molbiol.ru -> pbk-cmv

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* pbk-cmv -- экспрессия в эукариотах --

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

imers
Участник
Москва

23.08.2005 17:23

URL #1

Доброго всем времени суток!
Уважаемые коллеги, я извиняюсь, если этот вопрос уже обсуждался, но "поиском на сайте" ничего найти не удается.
Работал ли кто-то с вектором pBK-CMV (Stratagene) для экспрессии в эукариотах гена, проклонированного под CMV-промотором? Если не секрет, что был за ген (один из привычных модельных, типа GFP или галоктозидазы, или же какой-то свой, из мРНК вытянутый), в каких клетках экспрессировали и каков примерно получался уровень экспрессии (хотя бы, хорошо/плохо относительно других векторов, с которыми работаете)?
Подкинули мне проэкспрессировать ген человечий, в этот вектор заклонированный, а чё-то не растет почти ничего

Сообщение было отредактировано imers - 23.08.2005 18:59

Fedo
Постоянный участник
Nemetchina

24.08.2005 00:43

URL #2

А как вы делаете трансфекцию? Сколько берете ДНК, и каким методом пользуетесь.

Guest
IP-штамп: fr9qlgRVaGzZA
гость

24.08.2005 05:24

URL #3

http://www.stratagene.com/manuals/212209.pdf

гость: i
IP-штамп: frGvW179o2ewg
гость

26.08.2005 01:24

URL #4

Fedo, долгая история... Если кратко - транзиентная трансфекция с Lipofectamine, Invitrogene (не 2000, обычным) на 293т, делала оптимизацию по ДНК и липофектамину на чашку, а также по их оптимальному соотношению и времени реакции, на этих условиях и работаю. Использую также Plus-reagent. Мучаюсь именно с этими предоставленными конструктами, и уже давно, на других (наших) векторах все ОК, тьфу-тьфу-тьфу. Сейчас хочу на COS перейти, но сдается мне - не в клетках тут собака порылась, все свое-то на 293-их растет, и сами они растут, как на дрожжах.

Guest, спасибо, но я уже читала описание к вектору... Поняла, что там какой-то фьюжн с LacZ получается, если его специально не вырезать при клонировании, и это может мешать экспрессии в эукариотах. А наши коллабораторы, похоже, его как раз не вырезали. В общем, личными впечатлениями поделиться никто не может

imers
Участник
Москва

26.08.2005 15:53

URL #5

Кстати, интересно - сайт Stratagene только у меня категорически не открывается, или он вообще сдох?

nigoal123
IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE
гость

23.05.2022 12:03

URL #6

The secret to 123GOAL good article writing is to 11hilo understand how สล็อต123 to plan and structure a บาคาร่าออนไลน์ piece before slotxo you write it.

A well-structured ลิงค์รับทรัพย์ article allows you to use nigoal your writing skills to sexy gaming best advantage and dreamgaming communicate your ideas nigoal 50รับ100 correctly, concisely, clearly, coherently, and completely.

guest: 123
IP-штамп: frJhOCvSv9ICE
гость

02.06.2022 12:22

URL #7

For years there 123VEGA have been FA CHAI SLOT calls for Asia - which JILI SLOT is home to some PRAGMATIC PLAY of the world's สล็อตPG biggest CO2 emitters - to ditch fossil fuels 11HILO to help tackle climate AMB CASINO change. Countries in the region - including FC SLOT its three biggest economies 88KTC China, Japan and India - were criticised last year 123GOAL for not making a bigger.

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.