Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Склеились ядра -- почему? --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! OlgaGen




 прочитанное сообщение 26.04.2013 15:52     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Уважаемые коллеги,
прошу помочь советом, кто сталкивался с данной проблемой:
выделила ядра из замороженной ткани, отмыла в PBS, добавила антител на ядерный белок, и поставила инкубацию на ночь.
После инкубации нужно было отмыть от первичных антител - поставила крутиться на 300g 10 минут и.. около 90% ядер оказалось склеено в несуспендируемый осадок!!
У кого такое было? Как этого избежать?

Спасибо!
Участник оффлайн! Митин
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 26.04.2013 16:41     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Было бы странно, если бы они не склеились. Вы когда-нить слышали про реакцию агглютинации? Насколько я понимаю, антитела у Вас против ламина или какого-то антигена ядерной оболочки, иначе Вы бы разрушали ядра. С обычными двухвалентными антителами они просто обязаны все склеиться, антитела их и склеили. Если Вам надо без этого обойтись, берите одновалентные фрагменты и не экспериментируйте с протоколом, а поищите уже отработанный.

О том, что ядра и без антител склеиваются, я уже не буду, такой осадок хоть как-то разбивается.
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 07.05.2013 14:52     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

(OlgaGen @ 26.04.2013 15:52)
Ссылка на исходное сообщение  Уважаемые коллеги,
прошу помочь советом, кто сталкивался с данной проблемой:
выделила ядра из замороженной ткани, отмыла в ПБС, добавила антител на ядерный белок, и поставила инкубацию на ночь.
После инкубации нужно было отмыть от первичных антител - поставила крутиться на 300г 10 минут и.. около 90% ядер оказалось склеено в несуспендируемый осадок!!
У кого такое было? Как этого избежать?

Спасибо!


"выделила ядра из замороженной ткани, отмыла в ПБС"
http://www.sigmaaldrich.com/etc/medialib/d...p/nuc201bul.pdf

smile.gif


зачем вам ядра для для антител на ядерный белок - прекрасно антитела на ядерный белок лезут в фиксированные колетки
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 07.05.2013 14:55     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

(OlgaGen @ 26.04.2013 15:52)
Ссылка на исходное сообщение  Уважаемые коллеги,
прошу помочь советом, кто сталкивался с данной проблемой:
выделила ядра из замороженной ткани, отмыла в ПБС, добавила антител на ядерный белок, и поставила инкубацию на ночь.
После инкубации нужно было отмыть от первичных антител - поставила крутиться на 300г 10 минут и.. около 90% ядер оказалось склеено в несуспендируемый осадок!!
У кого такое было? Как этого избежать?

Спасибо!


ПБС даже без ЕДТА - уберет вам магний - и ваше ядро растворится smile.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 07.05.2013 15:01     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

(OlgaGen @ 26.04.2013 15:52)
Ссылка на исходное сообщение  Уважаемые коллеги,
прошу помочь советом, кто сталкивался с данной проблемой:
выделила ядра из замороженной ткани, отмыла в ПБС, добавила антител на ядерный белок, и поставила инкубацию на ночь.
После инкубации нужно было отмыть от первичных антител - поставила крутиться на 300г 10 минут и.. около 90% ядер оказалось склеено в несуспендируемый осадок!!
У кого такое было? Как этого избежать?

Спасибо!


магний или спермин-спермидин во всех буфферах для ядер smile.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  07.05.2013 15:10     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

http://genome.ucsc.edu/ENCODE/protocols/ce...am_protocol.pdf
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  07.12.2021 14:37     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

https://wanelo.co/replicarolexwatches
https://musescore.com/fakerolexwatches
https://www.racked.com/users/Replicarolexwatches
https://sketchfab.com/Rolexrelicawatches
http://www.video-bookmark.com/bookmark/433...eplica-watches/
https://www.slideserve.com/ReplicawatchesUK...pt-presentation
https://www.theverge.com/users/Replicarolexwatches
https://www.yumpu.com/en/document/read/6532...lica-watches-uk
https://online.flippingbook.com/view/152275247/
https://www.instapaper.com/p/8767342
https://www.bigblueview.com/users/Replicarolexwatches
https://weheartit.com/watcheshutuk
https://sites.google.com/view/replicarolexwatches24/home
https://www.indiehackers.com/post/hints-on-...atch-113aef73a9
http://replicawatchesuk.esportsify.com/for...ica-rolex-watch
nigoal123
IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  27.05.2022 07:19     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

The first sentence has nigoal one single purpose ลิงค์รับทรัพย์ to entice the reader to sexy gaming Write in a semi-informal dream gaming read the next sentence. ka gaming rewarding to satisfy curiosity.

it sets the tone for 123goal the rest of the article 11hilo hooking the reader in 123bets choose the best three or four. pggame123 one step at a time. big gaming are intrigued by a question
nigoal123
IP-штамп: frpXPq5TOmUHs
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  28.05.2022 09:13     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Many a time you have nigoal seen some writers or ลิงค์รับทรัพย์ people write their problems sexy gaming Write in a semi-informal dream gaming and suggestions in ka gaming some newspapers

They are writing their 123goal opinions and beliefs 11hilo in the form of an article. 123bets choose the best three or four. pggame123 we will get ourselves familiar big gaming with article writing
guest: 123
IP-штамп: frJhOCvSv9ICE
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  02.06.2022 12:18     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

For years there 123VEGA have been FA CHAI SLOT calls for Asia - which JILI SLOT is home to some PRAGMATIC PLAY of the world's สล็อตPG biggest CO2 emitters - to ditch fossil fuels 11HILO to help tackle climate AMB CASINO change. Countries in the region - including FC SLOT its three biggest economies 88KTC China, Japan and India - were criticised last year 123GOAL for not making a bigger.

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.04.24 13:23
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft