Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
formamid |
В прикрепленном файле инструкция к набору, если кто заинтересуется. Файл/ы:
|
formamid |
|
Ъ IP-штамп: frh5mdI9nB8Yg гость |
Аксиген производит второсортный пластик, а уж киты для молбиологии - побочное производство с ворованными протоколами. Если на порядок меньше заявленного - кричите караул. "Выделенную РНК" нанесите на аналитический форез - может быть у вас ДНК выделилась! Если пользоваться Тризолом, но умеючи, выделится РНК без сюрпризов. |
formamid |
|
Тяни-толкай Постоянный участник |
10-15 нг/мкл вполне можно получить, если исходного материала мало. Я бы а) позвонила бы представителю аксигена, может они чего знают, может у них бетч плохой попался; б) выделила параллельно тризолом, ну или каким другим знакомым китом и сравнила бы качество и количество на выходе. Не знаю как за весь пластик, но пробирки и типы у них вполне на уровне. |
Ъ IP-штамп: frh5mdI9nB8Yg гость |
Сравнивайте и убеждайтесь. |
Guest IP-штамп: frDQwa9k7riYg гость |
(Ъ @ 30.06.2009 15:32) Еще раз добавлю: киты аксигена - какашки, завернутые в красивую обертку. Про пластик тоже добавлю - не все то золото, что блестит. Имхо, зарекся не связываться! Ширпотреб для дураков, одним словом. Сравнивайте и убеждайтесь. с чем сравнивать предлагаете? Я имею в виду пластик, из тех, что можно купить в России. |
Guest IP-штамп: frqn2O0O1LzaQ гость |
|
formamid |
|
Guest IP-штамп: frFRDR.dxMo.Y гость |
|
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
Этот чи толи. Там написано 5-7мкг. -YellowSolve Я знаю производителя у него плохо со стабильным воспроизведением реагента. |
ship Постоянный участник Moscow |
|
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
-Нескока сотен ПЦРов в их пробирках и вот теперь даже не знаю доверять ли результатам.... Поц-э-э-ровым не доверять всем и О-хуген и всем остальным! У них фамилиЁ не исконное. |
Тяни-толкай Постоянный участник |
|
distemper Постоянный участник |
|
Vadim Sharov Постоянный участник Россия |
Господин Ъ основные претензии имеет к планшетам, а не к наконечникам и пробиркам. По китам: уважаемый Ъ, предоставьте на пробу свой кит, пожалуйста, сравним с ахугеновским По теме вопроса: выделите вручную, проверьте количество РНК. |
formamid |
Надо было создать тему: "Пластик от Axygen - отзывы бывалых" |
guest: ммм IP-штамп: frdsQJwk7r3sc гость |
Вообще, если вы пользуете кит задавать вопросы: "Почему у меня не получается" или "что я делаю не так". Имеет смысл только производителю. НЕ НАВИЖУ любые закрытые киты. Ибо если бы производитель сидел у меня в лабе, то мило, а так дистанционный разбор полетов превращается в пустую трату времени и денег. А пластик... Вы народ, смайлики читать умеете? Кстати шутка была воообще про ПЦР, а не про пластик. |
Ъ IP-штамп: frh5mdI9nB8Yg гость |
Коллеги, ну нельзя покупать что попало у кого попало. Для выделения РНК, и не только выделения, рекомендую Амбион (входит в состав АБИ-Инвитрогена). Ну, если хотите экономить, пропись Тризола я недавно давал на форуме (поиск на этой же странице справа вверху) - это самый оптимальный вариант. Про побочную продукцию Аксигена повторяться не буду - я высказываю мнение пользователей. Про пластик и не по теме...Аксиген бессовестно врет и пользуется демпингом: -max recovery пластик - то же самое, что и немах, но обильно смазанное гидрофобной бякой... -0,5 ПЦР пробирки настолько низкие, что... подходит наверное только под терцик. - пишут под АБИ совместимость, но на самом деле или застревают или же явно не достают дна , - плашки настолько жесткие, что невозможно из резать ножницами... И так и далее... Да. пластик очень прозрачный. ну просто КРИСТАЛЛ! Но для меня важнее теплопроводность, а не то что как пробирки блестят. Но есть и плюс, но единственный - пробирки 1,5 настолько туго закрываются, аж со скрипом, что кипятить в них можно без всяких последствий... захочешь не откроешь. Рекомендую Литеху и ДНК технологии свои уникальные ДНК экспрессы в них раскапывать Немножно отвлекся, пардон. Пластик пока могу рекомендовать АБГен, хотя тоже до конца не испытал.... |
formamid |
(Ъ @ 01.07.2009 13:44) Ну, теперь из БиоРада сделали фирму-специалиста по РНК. Ну ваще Если речь шла о глюкозе и мочевине, я бы промолчал. Коллеги, ну нельзя покупать что попало у кого попало. Для выделения РНК, и не только выделения, рекомендую Амбион (входит в состав АБИ-Инвитрогена). Пластик пока могу рекомендовать АБГен, хотя тоже до конца не испытал.... Все побежали за китами от инвитрогена и амбиона...ну-ну... Скажу еще раз для особо внимательных : у Bio-Rad были и сейчас есть очень хорошие киты для выделения НК и все тут. Никто специалистом Bio-Rad не провозглашал. Если нравится Инвитроген - бог в помощь, можно и Амбион. Можно Qiagen, наконец, рекомендовать - это еще "лучше" (20000 руб на 20 выделений). Пластик от Axygen - очень хороший. Пробирки просто отличные, причем самые разные с плотно притертыми крышками и менее плотно "сидящие". Плашки есть, как те, что режутся, так и монолитные. Вы, кажется рекомендовали АБГен, но пока не испытывали. Значит весь остальной существующий пластик - барохло, да и АБГен возможно тоже? |
Ъ IP-штамп: frh5mdI9nB8Yg гость |
Откровенно скажу, что никакие киты я не покупаю для текущей работы, а при необходимости я их делаю сам по своим протоколам (ну, может быть кроме Тризола...). И посылаю подальше продавцов типа Аксигена и Кайгена... Очень ценю мнение пользователей таких как Вы, а Вы, как пользователь с негативным опытом, не первый и далеко не последний на форуме сайта. Про пластик... ну и что я долго выбираю поставщика? И делюсь мнением - да, на АБГене на данный момент мой выбор. Если удасться еще больше снизить цены для России, подскажу где покупать. С уважением, Ъ |
formamid |
|
guest: ммм IP-штамп: frdsQJwk7r3sc гость |
А мне нет. мне оно показалось закономерным. |
formamid |
Я просканировал сайты некоторых производителей китов по выделению РНК из небольших объемов крови человека (Qiagen, Ambion, Promega...), но без учета наборов в 96-луночном формате и для выделения на автоматических станциях. Решил поделиться полученной информацией Сначала о китах от Ambion. Производят набор RiboPure (есть еще множество наборов, но рассчитанные на большие обёмы крови). Получаемая концентрация РНК, этим набором RiboPure 2-4мкг из 500 мкл крови. Теперь о промеговских. У промеги я не нашел наборов, специально разработанных для выделения РНК из крови. Но есть SV Total RNA Isolation System, кот-й якобы может использоваться для выделения из образцов цельной крови. На сайте promega.com дана ссылка на статью Kephart, D. and Shenoi, H. (1999) Can the SV RNA Isolation System be used to purify RNA from frozen, unprocessed whole blood? согласно которой из 200 мкл свежей крови выход РНК составил 2.26 мкг. Наконец Qiagen. У них есть набор QIAamp® RNA Blood Mini. Набор рассчитан на выделения из 1 мл образца. Выход РНК 3 мкг. Важно, что протоколы от Promega, Qiagen, Ambion и Axygen очень похожи. Так, что следует говорить не о побочном производстве с ворованными протоколами, а об использовании единой технологии, но под разными марками. Каждый производитель лишь вносит некоторые изменения. Теперь, что касается Axygen - я проделал серию выделению с подогретым элюентом (60 мкл) до Т 70С (ранее пробовал до 50С, что неправильно). В результате концентрация во всех образцах была около 50 мкг/мл, общий выход составил в каждом образце около 3 мкг. A260/280 1.8. Вывод напрашивается сам собой - киты от Аксигена не уступают вышеперечисленным. А мои сомнения по поводу количества РНК оказались ошибочными. Одна ремарка, на сайте axygen.com указано, что на 1 колонке набора AxyPrep blood Total RNA Miniprep Kit связывается до 100 мкг РНК(!!!). Но это лишь теоретически, поскольку реально получить даже из 1 мл крови 100мкг РНК невозможно! Такая информация вводит в заблуждения. Большой плюс, что киты от Аксиген не так дороги. Сообщение было отредактировано formamid - 09.07.2009 15:25 |
Yuri K IP-штамп: frbSxBL61s/9I гость |
(Ъ @ 01.07.2009 12:44) LOL. I used to cut but this was so long ago that I totally forgot that plates can be cut...luxury corrupts, I guess. (Ъ @ 01.07.2009 12:44) Но есть и плюс, но единственный - пробирки 1,5 настолько туго закрываются, аж со скрипом, что кипятить в них можно без всяких последствий... захочешь не откроешь. I used their 1.5s, no complains. In fact, I was so pissed with VWR tubes that kept popping when heated or when freezing larger volumes that I specifically ordered 1.5s from Bio-Rad and Axy cause their caps are tight. As for the "stolen protocols" as far as I know the silica protocol is IP free, so it can't be stolen. |
Ъ IP-штамп: frNwv0U1khjS. гость |
(Yuri K @ 09.07.2009 16:05) As for the "stolen protocols" as far as I know the silica protocol is IP free, so it can't be stolen. Я же не говорю, что силика-протокол я придумал и Аксиген у меня спёр. В том то и дело, что их. протоколов, туева хуча, а Аксиген "придумал" свой, самый не удачный, ИМХО. От ДНК избавляются осождением изопропанолом, а супер с РНК наносит спин-колонку. Это же надо такое придумать. Да фиг с ним с протоколом, лишь бы РНК выделялась и, самое главное, работала. |
epsylonit Россия, Москва |
Делайте выводы, господа. Дедушкины методы, конечно, рулят, но время... 2 дня или 2 часа? |
Ъ IP-штамп: frSMNcAkVlNuk гость |
(epsylonit @ 10.07.2009 14:26) Вы не упомянули хороший кит для выделения РНК из крови от Zymo Research, коими торгует Русбиолинк. Я выделяю РНК и размороженной! (один раз, как правило) крови. Выделяла Invitek, Quiagen и ZR. Первые два очень похожи, выход из 1,5 мл около 200 нг, из свежей (2-3 часа в термосе, пока до лабы доеду) крови выделяется в 50 раз больше. ZR из 200 мкл крови даёт те же 200 нг. Пользовалась инвитрогеновским прибором для измерения концентрации НК Qubit. Делайте выводы, господа. Дедушкины методы, конечно, рулят, но время... 2 дня или 2 часа? Если это успех систематический, скажем в пяти дублях подряд, господа могут делать выводы - о, это класс! Я лично отношесь "к этому преимуществу" скептически - метод один и тот же, колоночки из одного источника. Но возможно ZR продвинулся с составои растворов. Но две последовательные колонки в одном выделении очень жирно. Да фиг с ним с колоночками, пусть хоть пять, лишь бы она была на выходе и живая. |
epsylonit Россия, Москва |
|
Ъ IP-штамп: frNwv0U1khjS. гость |
Рассказывайте сказки в другом месте - на микроколоночках РНКу, свободную от ДНКа, еще никому не удавалось выделить. Без специальной обработки. |
genseq Постоянный участник |
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
Ufa1688 Постоянный участник |
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
zxm123 Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |