Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* ОТ-ПЦР в реальном времени
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! PCR777




 прочитанное сообщение 02.04.2019 01:19     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование
Вопрос
Здравствуйте! Ставлю дуплексную ОТ-ПЦР в реальном времени и впервые возникла такая проблема. С одним образцом кДНК реакция проходила нормально(рис.1). Затем была получена кДНК из другого образца, и реакция стала проходить странно: кривые флуоресценции наблюдались только для референсов, и то интенсивность флуоресценции значительно меньше, чем была ранее. Кривые для таргетных генов находились в нуле, за редким исключением (рис.2). ПЦР переделывали много раз, начиная с первых этапов получения кДНК – результаты +/- идентичны. Потом была взята кДНК, которая ранее проходила ПЦР, для проверки реактивов-результат такой же, замена большинства реактивов пока тоже не помогла. Все реакции проводятся для одних и тех же генов, т.е. оптимизация условий не требуется. Получается, проблема не в кДНК и, скорее всего, не в реактивах. Интересует, в чем тогда может заключаться проблема.

Картинки:
картинка: ___.jpg
___.jpg — (68.33к)   

картинка: ___1.jpg
___1.jpg — (57.77к)   

Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 02.04.2019 10:16     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

(PCR777 @ 02.04.2019 02:19)
Ссылка на исходное сообщение  Потом была взята кДНК, которая ранее проходила ПЦР,  для проверки реактивов-результат такой же, замена большинства реактивов пока тоже не помогла.

Т.е. на работающей кДНК реакция тоже не проходит? Что значит "результат такой же"?
Про выделение РНК ничего не сказано.
Да и про реактивы (происхождение) неплохо бы пообщаться.
Участник оффлайн! R-J-Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.04.2019 15:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

и про хранение реактивов тож. может, праймеры накрылись медным тазом, за искл. тех генов, что по-прежнему приходят

Сообщение было отредактировано R-J-Dio - 02.04.2019 15:17
Участник оффлайн! Carbon Copy
Постоянный участник
So close no matter how far



 прочитанное сообщение 02.04.2019 16:34     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Уровень флуоресценции хаузкипера на Рис 2 в два с половиной раза ниже 1500 / 600. Может что то не так с образцом кДНК если он так глушит флюоресценцию? Или вы в разных ячиеках термоблока ставили реакции? Скорее всего с реактивами всё норм. Проблема во втором образце кДНК, загрязнители какие-то.
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  11.11.2021 16:54     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

https://jumpshare.com/v/QxZ9Rn2mfDCaBq2AdBG1
https://www.edocr.com/v/znnrba3z/watcheshut...lica-Watches-UK
https://www.tuugo.us/Companies/best-replica...s/0310006695505
https://topsitenet.com/article/988178-hints...ca-rolex-watch/
http://simp.ly/p/nxGlWb
https://telegra.ph/Hints-on-Choice-of-a-Hig...lex-Watch-02-22
https://replicarolexwatche2.blog.fc2.com/blog-entry-1.html
https://www.knowpia.com/s/blog_60f7e7c31014a97a
https://zenwriting.net/replicawatches24/hin...ica-rolex-watch
https://globalcatalog.com/replicawatchesuk.us/en
http://www.cplusplus.com/articles/iE1wvCM9/
https://eatsleepride.com/c/346210/hints_on_...ica_rolex_watch
https://www.myminifactory.com/users/watcheshutukcom
https://www.mioola.com/ReplicawatchesUK/post/199764/
https://en.gravatar.com/allreplicawatches24
https://8tracks.com/replicawatchesuk

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.03.24 06:55
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft