Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
zelensky Постоянный участник Ukraine - Israel - Canada -> ??? |
и, кайется, крайне низкой конц-ии <img src="graemlins/weep.gif" border="0" alt="[рев в 3 ручья]" /> , не выросла. Чашка чистая. Можно ли ее засеять ече раз (я имею в виду - соxранили ли X-gal+ITPG свои св-ва? <img src="graemlins/teapot.gif" border="0" alt="[чайник]" /> |
K-2 Постоянный участник |
[ 25-07-2002: Сообщение отредактировано: K^2 ] |
Grunt Постоянный участник |
Если не растет дело может быть в токсичности экспрессируемого продукта (смотря что у вас там заклонировано). Сделайте контроль без ИПТГ. Если не красятся, поинкубируйте еще. Например на 25 град С, чтоб не переростали. |
zelensky Постоянный участник Ukraine - Israel - Canada -> ??? |
[Текст переведён с транслита] |
petr Постоянный участник |
|
Grunt Постоянный участник |
|
|
K^2 |
petr Постоянный участник |
Почему? Узнал только потом. Дело в том, что плазмида - pBluescript, хорошая конечно, но если хранить, то она рекомбинирует и вставку выплевывает. Вот так |
zelensky Постоянный участник Ukraine - Israel - Canada -> ??? |
|
K-2 Постоянный участник |
Бак. культуру после любого хранения следует сначала подращивать в жидкой среде, потом рассевать на чашке, отбирать несколько колоний, наращивать их, выделять плазмиды, проверять и после этого работать с ними. С полудохлыми бактериями лучше не работать, так как при неправильном хранении даже простые плазмиды могут менять сиквенс (немножечко или частично, но достаточно, чтобы загубить Вашу работу), терять сайты и выбрасывать вставку. Поэтому, если есть возможность, для работы лучше брать культуру из музея (хоть кто-нибудь в институте ведь хранит ее правильно?), а не то, что кто-то когда-то забыл в холодильнике. Кажется, у Вас назревают такие выводы... |
zelensky Постоянный участник Ukraine - Israel - Canada -> ??? |
|
K-2 Постоянный участник |
Кстати, м.б., плазмида просто очень низкокопийная? [ 26-07-2002: Сообщение отредактировано: K^2 ] |
zelensky Постоянный участник Ukraine - Israel - Canada -> ??? |
[Текст переведён с транслита] |
K-2 Постоянный участник |
|
kglebov Постоянный участник Германия Гёттинген |
|
Veshka Постоянный участник Москва |
|
Veshka Постоянный участник Москва |
|
Stepa |
[Текст переведён с транслита] |
petr Постоянный участник |
|
petr Постоянный участник |
А IPTG c XGAL^ом сразу не надо (или ставьте контроль), а то и правда мож какое г.. там у вас сидит, и ничего не вырастет, да и сине-булая селекция - это конечно хорошо, но... может большую падлу подкинуть. Уж лучше PCR бактерий. |
K-2 Постоянный участник |
|
zelensky Постоянный участник Ukraine - Israel - Canada -> ??? |
Огромное спасибо - надо переварить инфу и сообразить = что луче. А мойет - проче по-новой трансформировать? [Текст переведён с транслита] |
Veshka Постоянный участник Москва |
2petr. Это Вас уверяли... Блюскрипт ничем от других стандартных высококопийных плазмид в этом плане не отличается. Единственное его преимущество - большой процент суперкойла, что приятно. А так общий принцип работы с подозрительными вставками такой - выкидываете из плазмиды ВСЁ по Pvu II (это проходит со многими вариантами ПУКоподобных плазхмид , клонируете вашего уродца втупую, а потом только разбираетесь... |
petr Постоянный участник |
то Veshka: Сгласен с Вами полностью, но только если одна-две плазмиды, а если много непойми чего, то все же лучше (быстрее) PCR бактерий. Кстати, инверсный PCR у меня прекрасно получился с первого раза, и вот только что загибридизовал его, покрасилось то что надо. Так что СПАСИБО Вам большое за советы. Правда конечно еще дооптимизировать надо будет (ненавижу), и на мой взгляд, весьма важно засамолигировать правильно. |
Veshka Постоянный участник Москва |
|
can be worse Участник |
|
tamm Постоянный участник |
tamm |
petr Постоянный участник |
|
zelensky Постоянный участник Ukraine - Israel - Canada -> ??? |
|
Grunt Постоянный участник |
|
Veshka Постоянный участник Москва |
|
|
Говорят, что при перерастании активно растущей бактерии из-за недостатка пит. в-в, кислорода и избытка метаболитов в искусственых многокопийных плазмидах могут накапливаться ошибки репликации. |
Ivolga Постоянный участник HK |
|
petr Постоянный участник |
|
f1dark Постоянный участник Lahore, Punjab, Pakistan |
|
Ufa1688 Постоянный участник |
|
guest: 123vega IP-штамп: frXqkB4MpP2jQ гость |
|
Ufa1688 Постоянный участник |
|
Abu Road Escorts IP-штамп: frQrtJ1xVpdzY гость |
Website Our Linkes |
Ufa1688 Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |