molbiol.ru -> Кто знает подробности про белки с (Gis)*6?

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* Кто знает подробности про белки с (Gis)*6?

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

29.07.2001 11:27

URL #1

Мы хотим попробовать этот метод, но не могу найти достаточно подробной информации. Какие характеристики колонки? Можно ли вставить между белком и хвостом некий сайт для протеазы чтобы отщеплять его? Какие эндонуклеазы можно использовать для удаления хвоста?

29.07.2001 14:47

URL #2

Прошу прощения за несколько сумбурный первый текст. Имеется в виду выделение белков в добавленным хвостом в шесть гистидинов. Выделение на никилевой колонке. Один из главных вопросов как его потом удалить?

30.07.2001 13:11

URL #3

http://www.qiagen.com/literature/xpreslit....r>Otschepit' "6xHis tag" ot rekombinantnogo belka mojno chem ugodno: enterokinazoi, trombinom...
Odnako, chasto on ne meshaet.
U nas byl sluchai, kogda protein s tagom na N-kontse ne imel fermentativnoi aktivnosti i expressirovalsya v E.coli bol'shei chast'u v nerastvorimoi forme, no ta je cDNA s tagom na C-kontse okazalas' vpolne aktivnoi i k tomu je expressirovalas' chut' li ne na polovinu v rastvorimoi forme.

30.07.2001 20:45

URL #4

Спасибо! Я сомневался с какой стороны белка ставить хвост, но похоже, что это не суть важно. Энтерокиназа достаточно специфична, однако обычно содержит примеси в виде трипсина. Насколько это может повредить выделенному белку? Можно конечно очень чистую брать, но ж дорогая зараза. А мне надо чуть ли не грамм белка делать 8-((.
Может есть еще какие похожие варианты фьюжинов с откусывыанием тага?

31.07.2001 15:31

URL #5

Variantov dostatochno mnogo, sm. k primeru semeistvo pET ot Novagen:
http://www.novagen.com/SharedImages/Techni.../7_pETTable.htm
No, ya imel vvidu, chto prosche (udobnee) vzyat' prostoi vektor (tipa pQE-30) i vvesti jelaemyi sait posredstvom praimera.
A kak budet vesti sebya TA proteaza kotoruu VY sobiraetes' upotreblyat' Vam predstoit vyyasnit' samostoyatel'no.
Odnako, khotelos' by zametit', chto esli vam deistvitel'no neobkhodim osobo chistyi belok, to posle otschepleniya taga vam ego v lubom sluchae predyotsya chistit'. Vot i ot produktov nespetsifich. proteoliza zaodno izbavites'.

05.08.2001 06:12

URL #6

Попробуйте вставить тромбиновый сайт между His tag'ом и вашим белком. Если не изменяет память, сайт LVPRGS, и щепление происходит между R и G. Высокочистый тромбин можно получить путем очистки грязного и дешевого коммерческого на колонке с гепарином. Примеси на 90% не садятся, тромбин 50% чистоты элюируется при 400-500 мМ NaCl.

15.08.2001 16:29

URL #7

Где-то говорилось, что существует возможность траблов с очисткой на Ni. Вроде как лучше использовать смолу Talon с Co...

16.08.2001 15:32

URL #8

А еще можно попробовать систему IMPACT от New England Biolabs. Очень хорошая система

19.08.2001 21:46

URL #9

Вот мне тут тоже Talon рекомендовали. Буду заказывать. Кому интересно могу потом оставить впечатление.

15.10.2001 19:09

URL #10

В общем на Talon'е получается чище...
А His-tag можно вообще не трогать(то есть даже сайтов для пептидаз не вводить) - пусть себе висит, если конечно он не будет мешать (то есть все зависит от того, что за белок, зачем он нужен и что с ним собираются дальше делать, от этого же зависит куда его приделать на N- или C-конец)
Мне почему-то больше нравится когда гистидины на С-конце....

IAM1688
IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE
гость

26.10.2021 11:54

URL #11

I used to suck at writing, big โกงบาคาร่า time! So I understand the ka gaming struggle. However, I had a 1688คาสิโน lot of help to improve my writing and blogging skills เกมวัววัว and I want to pay it forward to สมัคร สล็อต ka gaming help those sa gaming 1688 who had the same ลิ้งรับทรัพย์ struggles I did! The aim of an article is usually to ราคา บอล talk about a topic that we like or that we are familiar โปรแกรมโกงบาคาร่า with. Besides, one of the features that ไฮโล articles have as opposed to other FCE Writing tasks is รูเล็ต that an article must entertain the สล็อต22 reader and, almos always, สูตรโกงบาคาร่า recommend the thing we are Alice run talking about.

watchesonline89
Постоянный участник

25.12.2022 09:28

URL #12

https://diigo.com/0pigcp
https://penzu.com/p/847cc342
https://writer.zoho.com/writer/open/k3enw4d...b0a3d8cf13c901a
https://eatsleepride.com/c/383274
https://anotepad.com/notes/byixar75
https://www.deviantart.com/omegawatches89/j...tches-930507835
https://form.jotform.com/223253469189061
https://padlet.com/omegawatches89/fvf9g8yhawsjurox
https://anotepad.com/notes/9393ncw8
https://www.crokes.com/omegawatches89/info/
https://www.merchantcircle.com/omegawatches89-houston-tx
https://trello.com/b/kEnu4Gm0/rolex-replica
https://www.instapaper.com/u
https://form.jotform.com/223253136113039
https://www.pinterest.com/pin/957859414473160488/
https://www.pinterest.com/pin/957859414473160566/
https://www.pearltrees.com/omegawatches89#item456651188
https://plaza.rakuten.co.jp/omegawatches89/...y/202208040003/

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.