Rambler's Top100
 		Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* SDS PAAG: проблема
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

 
 Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Zura.zurako
 прочитанное сообщение 07.03.2018 22:42     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование
Коллеги, нужен Ваш совет.

ПААГ электрофорез белков в денатурирующих условиях (5% концентрирующий гель и 15% разрешающий гель). Длина геля ̶ 10 см., толщина ̶ 0.3 мм. Режим электрофореза: 60 мА для двух гелей при напряжении 130 В (источник питания «Эльф-8»).

Есть проблема: белковые треки «пляшут» (см. фото). Сталкивался ли кто-нибудь с подобным? В чём может быть причина?

rgho.st
Участник оффлайн! Zura.zurako
 прочитанное сообщение 07.03.2018 22:45     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование
Почему-то не получилось прикрепить изображение.

http://rgho.st/private/7PFfN69XL/9bee27e9a...f67b3a30be65c0d
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 08.03.2018 10:10     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование
Не факт, но одна из наиболее вероятных причин микротрещины(пузырьки) между концентрирующим и разделяющим гелем
Участник оффлайн! Zura.zurako
 прочитанное сообщение 08.03.2018 11:12     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование
МММ, а как можно избавиться/избежать этих микротрещин( пузырьков)?
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 08.03.2018 12:46     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование
Не давать сохнуть (да и вообще стоять долго после полимеризации) разделяющему гелю использовать хорошие ТЕМЕД и ПСА. Следить что бы концентрирующий гель не полимеризовлся слишком быстро и слишком долго.
Участник оффлайн! Zura.zurako
 прочитанное сообщение 08.03.2018 13:08     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование
Полимеризацию для концентрирующего геля я провожу 20-30 минут, не более.
А может причина "танцев" заключаться в режиме электрофореза?
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 08.03.2018 13:49     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование
(Zura.zurako @ 08.03.2018 14:08)
Ссылка на исходное сообщение
А может причина "танцев" заключаться в режиме электрофореза?

Только если вы сразу начинаете гнать на большом токе. Проблема еще может быть в карманах(неровные) и в пробах(осадки и высокая соль).
Участник оффлайн! Zura.zurako
 прочитанное сообщение 08.03.2018 14:08     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование
60 мА/130 В для двух гелей - это много?
А с карманами, действительно, есть такая проблема: не всегда удаётся убрать то, что не заполимеризовалось, т.к. гель очень тонкий. Правда я не очень понимаю, ведь даже если дно кармана неровное, в концентрирующем геле всё равно всё "сожмётся" в одну узкую (и ровную) полоску и так войдёт в разделяющий?
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 08.03.2018 14:18     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование
для таких тонких гелей на старте - это очень много(если это минигели). Для тонких гелей по аналогии с секвенирущими, наверное имеет смысл использовать гребенку типа акульи зубы.
Участник оффлайн! ship
Постоянный участник
Moscow
 прочитанное сообщение 08.03.2018 15:49     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование
проверьте на всякий случай pH стока SDS, должен быть в районе 8 или чтото около того.
у меня были похожие волны, когда рН упал до 3. тк со временем раствор закисляется
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 09.03.2018 16:15     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование
Если гели сами мастырите то залив разделяюсчииь сверху добавте слегонца бутанола или изопропанола .... как гел запилимеризуется промываите водоиь и заливаите концентрируюсчий....
Никогда не будет пузырей и неровностей...
Участник оффлайн! Zura.zurako
 прочитанное сообщение 09.03.2018 19:21     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование
(Tom1 @ 09.03.2018 17:15)
Ссылка на исходное сообщение  Если гели сами мастырите то залив разделяюсчииь сверху добавте  слегонца бутанола или изопропанола .... как гел запилимеризуется промываите водоиь и заливаите концентрируюсчий....
Никогда не будет пузырей и неровностей...

А если сразу дистиллированную воду? Чем она хуже бутанола или изопропанола?
Участник оффлайн! Zura.zurako
 прочитанное сообщение 09.03.2018 19:27     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование
И какой режим режим электрофореза лучше использовать для подобной системы (два геля, длина каждого ̶ 10 см., толщина ̶ 0.3 мм.)? Имеет ли смысл использовать разные режимы для концентрирующего и разделяющего гелей?
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 09.03.2018 21:28     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование
можно, но вода разбавляет гель и дает разводы....
вгоняите в концентрируюсчий где-то на 40-60 вольтах, а потом можно до 165-220 вольт погнать,
guest: Ольга
IP-штамп: frjQ2JohnsuSs
гость
 прочитанное сообщение 20.03.2018 19:29     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование
Похоже на проблему с рецептом для гели или 2xSDS. Я всегда концентрацию протеинов на нанодропе измеряю и гоню равное количество ug. И пустые линии тоже заполняю 1хSDS и "гоню" гель очень медленно 80V. Когда из stacker экземпляры выйдут, тогда немного повышаю V. А если для публикации, то так и гоню 80V почти до конца. Обожаю Western blotting! А ещё окрашиваю мембрану в Ponceau, чтобы полюбоваться как ровно все прошло smile.gif
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник
 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.11.2021 18:08     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование
http://www.authorstream.com/Replicawatches24/
https://about.me/Replicawatches24
https://moz.com/community/users/17050093
https://trello.com/rolexrelicawatches/activity
https://replicarolexwatches.dreamwidth.org/365.html
https://visual.ly/users/watcheshutuk/portfolio
https://www.viki.com/users/watcheshutuk_549/about
https://www.academia.edu/s/14bdb7d4fe?source=link
https://www.slideshare.net/Nowseore/guide-o...ex-watch-online
https://audiomack.com/rolexrelicawatches
https://soundcloud.com/replicarolexwatches
https://www.bagtheweb.com/u/fakerolexwatches/profile
https://www.flipsnack.com/ReplicawatchesUK/...ca-watches.html
https://www.4shared.com/office/zA4L7Rmzea/G...hase_a_Fak.html?
https://codepen.io/Rolexrelicawatches/full/abBEzaQ
Участник оффлайн! watchesonline89
Постоянный участник
 прочитанное сообщение Сообщение на английском  26.12.2022 11:32     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование
https://telegra.ph/Advantages-Of-Replica-Watches-08-03
https://issuu.com/home/published/_6_.docx
https://www.gta5-mods.com/paintjobs/watchesswiss
https://omegawatches89.onweb.it/
https://padlet.com/omegawatches89/je3eq9ol3xzmb9bp
https://www.pinterest.com/omegawatches89/
https://knowyourmeme.com/users/omegawatches89
https://bitcointalk.org/index.php?topic=76487.new#new
https://omegawatches89.blog.hu/
https://knowyourmeme.com/forums/general/top...f-so-why?page=1
https://penzu.com/p/c6f21f5d
https://www.reddit.com/user/omegawatches89/...are_so_popular/
https://www.vingle.net/posts/4647076
https://penzu.com/p/c68b65cc
https://diigo.com/0pige9

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики 		Назначение кнопок:
   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -  
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 18.04.24 03:37
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft
Powered by Invision Power Board(Trial) v2.0.0 © 2024  IPS, Inc.