своими вопросами, то отвечать не надо. Спасибо и на том. |
Как сделать простейший магнитный штатив? | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 10.03.2016 13:25 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1607926 |
Ответов: 184 |
Просмотров: 128 620
|
Как сделать простейший магнитный штатив? | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 10.03.2016 07:45 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1607892 |
Ответов: 184 |
Просмотров: 128 620
|
Как сделать простейший магнитный штатив? | |
Azato2000 Постоянный участник |
Отправлено: 10.03.2016 07:41 |
Молекулярная и клеточная биология |
link: #1607890 |
Ответов: 184 |
Просмотров: 128 620
(Panaev @ 09.03.2016 13:16) Я видел совсем другие штативы от Беста. Там особенность в том, что используется одна магнитная вставка, а тонкие полистироловые штативы просто на неё одеваются вместе с пробирками на нужном этапе. Скоро расскажу мнение лаборантов, у которых будет шанс сравнить штативы уважаемого genseqа и Вектор-Бест. |
страницы (9): 1 2 3 > » |
Есть новые сообщения Нет новых сообщений Тема с вашим участием |
Горячая тема (есть новые сообщений) Горячая тема (нет новых сообщений) Важная тема |
Опрос — есть новые голоса Опрос — нет новых голосов Опрос с вашим участием |
Объявление Закрытая тема Перемещённая тема |