Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
|
|
|
|
|
10 мм эдта,открутить от эритроцитов 1500 10 мин,дальше сажаешь лейкоциты 3000 ,ресуспендировать,покрасить АТ к фетальному белку,например с фитсом,поместить в специальный гель для микроскопа (без фиксации!)и микроманипулятором вытащить клетки,которые будут светится 1:10 000. Дальше все в твоих руках - хочешь single cell PCR на ген шизофрении,хочешь клонируй если серьезно - задача очень сложная - у нас не могут пренатальные инфекции определить,чтоб уроды не рождались,а ты хочешь шизофреников искать. |
|
Во-первых, шизофрения - это не менее чем в 90% случаев не моногенное (менделирующее) заболевание - это, скорее, заболевание с наследственной предрасположенностью, как сах. диабет, рассеянный склероз, ишемическая болезнь и т.п. Чтобы развился фенотип "шизофрения" - необходимо сочетание определенных аллелей нескольких (!) генов (наверняка десяток из них известны, поищите), и воздействие каких-то средовых факторов. Я немного работала с сахарным диабетом, а сейчас у нас в лабе что-то затевается по эпилепсии - ситуация с этими болезнями похожа на Вашу. Что могу посоветовать - Вам надо, для начала, как-то снизить гетерогенность внутри вашей выборки. Во-первых, поговорите с врачами и отберите только те случаи, где есть _семейный_характер_заболевания_ - т.е. имеются несколько больных в семье. Особенно ценны, естественно, большие семьи. По семейному анамнезу - рисуете родословную для каждой семьи. Из анализа родословной можно будет предположить - можно ли рассматривать заболевание в этой семье как, например, доминантное, или "доминантное с неполной пенетрантностью", или, возможно, как "рецессивное" (больны два или более сибса, родители здоровы). Возможно, среди этих семей Вам и попадется какая-то с истинно моногенной формой шизофрении (не знаю точно, есть ли такие, но, думаю, есть). Следующий этап - пытаетесь разделить собранные семьи на подгруппы по принципу единообразия клинической картины. Сразу скажу - дело страшно неблагодарное,т.к., во-первых, сразу же столкнетесь с клиническим полиморфизмом внутри одной семьи, а, во-вторых, практически невозможно прийти по этому вопросу ко взаимопониманию с клиницистами. Придется Вам самому очень крепко "въезжать" во всю клинику, и стараться выбрать какие-то диагностические критерии, которые можно выражать либо в цифрах, либо как "да/нет". Советую сразу же отбросить те случаи, где заболевание является одним из проявлений какого-то сложного синдрома (например, сочетается с различными дизморфизмами, пороками развития, сегрегирует с диабетом или какими-то еще явными биохимическими нарушениями). Конечно, "отбросить" - не значит "выбросить" - как раз в таких "синдромальных" семьях заболевание скорее всего "генетическое" в привычном смысле слова, и, ежели удастся найти несколько средних по размерам семей с одинаковой клиникой или одну большую - можно и ген картировать. Еще один более или менее приличный критерий для "упорядочивания" выборки - это возраст начала заболевания. Как правило, для случаев, где преобладает генетическая причина развития заболевания, характерно более раннее начало заболевания. Также в семье, где есть больные в нескольких поколениях, может наблюдаться тенденция к началу заболевания в более молодом возрасте и более злокачественное течение в более поздних поколениях (явление антиципации). Почему-то такой феномен очень часто наблюдается даже в семьях с моногенными заболеваниями, где, казалось бы, передается в поколениях одна и та же мутация (например, делеция всего гена, или же миссенс-мутация). Кроме случаев "болезней экспансии тринуклеотидных повторов" этот феномен, насколько мне известно, не имеет четкого объяснения. После того, как Вы соберете информацию о семьях, расклассифицируете их, отберете наиболее интересные (т.е. большие, много больных) - начинается работа по сбору семей - т.е. выезд или вызов всех членов семьи, с тщательным клиническим осмотром и больных, и здоровых (!), уточнением диагноза, уточнением родословной (!!!) и забором у _всех_доступных_членов_семьи_ образцов крови из вены. Ваша цель - создать коллекцию ДНК семей с шизофренией, а также наиболее полное описание каждой семьи (конечно, неплохо бы создать коллекцию культур фибробластов, но... кожу Вам мало кто даст резать . Лучше заранее составить карту или анкету, и заполнить ее на _каждого_ члена семьи (как больного, так и здорового). Содержание такой анкеты может быть рекомендовано на workshop'ах по данной болезни, в материалах узкотематических конференций, специальных журналах - стОит поискать. Если нет - нужно обсудить с клиницистами (лучше несколькими), какие симптомы и др. информация должны быть обязательно отражены в этой анкете. После того, как этот титанический труд будет завершен - можете смело подавать на буржуинские гранты, и выходить на зарубежные серьезные лаборатории . Далее Вам предстоит тестировать сцепление (linkage) заболевания в семьях с известными генами (чье участие в патогенезе шизофрении уже показано) и маркерами предрасположенности к заболеванию. Еще далее - можете "придумать" свои гены, которые, на Ваш взгляд, имеют отношение к патогенезу шизофрении, и проверить сцепление в семьях. Если отойти от больших семей (которые есть жуткий дефицит) - можно создать выборку более или менее "единообразных" больных из _разных_ семей (лучше, конечно же, если это все же будут "семейные" случаи), и в них исследовать частоты аллелей полиморфных маркеров, расположенных рядом с "генами предрасположенности" - это будет исследование неравновесия по сцеплению.Т.е., Вам нужно будет исследовать по этим же маркерам выборку здоровых людей из той же популяции и посмотреть, нет ли каких-то аллелей, которые в выборке больных встречаются чаще, чем в выборке здоровых. Найдя такое "неравновесие" - смотрите, грубо говоря, на гены вокруг маркера, выбираете, кто из них может участвовать в патогенезе шизофрении, а дальше - можно и аллели самого гена посмотреть. Короче, по своему опыту могу сказать, что вся эта работа займет у Вас от 2-3 до ... лет. Все зависит от того, с кем из клиницистов Вы договоритесь работать, сколько сумеете найти семей, и насколько быстро проведете их сбор. А уж как подступиться к красивому слову "генная инженерия" - даже и сказать не берусь ;О) Если Вы имеете в виду генотерапию - она пока и для моногенных-то наследственных заболеваний не особенно продвигается... Тем не менее, удачи Вам, упорства и оптимизма! |
|
|
|
думается мне, что главную роль в развитии "шизофрении" будут играть факторы среды - шизофреногеннок окружение и шизофреногенные семьи - более социальный фактор, чем наследственный. А даже если отбирать пациентов из семей, где наблюдались "клинические" проявления - где гарантия, что от поколения в поколение методы воспитания детей не проецировались на собственного ребенка... Хотя, как указано в [url] ]http://www.psyhelp.ru/texts/shizofre.htm[/url] шизофрения может обуславливаться и биохимическими изменениями в мозге, хотя как показывает статистика по наследованию - довольно сложно эту "болезнь" унаследовать - вероятность что при больном родителе дети будит тоже больные... Хотя некоторые зарубежные товарищи думают иначе (если желаете могу прислать pdf): New genetic hypothesis of schizophrenia Lack of complete concordance for schizophrenia in monozygotic twins has been interpreted as indicative of non-genetic cofactors in transmission of the illness. We present an alternative hypothesis that can parsimoniously explain, using known genetic mechanisms, the heredity pattern, the phenotypic spectrum and the biological abnormalities found in schizophrenia. The inheritance of a single recessive mutated allele of a gene crucial in brain development if followed by a somatic mutation in the normal allele during critical periods of brain development could result in developmental abnormalities that are expressed behaviorally as schizophrenic illness. Acquisition of this somatic mutation is likely enhanced during periods of intense cell division; therefore, the window of opportunity would be restricted to key periods in neurodevelopment. The somatic mutation may not always occur, thus explaining the variability of expression seen in the clinical population. Because the single allele mutation is still transmissible, the equal incidence of schizophrenia in the offspring of monozygotic twins discordant for the disease could also be explained. This possibility has implications for the development of genetic models and the source of genetic material for studies isolating the gene(s) of schizophrenia всех благ |
|
|
|
Нет конкретного вопроса - что собираетесь делать ? Так-то в целом все что написано imers правильно. Другое дело, что все это будет скорее всего впустую - если посмотреть литературу, то количество сканов генома в разных вариантах (и семьи, и сибсы, и ассоциативка) при шизофрении и прочих психиатрических заболеваниях за последние 3-5 лет очень велико. Считать не берусь - но в Am. J. of Medical Genetics cоответсвующих статей десятки. Итог - нулевой. То есть все что-то находят - но это что-то не подтверждается другими авторами или на другой группе семей. Если есть какая-то оригинальная идея - можно обсуждать. Пока же говорить не о чем. Что есть "шизфорения у ребенка" ? У новорожденного ее нет и быть не может. У вас есть ретроспективный метериал - истории болезни у детей с детской шизофренией, начиная в периода внутриутробного развития ? История болези матери ? Собственно материал плода, у которого потом развилась шизофрения ? Да, и о новой гипотезе. Она совсем не новая - такое обсуждалось лет десять назад. В общем простой перенос гипотезы двух ударов с онкологии в психиатрию. Если бы оно было так - то анализ сцепления все равно давл бы возможность выйти на ген. |
|
|
moonlife447 Участник London, UK |
|
Ufa1688 Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |