Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Blaid Постоянный участник |
Насколько мне известно, у нативного фореза в ПААГ существуют 2 основных разновидности: 1) Discontinuous Native PAGE (Ornstein-Davis) 2) Continuous Native PAGE Насколько я разобрался, Discontinuous Native PAGE отличается от обычного денатурирующего фореза по Лэммли только тем, что в Discontinuous Native PAGE нигде не используется SDS. А так - все тоже самое (концентрирующий и разделяющий гели на разных по молярности и рН растворах на основе Tris*HCl, ну и проч.). А вот в Continuous Native PAGE, опять же насколько я понял, есть только один гель, который делается на основе т.н. Continuous Buffers (McLellan), pH которых может быть разным (в мануале от камеры Mini-PROTEAN Tetra Cell (Bio-Rad), что у меня, приведены прописи приготовления нескольких таких буферов с рН от 3,8 до 10,2). Ну и все также без SDS. Интересующие вопросы: 1) достоинства и недостатки этих видов нативного фореза 2) чем определяется выбор (предпочтение) того или иного вида нативного фореза 3) от чего зависит выбор рН Continuous Buffers при Continuous Native PAGE 3) в прикрепленном мануале для Discontinuous Native PAGE для приготовления геля даны только прописи от 4 до 10% (для денатурирующего - до 17%); для Continuous Native PAGE - вообще только 4, 5 и 6%-е гели. Почему так? Мультисубединичные белки в конц. гелях не могут двигаться без развала на субединицы? Планирую использовать нативный форез для вестерна (с нитроцеллюлозной мембраной). Искомый белок - пентамер мембранной локализации (эндоплазматический ретикулум), 25 кДа. Не знаю, можно ли вообще даже с помощью нативного фореза разгнать так, чтобы этот пентамер не посыпался (ну, это я про то, что это не димер и даже не тетрамер). Если чего не знаю, сильно не бейте - я в процессе постижения этих "тайн" и премудростей. Может тут нативный и вовсе не нужен? Спасибо! Файл/ы:
|
guest: ммм IP-штамп: frQlBxj4iQSg. гость |
В системе Орнштейна -Дэвиса белки концентрируются в концентрирующем геле и поэтому э/ф зоны белка получаются менее размытыми, но она работает только с белкам pI которых меньше 8(8.5). Для щелочных белков используют кислые аналоги системы Орнштейна Дэвиса и непрерывную систему по Чокли. Еще рекомендую в буфер добавлять ЭДТА для пущей сохранности белка, но если это не мешает белковым взаимодействиям. |
nigoal123 IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE гость |
it sets the tone for |
nigoal123 IP-штамп: frpXPq5TOmUHs гость |
They are writing their |
guest: 123 IP-штамп: frJhOCvSv9ICE гость |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
guest: Ufa1688 IP-штамп: frpXPq5TOmUHs гость |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
guest: Ufa1688 IP-штамп: frdN6q3cADZrs гость |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
guest: Ufa1688 IP-штамп: frpXPq5TOmUHs гость |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |