Rambler's Top100
 		Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Замораживание аликвот ПЦР-смеси
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

 
 Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Агроном
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 03.07.2012 09:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование
Доброго времени суток уважаемые коллеги! Вопрос имеет отношение к "методам", однако в соответствующем разделе сайта я ответ не нашел. Итак, буду краток: можно ли хранить разлитую на аликвоты полную ПЦР-смесь для тагмана в замороженном виде? Возникло желание потерзать набор, исследуя всего несколько образцов за раз.
Участник оффлайн! Cathie22
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 03.07.2012 10:34     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование
Ну без фермента если. А если без олигонуклеотидных компонентов, то она, наверное, и на +4 нормально похранится.
Участник оффлайн! Агроном
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 03.07.2012 10:54     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование
(Cathie22 @ 03.07.2012 11:34)
Ссылка на исходное сообщение  Ну без фермента если. А если без олигонуклеотидных компонентов, то она, наверное, и на +4 нормально похранится.

Ну, в том и вопрос - можно ли полную смесь. Ферменты (полимераза и ревертаза) по рекомендации производителя набора хранятся в замороженном виде. И еще добавлю - полимераза инактивированная (для хот-старта).

Сообщение было отредактировано Агроном - 03.07.2012 10:59
Участник оффлайн! Cathie22
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 03.07.2012 10:59     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование
Ферменты обычно в глицерине, но на -20С. Ну вот и проверьте smile.gif Скорее всего, станет хуже. Может, для разных мишеней по-разному и со временем.
Участник оффлайн! vtosha
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 03.07.2012 12:08     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование
У нас стартовый набор для Биорада (Мелт с Евой грин) стоял полгода на +4. Интенсивность потихоньку снижалась, но реакции шли абсолютно нормально.
По-моему, сейчас такие ферменты дубовые, тем более для ПЦР, что они вполне могут и на +4 долго жить.
Участник оффлайн! RNK
Постоянный участник
СССР
 прочитанное сообщение 03.07.2012 14:32     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование
при замораживании на -20С все белки в ПЦР смеси без глицерина или DMSO денатурируют, но на +4C будут храниться действительно долго, и праймеры, и нуклеотиды и полимераза.
Участник оффлайн! Агроном
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 03.07.2012 14:54     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование
Ну не знаю на счет "денатурации". Знаю, что степень разрушения при заморозке зависит от длины молекулы - чем больше, тем вероятнее разрушение. Ладно, практика покажет. Так или иначе, думаю, что аликвотирование лучше, чем постоянные циклы заморозки-разморозки при извлечении реагентов из холодильника.
Участник оффлайн! Lesha
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 03.07.2012 15:57     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование
В своё время пользовался, кажется, 2х кратной замороженной смесью для ПЦР (просто добавь воды, wink.gif и матрицу). Для простых применений работала вполне хорошо. Для чувствительных вещей не пробовал.
Участник оффлайн! RNK
Постоянный участник
СССР
 прочитанное сообщение 03.07.2012 17:30     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование
Думаю, если в 1х ПЦР смесь добавить минимум 5% DMSO, вы можете замораживать смесь в морозилке, или через жидкий азот. А если сделать 2х ПЦР смесь, то можно и 10% DMSO использовать.
DMSO не мешает при ПЦР, снижает только Тм отжига на несколько градусов, но можно оставить условия реакции как есть.

Сообщение было отредактировано RNK - 03.07.2012 17:38
Участник оффлайн! xenopus
Постоянный участник
Moscow
 прочитанное сообщение 03.07.2012 20:35     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование
Не знаю, как другие аналогичные смеси, но еврогеновские СкринМиксы запораживание-оттаивание переносят нормально. Там нет праймеров, но есть полимераза.
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва
 прочитанное сообщение 03.07.2012 22:21     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование
Я не замораживаю, а сушу. Хранятся при комнатной температурек пять лет без потери активности.
Участник оффлайн! IMK
Участник
 прочитанное сообщение 04.07.2012 07:25     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование
(RNK @ 03.07.2012 21:30)
Ссылка на исходное сообщение  DMSO не мешает при ПЦР, снижает только Тм отжига на несколько градусов, но можно оставить условия реакции как есть.

я бы не делал таких решительных заявлений...
Участник оффлайн! Агроном
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 04.07.2012 09:18     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование
Сушеные - это идеал конечно. Но, как говорится, увы....
Участник оффлайн! hathkul
Участник
 прочитанное сообщение 05.07.2012 15:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование
А как вы сушите? Просто SpeedVac-ом можно или нужно что-то посерьезнее?
Участник оффлайн! Агроном
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 23.10.2012 09:37     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование
Решил написать - может кому интересно. Вчера провел ПЦР с замороженными аликвотами полной ПЦР-смеси (заморожены в начале июля, при -25) коммерческого набора на гепатит С. По контролям и просто по образцам все прошло хорошо, изменений относительно свежей смеси не заметил.
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость
 прочитанное сообщение 23.10.2012 10:08     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование
(Агроном @ 23.10.2012 09:37)
Ссылка на исходное сообщение  Решил написать - может кому интересно. Вчера провел ПЦР с замороженными аликвотами полной ПЦР-смеси (заморожены в начале июля, при -25) коммерческого набора на гепатит С. По контролям и просто по образцам все прошло хорошо, изменений относительно свежей смеси не заметил.


а почему контроля хранения при комнатной температуре нет ?
лето вроде не жаркое smile.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость
 прочитанное сообщение 23.10.2012 10:12     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование
(Агроном @ 23.10.2012 09:37)
Ссылка на исходное сообщение  Решил написать - может кому интересно. Вчера провел ПЦР с замороженными аликвотами полной ПЦР-смеси (заморожены в начале июля, при -25) коммерческого набора на гепатит С. По контролям и просто по образцам все прошло хорошо, изменений относительно свежей смеси не заметил.


"коммерческого набора на гепатит Ц" © - очень интересно про "коммерческий набор" smile.gif
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва
 прочитанное сообщение 23.10.2012 11:34     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование
(Агроном @ 23.10.2012 10:37)
Ссылка на исходное сообщение  Решил написать - может кому интересно. Вчера провел ПЦР с замороженными аликвотами полной ПЦР-смеси (заморожены в начале июля, при -25) коммерческого набора на гепатит С. По контролям и просто по образцам все прошло хорошо, изменений относительно свежей смеси не заметил.

Значит, в контролях Ревертазы и РНК не было... confused.gif
Все самое интересное начинается, когда ПРОЦЕСС повторяется многократно, а не от однократного замораживания на жаркий период года. no.gif
Участник оффлайн! Агроном
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 23.10.2012 11:36     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование
Если интересует - делайте хоть контроль хранения в автоклаве при 120 градусах - у меня чисто практический интерес. smile.gif
Чего интересно про набор?) Хотите узнать фирму - сообщайте в личку, публичной рекламой заниматься не намерен. smile.gif

Поясняю вкратце состав того, что было заморожено: нуклеотидтрифосфаты+магний+праймеры+TaqMan зонды+ полимераза+ревертаза+вода. При постановке реакции использовались РНКовые контроли.
Ессно замораживал я это именно с целью чтобы не размораживая остальные пробирки брать из холодильника готовые и с ними работать)

Сообщение было отредактировано Агроном - 23.10.2012 11:41
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва
 прочитанное сообщение 23.10.2012 11:56     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #20 множественное цитирование
Значит смесь содержит что-то из: ДМСО, глицерин, сахариды и .. мало ли. А про ЭТО не пишут. А Вам разве не интересно знать про это? eek.gif
Еще пару раз заморозите - ревертазе кирдык yes.gif А РНК контроли в виде РНК-транскриптов или "армированной РНК" действительно хорашо защищены от РНК-аз, но не от замораживания-размораживания.
Участник оффлайн! Агроном
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 23.10.2012 12:02     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #21 множественное цитирование
Да не хочу я их перезамораживать)))) я их с той целью и разаликвотил, чтобы весь набор из за моих низменных потребностей провести анализ парочки образцов не тягать из морозилки на стол и обратно.
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва
 прочитанное сообщение 23.10.2012 12:05     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #22 множественное цитирование
(Агроном @ 23.10.2012 13:02)
Ссылка на исходное сообщение  Да не хочу я их  перезамораживать)))) я их с той целью и разаликвотил, чтобы весь набор из за моих низменных потребностей провести анализ парочки образцов не тягать из морозилки на стол и обратно.

Вы меня огорчили... frown.gif wink.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость
 прочитанное сообщение 23.10.2012 12:34     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #23 множественное цитирование
(Агроном @ 23.10.2012 11:36)
Ссылка на исходное сообщение  Если интересует - делайте хоть контроль хранения в автоклаве при 120 градусах - у меня чисто практический интерес.  smile.gif
Чего интересно про набор?) Хотите узнать фирму - сообщайте в личку, публичной рекламой заниматься не намерен.  smile.gif

Поясняю вкратце состав того, что было заморожено: нуклеотидтрифосфаты+магний+праймеры+ТаяМан зонды+ полимераза+ревертаза+вода. При постановке реакции использовались РНКовые контроли.
Ессно замораживал я это именно с целью чтобы не размораживая остальные пробирки брать из холодильника готовые и с ними работать)


"Хотите узнать фирму - сообщайте в личку" (ц)
не хочу smile.gif
Не барское дело гепатиты гонять smile.gif
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник
 прочитанное сообщение Сообщение на английском  08.12.2021 16:42     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #24 множественное цитирование
https://www.uptrennd.com/post-detail/hints-...-watch~ODY3MDU2
https://anotepad.com/note/read/mqg8p5jm
https://www.crokes.com/replicarolexwatches/profile/
https://ko-fi.com/post/Watches-Shopping-Gui...-Watc-E1E13PZV9
https://www.merchantcircle.com/blogs/replic...x-Watch/1966540
https://www.nairaland.com/6427528/watches-s...de-finding-fake
https://www.vingle.net/posts/3587193
https://fortunetelleroracle.com/sport/replica-watches-280478
https://www.goodreads.com/story/show/132736...ake-rolex-watch
https://www.diigo.com/item/note/85twz/phwr?...2395edb2dac07ea
https://github.com/ReplicawatchesUK/Replica...ake-Rolex-Watch
https://www.reddit.com/user/Bestreplicawatc...ke_rolex_watch/
https://slashdot.org/submission/13306958/wa...ake-rolex-watch
https://www.wattpad.com/1030107359-replica-...guide-finding-a
https://www.instructables.com/member/Fakero...licPreview=true

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики 		Назначение кнопок:
   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -  
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 17.04.24 01:54
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft
Powered by Invision Power Board(Trial) v2.0.0 © 2024  IPS, Inc.