Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
jelenarus |
Нужен проткол, правильный расчет концентрации всех реагентов. Подскажите, пожалуйста |
R-J-Dio Постоянный участник |
Надо понимать, зачем такое извращение- для ВСЕХ ферментов условия субоптимальные? По буферам и температурам. Вы хотите снизить фон? Для этого не надо класть все в одну пробирку, достаточно после лигирования дорезать лигат, если есть чем. Будет лучше А если хотите сэкономить время, то ваще смешно, лигирвоание идет 15 мин |
ship Постоянный участник Moscow |
|
R-J-Dio Постоянный участник |
|
ship Постоянный участник Moscow |
|
R-J-Dio Постоянный участник |
|
Guest IP-штамп: fr2nCBTtQKhN2 гость |
|
AVP Постоянный участник New Jersey |
(jelenarus @ 13.08.2018 10:32) Здравствуйте. Кто делал рестрикцию и лигирование в одну реакцию? Без использования спец.буферов, а, допустим, с каким-нибудь НЕБовским рестрикционным буфером, например, КатСмарт. На сайте написано, что Т4 лигаза эффективно работает в этом буфере. Нужен проткол, правильный расчет концентрации всех реагентов. Подскажите, пожалуйста не понимаю трудностей, например, при рестрикции и последующем лигировании у вас пропадает сайт рестрикции для данных(ой) рестриктаз(ы). В данной манипуляции нужно учитывать оптимумы температуры как для рестритаз(ы), так и лигазы и возможность дальнейшего убиения вышеперечисленных, например, 65оС (доп. степ, в прграммипуемом инкубаторе). P.S. ключи от квартиры, лежат в тумбочке в прихожей слева как зайдете. Удачи |
R-J-Dio Постоянный участник |
|
watchesonline89 Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |