molbiol.ru -> ELISA крови

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* ELISA крови

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

Rob
Участник

29.01.2018 22:20

URL #1

Здравствуйте друзья.
Мышкам был введен белок "А". Собрана сыворотка.
Надо поставить эксперимент, как определить белок "А" в сыворотке.

Планшет инкубирую с Goat anti-human антителом "А"...
потом, преинкубирую сыворотку, которая содержит "А" с опять же "А".

И по разности сигнала делаю вывод.

Нужно ли мне разводить сыворотку для титрования "А" или за стартовую концентрацию брать не разведенную?

vb
Постоянный участник

29.01.2018 22:56

URL #2

шо, опять?! (с)

vb
Постоянный участник

29.01.2018 23:02

URL #3

что такое "Goat anti-human антителом "А""?

Rob
Участник

29.01.2018 23:18

URL #4

да, да и опять и снова..

polyclonal Goat anti-human, которое специфическое для "А" белка.

vb
Постоянный участник

29.01.2018 23:47

URL #5

(Rob @ 29.01.2018 21:18)

да, да и опять и снова..

polyclonal Goat anti-human, которое специфическое для "А" белка.

я чего-то не понимаю.
anti-human - значит специфическое против человеческих антител. Как оно может быть против белка А?

Guest
IP-штамп: frz4Hw2duM8Wk
гость

30.01.2018 02:14

URL #6

специфическое поликлональное антитело, разработаное против таргета "А"....или для распознания таргета "А", как Вам будет понятне.
даже не знаю, как более еще точнее описать...одно из сендвич пары для Элайзы, которым инкубируют планшет, перед нанесением тестируемых образцов.
В моем эксперименте, исследуемый белок, условно обозначен именем "А"...

Rob
Участник

30.01.2018 02:16

URL #7

Предыдущий пост от меня...забыл залогиниться

Rob
Участник

30.01.2018 02:17

URL #8

(Guest @ 30.01.2018 03:14)

забыл логин сделать

vb
Постоянный участник

30.01.2018 07:39

URL #9

(Guest @ 30.01.2018 00:14)

Тогда непонятно вот это словосочетание Goat anti-human.
я привык, что это означает козьи антитела против человечьих. Где таргетом являются человечьи антитела. Обычно используется в качестве вторичных в классическом сэндвиче.
Обычно, если это не бивалентные конструкции (а поликлоны такими быть не могут), они не могут быть одновременно и против вашего белка А.

Rob
Участник

30.01.2018 16:25

URL #10

пожалуйста, не додумывайте ничего...

Это не суть вопроса...

Вам есть что сказать о разведении сыворотки?
Как нужно разводить сыворотку, в которой находиться белок "А" и которую инкубируют опять же с белком "А"?

Tom1
Постоянный участник

30.01.2018 18:18

URL #11

(Rob @ 30.01.2018 06:25)

"Как нужно разводить сыворотку, в которой находиться белок "А" и которую инкубируют опять же с белком "А"?"
тут даже я запутался....
чес слово не понятно зачем инкубировать сыворотку " содержасчую ( теоретически" "Белок А" опять с раствором белка "А"???????
если оставить на совести аффтара данную хрень, то сыворотку я развел бы 2,4,8,16,32.
и посмотрел бы чтп получится в параллели бы поставил такое же разведение чистого белка....

Поблагодарили (1): CowDoc

vb
Постоянный участник

30.01.2018 22:29

URL #12

(Rob @ 30.01.2018 14:25)

А, ну так бы и сказали, что думать не надо. Ну, если думать не надо, то я бы не разводил, так как все равно выбрасывать. Зачем пачкать расходники?

vb
Постоянный участник

30.01.2018 22:33

URL #13

(Tom1 @ 30.01.2018 16:18)

Грусть-тоска.
налево пойдешь - на гаряева наткнешся, направо пойдешь - какието скубенты без мозга...
на работе индусы документацию подсунули - здесь читай, здесь не читай, тут я рыбу заворачивал... чет надоело мне все... у вас другого глобуса нет?

Поблагодарили (1): CowDoc

Rob
Участник

30.01.2018 23:26

URL #14

(Tom1 @ 30.01.2018 19:18)

Уважаемые ученый, Вы же интеллигентный человек, я надеюсь...Зачем Вы грубите? Пожалуйста, давайте будем взаимовежливы. Все же верю, что Вас учили "что такое хорошо и что такое плохо".
Вот если Вам не понятно идея тестирования на Иммуногенность, то уж, пожалуйста, не выставляейте себя так уж..

vb
Постоянный участник

31.01.2018 08:29

URL #15

(Rob @ 30.01.2018 21:26)

Я занимаюсь изучением иммуногенности всякой хрени вот уже лет 20.
в описании вашего исследования не было ничего, что указывает на изучение иммуногенности.
И вообще описание непонятное. Вам начали задавать уточняющие вопросы, вы отмахнулись от них, как от несущественных. Ок, мне осталось только ст***ся.
и теперь вы обижены?

Rob
Участник

31.01.2018 18:05

URL #16

Вообще то это не Вам было адресовано...а Том...

Если говорить по вопросу.
Если в мышку введен белок А, то соответсвенно это вызовет иммунный ответ...
Собираю сыворотку с этой мышки и инкубирую ее с таким же белком А.
Вот в прочем опять же тот же вопрос. Как надо разводить сыворотку, содержание белка в которой не понятно и как это соотносить с колличеством белка А, который добавляется в сыворотку для конкуренции.

vb
Постоянный участник

31.01.2018 20:00

URL #17

(Rob @ 31.01.2018 16:05)

вы уверены, что хотите в сыворотке найти именно белок А?
Если вы изучаете иммуногенность белка А, то, наверное, после иммунизации вы исследуете сыворотку на содержание антител против белка А?

Rob
Участник

31.01.2018 23:30

URL #18

и это тоже надо будет исследовать

Rob
Участник

31.01.2018 23:33

URL #19

(Rob @ 01.02.2018 00:30)

и это тоже надо будет исследовать

Да вот такая, для меня не простая задача....Посмотреть на конкуренция белка А с комплексом из сыворотки, который состоит из белка А и антитела к нему....
И посмотреть на содержание белка А в сыворотке...

vb
Постоянный участник

31.01.2018 23:46

URL #20

В общем случае мне представляется, что для конкурентного ифа концентрации должны быть близки. По крайней мере одного порядка. Можно предположить, что белка вы вводите мало, плазмой он разводится и со временим деградирует. Поэтому, скорее всего, разводить сыворотку не нужно. Но обычно условия в ифа подбираются методом серийных разведений, есликоличество реактивов образца позволяют.

что будет с конкурентной реакцией при развитии иммунного ответа и появлении антитнл против белка А, я даже предположить не могу. Думаю, что это вас ждет много неблагодарной работы.

Rob
Участник

01.02.2018 00:04

URL #21

разве ИФА сможет проаналлизировать не разведенную сыворотку?...Читая только лишь ее на ридере, ОД значение до разведения 2000 даже не падает. А если я возьму не разведный продукт, то не увижу ведь ничего...

CowDoc
Постоянный участник
Middle East

01.02.2018 08:04

URL #22

Как пример - 3 тест системы, определение иммуногенности, ответ на 3 антигена в сыворотки крови. И для каждого антигена различное разведение, при условии постановки реакции в одной точке/лунке. Разброс от 1:50 до 1:500
Разумеется, вы должны для валидации метода, получив новые компоненты, традиционно, без лени, шахматкой раститровать и посмотреть, какие разведения лучше.
Да, и если вы определяете ответ на белок А, не проще ли тот же белок засорбировать, а не выдумывать козлячие-против-человечества-на-А?

vb
Постоянный участник

01.02.2018 09:16

URL #23

(Rob @ 31.01.2018 22:04)

К сожалению, я не понимаю полностью схемы реакции и совсем не понимаю дизайна эксперимента. То, что вы пишите - это какие-то отрывочные детали, не дающие представления об общей картине. Поэтому ответить вам что-то внятно не получается.

Например, вы пишете, что изучаете имунногенность белка А. Методы изучения иммуногенности разные. Одно дело имунногенность вакцинного белка, где она желательна другое дело доклинические исследования какого-то препарата, для которого имунногенность нежелательна. Методологические подходы разные.
Тогда уж расписывайте полностью дизайн - сколько, когда, как вы вводите белок. Через какое время берете образцы сыворотки? Потому как в первом случае обнаружить вакцинный антиген после 14 сут внутримышечного введение довольно сложно, а во втором, если вы вводите терапевтический пептид регулярно курсом целый месяц внутривенно - нет проблем.

Сообщение было отредактировано vb - 01.02.2018 11:14

Rob
Участник

01.02.2018 16:59

URL #24

Да рассказываю запутано, сам заметил.
Белок А будут колоть в концентрации 0.1-1 мкг/мл. Будет многократный интервал введения в мышку. Хочу померять концентрацию А в интервалах.

Для начала мне надо определиться с титрованием сыворотки. Есть пока лишь сыворотка, содержащая природный А. В последствии это будет сыворотка с А, который вкалывают.

vb
Постоянный участник

04.02.2018 13:36

URL #25

(Rob @ 01.02.2018 14:59)

Не знаю, стоит ли продолжать...

мне ваша концентрация вообще никак не помогла. Вы можете ввести 0,001 мл и 1 л. Один раз в неделю и три раза в день.
Обычно расчитывают введение препарата в граммах. На голову, на кг веса и т.п.
давайте так
1. Концентрация эндогенного белка А в сыворотке.
2. Количество белка в граммах, вводимого однократно.
3. Частота введения препарата.
4. Метод введения препарата.
5. Точка взятия образцов на анализ. Например, на 2-е сутки после первой иъекции или через 14 сут. после месячного курса.
6. Внятная схема ифа, который вы применяете.

watchesbiz
Постоянный участник

20.11.2021 18:15

URL #26

http://www.authorstream.com/Replicawatches24/
https://about.me/Replicawatches24
https://moz.com/community/users/17050093
https://trello.com/rolexrelicawatches/activity
https://replicarolexwatches.dreamwidth.org/365.html
https://visual.ly/users/watcheshutuk/portfolio
https://www.viki.com/users/watcheshutuk_549/about
https://www.academia.edu/s/14bdb7d4fe?source=link
https://www.slideshare.net/Nowseore/guide-o...ex-watch-online
https://audiomack.com/rolexrelicawatches
https://soundcloud.com/replicarolexwatches
https://www.bagtheweb.com/u/fakerolexwatches/profile
https://www.flipsnack.com/ReplicawatchesUK/...ca-watches.html
https://www.4shared.com/office/zA4L7Rmzea/G...hase_a_Fak.html?
https://codepen.io/Rolexrelicawatches/full/abBEzaQ

watchesonline89
Постоянный участник

26.12.2022 11:30

URL #27

https://telegra.ph/Advantages-Of-Replica-Watches-08-03
https://issuu.com/home/published/_6_.docx
https://www.gta5-mods.com/paintjobs/watchesswiss
https://omegawatches89.onweb.it/
https://padlet.com/omegawatches89/je3eq9ol3xzmb9bp
https://www.pinterest.com/omegawatches89/
https://knowyourmeme.com/users/omegawatches89
https://bitcointalk.org/index.php?topic=76487.new#new
https://omegawatches89.blog.hu/
https://knowyourmeme.com/forums/general/top...f-so-why?page=1
https://penzu.com/p/c6f21f5d
https://www.reddit.com/user/omegawatches89/...are_so_popular/
https://www.vingle.net/posts/4647076
https://penzu.com/p/c68b65cc
https://diigo.com/0pige9

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.