Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Phusion
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! yack
moderator
Москва, Россия



 прочитанное сообщение 28.05.2004 15:04     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Интересует мнение научной общественности о Phusion полимеразе от MJ Research. Что это за зверь? Работает с ней кто-нибудь? У меня в принципе есть первые впечатления, но пока не хочу задавать тон, может кто с ней уже давно работает. Кстати, составы HF и GC буфферов в наборе кто-нибудь знает?
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 28.05.2004 17:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

А ее по-моему недавно запустили, никто и не работал wink.gif Так что задавайте тон, интересно, че-то она больно дешевая.

[Текст переведён с транслита]
Участник оффлайн! slava2001




 прочитанное сообщение 28.05.2004 20:51     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

MJ на грани банкротства, если уже не..того. Взяли с поличным за машинки их - не платили понимаешь за крышу Рошу и ABI. Поэтому и полимеразка дешевая хотя может быть хорошей - хватаются за соломинку. Иногда помогает - по себе знаю. А вообще - все давно уже открыто - полимеразки всякие разные теперь являются предметом пропаганды. Внутри все те же лошадки - Так-Пфу.
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 28.05.2004 22:49     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

В Германии эту полимеразу продает Finnzymes через BioCat. А внутри там что-то новое кажется, проспект надо глянуть.
Участник оффлайн! slava2001




 прочитанное сообщение 29.05.2004 02:30     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Да, в проспектике вам все и расскажут...
Критичнее надо быть, товаришч...
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 29.05.2004 14:27     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

Там оказывается в полимеразу из пирококкоса вшит ДНК-связывающий домен. Точность и процессивность обещают небывалую smile.gif
Ну так кто-нибудь работал с ней, стоит покупать?

[Текст переведён с транслита]
Участник оффлайн! gostya
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 29.05.2004 14:34     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

как показывает мой опыт, бывает либо точность, либо процессивность, но может они победили природу...
Участник оффлайн! Kokava
Участник



 прочитанное сообщение 30.05.2004 23:11     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Fusion? А разве его не Finzyme делает?

Пробавал я её... но что-то на человеческой геномной ДНК не удалось 4 кб получить. А весьма нужна была декларируемая точность.
Участник оффлайн! E.
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 30.05.2004 23:26     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

2 UTR:
Тоже пробовал.
нормально.
Бери.
Участник оффлайн! klav
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 19.12.2014 19:25     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

Продолжаем разговор smile.gif. Ест ли она праймеры с 5' конца?
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 19.12.2014 21:34     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

(klav @ 19.12.2014 20:25)
Ссылка на исходное сообщение  Продолжаем разговор smile.gif. Ест ли она праймеры с 5' конца?

Самый то ... через 10 лет yes.gif
Нет, не ест, но с 3-штрих - с большим аппетитом. smile.gif

Сообщение было отредактировано -Ъ- - 20.12.2014 18:58
Участник оффлайн! klav
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 19.12.2014 23:59     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

(-Ъ- @ 19.12.2014 22:34)
Ссылка на исходное сообщение  Самый то ... через 10 лет yes.gif
а что, как раз, ящитаю, опыт уже накопился, можно и поговорить smile.gif
Я ошибся, хотел написать 3`. Так сколько букв в секунду отъедает?
Участник оффлайн! klav
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 20.12.2014 22:16     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

(yorik @ 20.12.2014 22:22)
Ссылка на исходное сообщениевечные вопросы что делать и кто виноват
да да, что делать, если не клонируется, и кто из реактивов виноват smile.gif
Если phusion реально ест буквы с 3' конца - то с какой скоростью?
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 22.12.2014 15:56     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

(klav @ 20.12.2014 00:59)
Ссылка на исходное сообщение  а что, как раз, ящитаю, опыт уже накопился, можно и поговорить  smile.gif
Я ошибся, хотел написать 3`. Так сколько букв в секунду отъедает?

Надо ли Вам это, сомневаюсь confused.gif
То что она тупит концы Прдукта по ходу реакции и круто корректирует ошибки включения и при этом не спотыкается об шпильки - основное качество полимеразы.
Ну а если праймеры ваши горбатые с торчащими 3-штрих концами на шпильках и димерах - хана вашим праймерам. Объедает 3-концы и резко снижается выход продукта или вовсе блокирует реакцию. Правда, горячего старта у меня не было.
Популярно здесь:
https://www.neb.com/products/m0530-phusion-...rase#tabselect0
https://www.neb.com/products/m0530-phusion-...rase#tabselect1
https://www.neb.com/protocols/1/01/01/pcr-protocol-m0530
Участник оффлайн! klav
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 22.12.2014 16:36     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

(-Ъ- @ 22.12.2014 16:56)
Ссылка на исходное сообщение Ну а если праймеры ваши горбатые с торчащими 3-штрих концами на шпильках и димерах

Не, ну до такого я не докатился ещё smile.gif
(-Ъ- @ 22.12.2014 16:56)
Ссылка на исходное сообщение  Надо ли Вам это, сомневаюсь confused.gif

Ну, на самом деле, при клонировании, с любой полимеразой время от времени возникают текущие проблемы - в зависимости от ДНК-матриц, схемы клонирования, и т.д. Иногда и от особенностей полимеразы что-то зависит.
Вот я начал с phusion работать - уж хочется всё знать про неё. На всякий smile.gif
За ссылки спасибо. А Ваш личный опыт?

Сообщение было отредактировано klav - 22.12.2014 16:37
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 23.12.2014 16:11     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

(anna2 @ 23.12.2014 15:12)

Здесь у Биолайна http://www.bioline.com/ranger-dna-polymerase.html 3-пруфридин фермент с хотстартом, а тут http://www.bioline.com/accuzyme-mix.html - ФигВам smile.gif confused.gif
В первом случае, я думаю, это смесь Так с Pfu в большом избытке Так и соответствующих антител. Но большой вопрос подходят ли эти антитела к ферментам типа Pfu. confused.gif
Продукция Биолайна с "приветом из России" wink.gif .
пы сы
А почему Анна2, решил секс.ориентацию поменять? lol.gif
Участник оффлайн! Gubanov Sergey
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 24.12.2014 01:21     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

Продукция Биолайна с "приветом из России" wink.gif .
пы сы
beer.gif Почему из России? скорее из Германии
пы сы
ПФУ хотстарт - как рыбе зонтик tongue.gif
Участник оффлайн! klav
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 31.03.2015 15:01     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

Народ, ищу совета.
Phusion полимеразу добавляют последней, в горячую смесь, чтоб не подъедала праймеры.
Кто-нибудь пробовал не полимеразу, а праймеры добавлять последними - с этой же целью. А полимеразу - со всеми реактивами в общую смесь.
Влияет это ли на выход и специфичность ПЦР?
Участник оффлайн! RNK
Постоянный участник
СССР



 прочитанное сообщение 31.03.2015 15:22     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

не усложняйте себе жизнь, ни лёд, ни праймер после полимеразы добавлять не нужно.

полимераза не работает при комнатной температуре, но эксперимент надо делать быстро.

так что ставьте ПЦР с этой полимеразой, как и с любой другой полимеразой, на столе и без льда

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): klav
Участник оффлайн! klav
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 31.03.2015 15:33     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #20 множественное цитирование

Ну, лёд мне не особо усложняет жизнь smile.gif
Холодушка для ПЦР пробирок - вполне удобный штатив.
А праймер после полимеразы добавлять мне технически удобнее при градиентном ПЦР в объёме 20 мкл.
Короче, вы советуете всё (и полимеразу) мешать сразу.
Участник оффлайн! X34
Участник



 прочитанное сообщение 31.03.2015 16:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #21 множественное цитирование

(RNK @ 31.03.2015 16:22)
Ссылка на исходное сообщение  не усложняйте себе жизнь

именно, две-три (для спокойствия, а так и одной хватит) тиофосфорильных связей на 3' праймера. если это не сотни олигов в неделю то... shuffle.gif
Участник оффлайн! RNK
Постоянный участник
СССР



 прочитанное сообщение 31.03.2015 16:09     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #22 множественное цитирование

да, советую всё (и полимеразу) мешать сразу

вы просто ставьте эксперимент, и сами всё увидите

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): klav
Участник оффлайн! klav
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 02.04.2015 16:00     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #23 множественное цитирование

(RNK @ 31.03.2015 17:09)
Ссылка на исходное сообщение  да, советую всё (и полимеразу) мешать сразу
вы просто ставьте эксперимент, и сами всё увидите
ещё раз спасибо. Мешаю (но на льду) всё сразу, фрагменты нарабатываются нормально.
Участник оффлайн! ingecate

минск



 прочитанное сообщение 04.04.2015 12:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #24 множественное цитирование

Извините, но я вас не очень-то понимаю. В России полно фирм, которые варят прекрасные полимеразы. У Диалата есть «HF-Fuzz» ничем не хуже «Phusion». Та же модифицированная Pfu’ха, а по цене и скорости поставки (по крайней мере в Беларуси) лучше из премиум ферментов не найти. Кстати, у них есть и хот-старт форма («HS-Fuzz»), хотя Pfu’ха, если все быстренько делать, и так не успевает наделать преймер димеров.
Ну и добавлю, что и простые премиксы на Taq’е как у Синтола, так и у Диалата превосходят по качеству Fermentas, NEB и т.д.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Atropos
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 06.04.2015 10:51     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #25 множественное цитирование

(ingecate @ 04.04.2015 13:15)
Ссылка на исходное сообщение  
Ну и добавлю, что и простые премиксы на Taq’е как у Синтола, так и у Диалата превосходят по качеству Fermentas, NEB и т.д.

Неужели? eek.gif Приятно удивили. smile.gif
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 06.04.2015 10:54     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #26 множественное цитирование

(X34 @ 31.03.2015 17:04)
Ссылка на исходное сообщение  именно, две-три (для спокойствия, а так и одной хватит) тиофосфорильных связей на 3' праймера. если это не сотни олигов в неделю то... shuffle.gif

И какой смысл использования Фьюжина confused.gif Не тот случай защиты 3-штрих конца праймера.
Участник оффлайн! R.J.Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 06.04.2015 11:41     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #27 множественное цитирование

интересная дискуссия. А про точность миксов кто-нить скажет?
Участник оффлайн! ingecate

минск



 прочитанное сообщение 08.04.2015 21:44     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #28 множественное цитирование

Приходилось сиквенировать фрагменты заклоненые как с помощью Phusion, так и с помощью HS-Fuzz – обе работают отлично, буква в букву.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): klav
Участник оффлайн! ingecate

минск



 прочитанное сообщение 08.04.2015 22:57     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #29 множественное цитирование

(klav @ 31.03.2015 16:01)
Ссылка на исходное сообщение  Народ, ищу совета.
Phusion полимеразу добавляют последней, в горячую смесь, чтоб не подъедала праймеры.

Всегда думал, что полимеразу добавляют последней, чтобы димеры не образовывались, а про 3' подъедания праймеров никогда не задумывался. У кого-нибудь вообще такие проблемы хоть раз были?
Участник оффлайн! ASDF
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 08.04.2015 23:07     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #30 множественное цитирование

Мне у фьюжина нравится как в инструкции написано, что при хранении фьюжина на столе в течении 6 месяцев снижения активности замечено не было. Но хранить все равно на -20.
Участник оффлайн! klav
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 09.04.2015 00:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #31 множественное цитирование

ingecate, ну в инструкции прямо написано - добавлять её последней из-за 3-экзонуклеазной активности, в отсутствие буковок может подъедать праймеры.
Проблем у нас не было - но мы их и не искали smile.gif
Добавляем не просто последней, а даже в горячую смесь - для перестраховки, хотя в инструкции этого нет.
Участник оффлайн! klav
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 09.04.2015 00:51     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #32 множественное цитирование

(ingecate @ 08.04.2015 22:44)
Ссылка на исходное сообщение  Приходилось сиквенировать фрагменты заклоненые как с помощью Phusion, так и с помощью HS-Fuzz – обе работают отлично, буква в букву.
Ну дак - если уж наПЦР-илось, почему буквам теряться? wink.gif
Участник оффлайн! ingecate

минск



 прочитанное сообщение 09.04.2015 09:13     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #33 множественное цитирование

Да мы про точность ПЦР'а говорим, а не про потерю букв.
Если хотите про деградацию ДНК поговорить, то проверено: Phusion без дНТФ'ов грызет 3' еще как (пробовали ею затупить фрагмент после рестрикции -150 п.о. за 2 min на 72С). дНТФ дело исправляют.
Участник оффлайн! ingecate

минск



 прочитанное сообщение 09.04.2015 09:26     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #34 множественное цитирование

(klav @ 09.04.2015 01:48)
Ссылка на исходное сообщение  ingecate, ну в инструкции прямо написано - добавлять её последней из-за 3-экзонуклеазной активности, в отсутствие буковок может подъедать праймеры.
Проблем у нас не было - но мы их и не искали  smile.gif
Добавляем не просто последней, а даже в горячую смесь - для перестраховки, хотя в инструкции этого нет.

Проблем никто не ищет, они обычно сами находятся. Единственная проблема без хот-старта (даже в руках моих студентов) - праймер димеры. Если Вам не мешают - готовте премикс хоть на комнате (все компаненты), если мешают или хотите продукта побольше/почище и т.д. - готовте на льду (все компаненты). Этого более чем достаточно.
Добавлять последней в горячую смесь (если много параллельных опытов) - большая морока, да и разброс данных будет побольше, чем при приготовлении общего премикса.
Участник оффлайн! ingecate

минск



 прочитанное сообщение 09.04.2015 11:11     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #35 множественное цитирование

(yack @ 28.05.2004 16:04)
Ссылка на исходное сообщение  Интересует мнение научной общественности о Phusion полимеразе от MJ Research. Что это за зверь? Работает с ней кто-нибудь?

Да простят меня участники форума за 3 поста подряд, просто за Державу обидно 
«Phusion», фермент хоть и точный, но с dUTP работать отказывается (ингибируется), поэтому для больших ампликонов не годится.
«HS-Fuzz» ни капли не стесняется поднимать ампликон на 10 кб даже в руках у студентов.
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 09.04.2015 14:53     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #36 множественное цитирование

Хорошие студенты, ну и их руководители, wink.gif у Вас в Минске!
За Державу - большое спасибо. Аналогично! beer.gif
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 09.04.2015 14:55     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #37 множественное цитирование

(ingecate @ 09.04.2015 12:11)
Ссылка на исходное сообщение  Да простят меня участники форума за 3 поста подряд, просто за Державу обидно 
«Phusion», фермент хоть и точный, но с dUTP работать отказывается (ингибируется), поэтому для больших ампликонов не годится.
«HS-Fuzz» ни капли не стесняется поднимать ампликон на 10 кб даже в руках у студентов.

Этим постом Вы ответили на вопрос модератора 10-летней давности. yes.gif
Участник оффлайн! klav
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 09.04.2015 15:20     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #38 множественное цитирование

ingecate, поделитесь, димеризация праймеров как-то видна по результатам ПЦР?
Ну то есть, по тому или иному виду продукта можно понять, что плохой результат именно из-за неё?
NB: мой вопрос - не наезд, не тонкая издёвка, не толстые намёки, а просто вопрос человека, знающего про ПЦР не всё. Уточняю, с учётом текущего тона общения на этом сайте mol.gif
Участник оффлайн! ingecate

минск



 прочитанное сообщение 09.04.2015 16:55     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #39 множественное цитирование

(klav @ 09.04.2015 16:20)
Ссылка на исходное сообщение  ingecate, поделитесь, димеризация праймеров как-то видна по результатам ПЦР?
Ну то есть, по тому или иному виду продукта можно понять, что плохой результат именно из-за неё?

На форезе праймер димеры выглядят низкомолекулярным шмероа. Из-за них уменьшается количество целевого продукта, больше вероятности найти неспец., в реал-тайме смещение Ct, ну и т.д.
Если надо провести только качественный анализ +/- (в данном случае ПЦР-скрининг E. coli на вставку гена), то димеров можно и не боятся. При клонировании, количественном анализе – мешают.
Кстати, как Phusion, так и HS-Fuzz терпят целые коли, а вот на крови проверял только HS-Fuzz (до20%!). – это еще дополнительные плюсы модифицированных Pfu’х, не досягаемые простым Taq’ам и Pfu’ам. Про них же чувствительность – 5 копий на реакцию (читал статью, что меньше давать нельзя – слишком тяжелая статистика, хотя на мой взгляд и 1 копию подниму). Работают быстро (2 кб/мин) – все это по своему опыту.

Картинки:
картинка: ______________.jpg
______________.jpg — (322.82к)   



Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): klav
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  26.11.2021 08:00     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #40 множественное цитирование

https://archives.profsurv.com/forum/Profess...ert/-67881.aspx
https://atlanta.bubblelife.com/community/an...ex_Watch_Online
https://gumroad.com/rolexrelicawatches/p/di...replica-watches
https://onmogul.com/stories/guide-on-how-to...ex-watch-online
https://list.ly/i/5704105
https://www.behance.net/gallery/114237003/Replica-Rolex
https://www.mlbdailydish.com/users/Replicarolexwatches
http://replicawatches24.simplesite.com/
https://watcheshutuk.cabanova.com/
https://www.pinterest.com/watcheshutuk/_saved/
https://www.linkedin.com/pulse/guide-how-pu...online-hei-bai/
https://justpaste.it/8t11q
https://padlet.com/watcheshutuk/in2opwnfmnmclce8
https://www.allforxi.com/users/Replicarolexwatches
https://profile.hatena.ne.jp/Rolexrelicawatches/profile
SAPPRRIINNAA
IP-штамп: frD2d5AkbB40g
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  18.06.2022 16:05     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #41 множественное цитирование

الرئيسية
<a href="https://hl-tourism.com/">الحياة السعيدة </a>
<a href="https://hl-tourism.com/">رحلات سياحية</a>
<a href="https://hl-tourism.com/">برامج سياحية</a>
<a href="https://hl-tourism.com/">عروض سفر </a>
عروض سياحية
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%B9%D8%B1%D9%88%D8%B6-%D8%B3%D9%8A%D8%A7%D8%AD%D9%8A%D8%A9.html">عروض سياحية </a>
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%B9%D8%B1%D9%88%D8%B6-%D8%B3%D9%8A%D8%A7%D8%AD%D9%8A%D8%A9.html">بكجات سياحية </a>
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%B9%D8%B1%D9%88%D8%B6-%D8%B3%D9%8A%D8%A7%D8%AD%D9%8A%D8%A9.html">عروض سياحية وسفر</a>
رحلات داخلية
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%B1%D8%AD%D9%84%D8%A7%D8%AA-%D8%AF%D8%A7%D8%AE%D9%84%D9%8A%D9%87.html">رحلات داخلية في السعودية</a>
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%B1%D8%AD%D9%84%D8%A7%D8%AA-%D8%AF%D8%A7%D8%AE%D9%84%D9%8A%D9%87.html">السياحة في السعودية</a>
رحلات عائلية
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%B1%D8%AD%D9%84%D8%A7%D8%AA-%D8%B3%D9%8A%D8%A7%D8%AD%D9%8A%D8%A9.html">عروض سياحية شاملة التذاكر</a>
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%B1%D8%AD%D9%84%D8%A7%D8%AA-%D8%B3%D9%8A%D8%A7%D8%AD%D9%8A%D8%A9.html">قروبات سياحية</a>
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%B1%D8%AD%D9%84%D8%A7%D8%AA-%D8%B3%D9%8A%D8%A7%D8%AD%D9%8A%D8%A9.html">عروض سفر عائلية</a>
شهر العسل
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%B1%D8%AD%D9%84%D8%A7%D8%AA-%D8%B4%D9%87%D8%B1-%D8%A7%D9%84%D8%B9%D8%B3%D9%84.html">عروض شهر عسل</a>
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%B1%D8%AD%D9%84%D8%A7%D8%AA-%D8%B4%D9%87%D8%B1-%D8%A7%D9%84%D8%B9%D8%B3%D9%84.html">رحلات شهر عسل</a>

<a href="https://hl-tourism.com/%D8%B1%D8%AD%D9%84%D8%A7%D8%AA-%D8%B4%D9%87%D8%B1-%D8%A7%D9%84%D8%B9%D8%B3%D9%84.html">برامج شهر عسل</a>
رحلات كروز
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%B1%D8%AD%D9%84%D8%A7%D8%AA-%D9%83%D8%B1%D9%88%D8%B2.html">رحلات كروز</a>
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%B1%D8%AD%D9%84%D8%A7%D8%AA-%D9%83%D8%B1%D9%88%D8%B2.html">رحلات بحرية</a>
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%B1%D8%AD%D9%84%D8%A7%D8%AA-%D9%83%D8%B1%D9%88%D8%B2.html">رحلات كروز اوروبا</a>
الدراسة بالخارج
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%A7%D9%84%D8%AF%D8%B1%D8%A7%D8%B3%D8%A9-%D8%A8%D8%A7%D9%84%D8%AE%D8%A7%D8%B1%D8%AC.html">الدراسة بالخارج</a>
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%A7%D9%84%D8%AF%D8%B1%D8%A7%D8%B3%D8%A9-%D8%A8%D8%A7%D9%84%D8%AE%D8%A7%D8%B1%D8%AC.html">تعليم اللغة الانجليزية</a>
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%A7%D9%84%D8%AF%D8%B1%D8%A7%D8%B3%D8%A9-%D8%A8%D8%A7%D9%84%D8%AE%D8%A7%D8%B1%D8%AC.html">الدراسة في بريطانيا</a>
السياحة العلاجية
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%A7%D9%84%D8%B3%D9%8A%D8%A7%D8%AD%D8%A9-%D8%A7%D9%84%D8%B9%D9%84%D8%A7%D8%AC%D9%8A%D8%A9-%D8%A7%D9%84%D8%B9%D9%84%D8%A7%D8%AC-%D8%A7%D9%84%D8%B7%D8%A8%D9%8A%D8%B9%D9%8A.html">السياحة العلاجية</a>
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%A7%D9%84%D8%B3%D9%8A%D8%A7%D8%AD%D8%A9-%D8%A7%D9%84%D8%B9%D9%84%D8%A7%D8%AC%D9%8A%D8%A9-%D8%A7%D9%84%D8%B9%D9%84%D8%A7%D8%AC-%D8%A7%D9%84%D8%B7%D8%A8%D9%8A%D8%B9%D9%8A.html">برامج السياحة العلاجية</a>
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%A7%D9%84%D8%B3%D9%8A%D8%A7%D8%AD%D8%A9-%D8%A7%D9%84%D8%B9%D9%84%D8%A7%D8%AC%D9%8A%D8%A9-%D8%A7%D9%84%D8%B9%D9%84%D8%A7%D8%AC-%D8%A7%D9%84%D8%B7%D8%A8%D9%8A%D8%B9%D9%8A.html">مصحات علاجية اوروبا</a>
استخراج تأشيرات
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%AE%D8%B1%D8%A7%D8%AC-%D8%AA%D8%A7%D8%B4%D9%8A%D8%B1%D8%A7%D8%AA.html">استخراج تاشيرات</a>
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%AE%D8%B1%D8%A7%D8%AC-%D8%AA%D8%A7%D8%B4%D9%8A%D8%B1%D8%A7%D8%AA.html">تاشيرة الشنغن</a>
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%AE%D8%B1%D8%A7%D8%AC-%D8%AA%D8%A7%D8%B4%D9%8A%D8%B1%D8%A7%D8%AA.html">تاشيرة بريطانيا</a>
حجز طيران
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%AD%D8%AC%D8%B2-%D8%B7%D9%8A%D8%B1%D8%A7%D9%86/">حجز طيران</a>
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%AD%D8%AC%D8%B2-%D8%B7%D9%8A%D8%B1%D8%A7%D9%86/">رحلات طيران</a>
<a href="https://hl-tourism.com/%D8%AD%D8%AC%D8%B2-%D8%B7%D9%8A%D8%B1%D8%A7%D9%86/">اسعار تذاكر الطيران</a>
SAPPRRIINNAA
IP-штамп: frD2d5AkbB40g
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  18.06.2022 16:06     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #42 множественное цитирование

الرئيسية
<a href="https://talafashion.com.sa/">متجر عبايات </a>
<a href="https://talafashion.com.sa/">دار تالة</a>
<a href="https://talafashion.com.sa/">متجرعباية</a>
<a href="https://talafashion.com.sa/">متجر العبايات</a>
<a href="https://talafashion.com.sa/">متجرعبايات دار تالة </a>
<a href="https://talafashion.com.sa/">افضل متجر عبايات</a>
<a href="https://talafashion.com.sa/">طرح وعبايات </a>

العبايات
<a href="https://talafashion.com.sa/%D9%85%D8%AA%D8%AC%D8%B1-%D8%A7%D9%84%D8%B9%D8%A8%D8%A7%D9%8A%D8%A7%D8%AA/c1871859193">افضل متجر عبايات </a>
<a href=" https://talafashion.com.sa/%D9%85%D8%AA%D8%...;رح وعبايات</a>
<a href="https://talafashion.com.sa/%D9%85%D8%AA%D8%AC%D8%B1-%D8%A7%D9%84%D8%B9%D8%A8%D8%A7%D9%8A%D8%A7%D8%AA/c1871859193">عبايات سوداء سادة و ملونه</a>
عبايات سادة
<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B9%D8%A8%D8%A7%D9%8A%D8%A7%D8%AA-%D8%B3%D8%A7%D8%AF%D9%87/c1696770756">عبايات سادة </a>
<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B9%D8%A8%D8%A7%D9%8A%D8%A7%D8%AA-%D8%B3%D8%A7%D8%AF%D9%87/c1696770756">عبايات ملونة سادة</a>
<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B9%D8%A8%D8%A7%D9%8A%D8%A7%D8%AA-%D8%B3%D8%A7%D8%AF%D9%87/c1696770756">عبايات سادة سوداء </a>
عبايات الراس
<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B9%D8%A8%D8%A7%D9%8A%D8%A7%D8%AA-%D8%A7%D9%84%D8%B1%D8%A3%D8%B3/c19133697">عبايات الراس </a>
<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B9%D8%A8%D8%A7%D9%8A%D8%A7%D8%AA-%D8%A7%D9%84%D8%B1%D8%A3%D8%B3/c19133697">عبايات على الرأس </a>
<a href="https://talafashion.com.sa/">عبايات على الرأس </a>
عبايات مطرزة
<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B9%D8%A8%D8%A7%D9%8A%D8%A7%D8%AA-%D9%85%D8%B7%D8%B1%D8%B2%D8%A9/c1843693077">عبايات مطرزة</a>
<a href="https://talafashion.com.sa/">عبايات مطرزة</a>
عبايات فضفاضة
<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B9%D8%A8%D8%A7%D9%8A%D8%A7%D8%AA-%D8%A8%D8%B4%D8%AA-%D8%A7%D8%B3%D9%88%D8%AF-%D9%88%D9%85%D9%84%D9%88%D9%86%D9%87/c1838874575">عبايات فضفاضة</a>
<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B9%D8%A8%D8%A7%D9%8A%D8%A7%D8%AA-%D8%A8%D8%B4%D8%AA-%D8%A7%D8%B3%D9%88%D8%AF-%D9%88%D9%85%D9%84%D9%88%D9%86%D9%87/c1838874575">عبايات بشت اسود</a>
<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B9%D8%A8%D8%A7%D9%8A%D8%A7%D8%AA-%D8%A8%D8%B4%D8%AA-%D8%A7%D8%B3%D9%88%D8%AF-%D9%88%D9%85%D9%84%D9%88%D9%86%D9%87/c1838874575">عبايه بشت ملونه</a>
<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B9%D8%A8%D8%A7%D9%8A%D8%A7%D8%AA-%D8%A8%D8%B4%D8%AA-%D8%A7%D8%B3%D9%88%D8%AF-%D9%88%D9%85%D9%84%D9%88%D9%86%D9%87/c1838874575">عبايه بشت </a>
<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B9%D8%A8%D8%A7%D9%8A%D8%A7%D8%AA-%D8%A8%D8%B4%D8%AA-%D8%A7%D8%B3%D9%88%D8%AF-%D9%88%D9%85%D9%84%D9%88%D9%86%D9%87/c1838874575">عبايات بشت </a>
<a href="https://talafashion.com.sa/">عبايات بشت </a>

عبايات عملية
<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B9%D8%A8%D8%A7%D9%8A%D8%A7%D8%AA-%D8%B9%D9%85%D9%84%D9%8A%D8%A9/c404039121">عبايات عملية </a>
<a href="https://talafashion.com.sa/">عبايات عملية </a>
عبايات ملونة
<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B9%D8%A8%D8%A7%D9%8A%D8%A7%D8%AA-%D9%85%D9%84%D9%88%D9%86%D9%87-%D9%81%D8%AE%D9%85%D8%A9/c2122003905">عبايات الوان </a>
<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B9%D8%A8%D8%A7%D9%8A%D8%A7%D8%AA-%D9%85%D9%84%D9%88%D9%86%D9%87-%D9%81%D8%AE%D9%85%D8%A9/c2122003905">عبايات ملونة فخمة </a>
<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B9%D8%A8%D8%A7%D9%8A%D8%A7%D8%AA-%D9%85%D9%84%D9%88%D9%86%D9%87-%D9%81%D8%AE%D9%85%D8%A9/c2122003905">عبايات كحلي سادة </a>
<a href="https://talafashion.com.sa/">عبايات ملونة </a>
عبايات مناسبات
<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B9%D8%A8%D8%A7%D9%8A%D8%A7%D8%AA-%D8%B1%D8%B3%D9%85%D9%8A%D8%A9/c1354349013">عبايات المناسبات </a>
<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B9%D8%A8%D8%A7%D9%8A%D8%A7%D8%AA-%D8%B1%D8%B3%D9%85%D9%8A%D8%A9/c1354349013">عبايات رسمية </a>
<a href="https://talafashion.com.sa/">عبايات رسمية </a>

متعددة القطع
<a href="https://talafashion.com.sa/%D9%85%D8%AA%D8%B9%D8%AF%D8%AF%D8%A9-%D8%A7%D9%84%D9%82%D8%B7%D8%B9/c2026610750">عبايات متعددة القطع </a>
<a href="https://talafashion.com.sa/%D9%85%D8%AA%D8%B9%D8%AF%D8%AF%D8%A9-%D8%A7%D9%84%D9%82%D8%B7%D8%B9/c2026610750">عبايات قطعتين </a>
<a href="https://talafashion.com.sa/%D9%85%D8%AA%D8%B9%D8%AF%D8%AF%D8%A9-%D8%A7%D9%84%D9%82%D8%B7%D8%B9/c2026610750">عباية قطعتين </a>
<a href="https://talafashion.com.sa/%D9%85%D8%AA%D8%B9%D8%AF%D8%AF%D8%A9-%D8%A7%D9%84%D9%82%D8%B7%D8%B9/c2026610750">عبايات متعددة القطع </a>
<a href="https://talafashion.com.sa/">عبايات قطعتين </a>
النقاب
<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%A7%D9%84%D9%86%D9%82%D8%A7%D8%A8/c1656109623">نقاب قصير</a>

<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%A7%D9%84%D9%86%D9%82%D8%A7%D8%A8/c1656109623">نقاب رسمة عين</a>

<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%A7%D9%84%D9%86%D9%82%D8%A7%D8%A8/c1656109623">لثام بمطاط خلفي</a>

الطرحة
<ahref="https://talafashion.com.sa/%D8%B7%D8%B1%D8%AD%D8%B3%D9%88%D8%AF%D8%A7%D8%A1%D9%88%D9%85%D8%B7%D8%B1%D8%B2%D8%A9/c316762400">افخم طرح ملونه</a>

<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B7%D8%B1%D8%AD%D8%B3%D9%88%D8%AF%D8%A7%D8%A1%D9%88%D9%85%D8%B7%D8%B1%D8%B2%D8%A9/c316762400">اجمل طرح مطرزه</a>

<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B7%D8%B1%D8%AD%D8%B3%D9%88%D8%AF%D8%A7%D8%A1%D9%88%D9%85%D8%B7%D8%B1%D8%B2%D8%A9/c316762400">افضل طرح سوداء</a>
<a href="https://talafashion.com.sa/%D8%B7%D8%B1%D8%AD%D8%B3%D9%88%D8%AF%D8%A7%D8%A1%D9%88%D9%85%D8%B7%D8%B1%D8%B2%D8%A9/c316762400">طرح سوداء ومطرزة</a>

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 20.04.24 02:38
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft