Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
554 IP-штамп: frGqyYT8IU7LU гость |
неожиданно возник следующий вопрос. обычно аффинную хроматографию на Ni-сефарозы для очистки белков с His-tag проводят при 0.5 М соли ( в прописи так указано). вот. Вопрос такой: можно ли использовать к примеру 0.2 М соль ? и что происходит с понижением соли? И вообще каковы последствия? Спасибо! |
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
|
R.J.Dio Постоянный участник |
|
Esya Постоянный участник PA, USA |
|
ernesta88 Постоянный участник москва |
Если марка probond, Ni-IDA то надо брать 0,5 М натрий хлор т.к. у нее высокий положительный заряд и к ней липнут отрицательно заряженные белки пробонд это не Ni-NTA а Ni-IDA в случае Ni-NTA Quiagen в прописи вместо натрий хлора вообще присутствует трис-хлор для денатурирующих условий и 0,3 М натрий хлор для нативных так что надо в первую очередь смотреть какого производителя колонка,
|
yack moderator Москва, Россия |
Солью забивают ионные взаимодействия, которые очень свойственны для никелевых колонок. Будет сильно зависеть от уровня экспрессии белка. Чем выше, тем меньше соли надо, чтобы забить неспецифику. В большинстве случае, если перегрузить колонку, то неспецифика будет вытеснена целевым продуктом даже в низкой соли. |
Aglaiaa Участник |
|
plotter Постоянный участник Стыдно признаваться о том, где живу... |
На уровне 70кДа вылазят спаренные полоски. Пробовал промывать смолу 1% твином и 1М NaCl, не помогает. Пробовал наносить в 8М моче, тоже нифига. Есть иные варианты, кроме как морочиться с ионкой? Уж больно жить мне эти полосочки мешают... |
Tuco Ramires Постоянный участник Rio Grande |
Файл/ы:
|
plotter Постоянный участник Стыдно признаваться о том, где живу... |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |