Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
plotter Постоянный участник Стыдно признаваться о том, где живу... |
|
R-J-Dio Постоянный участник |
|
ship Постоянный участник Moscow |
|
R-J-Dio Постоянный участник |
|
ASDF Постоянный участник |
|
R-J-Dio Постоянный участник |
|
plotter Постоянный участник Стыдно признаваться о том, где живу... |
R-J-Dio, зачем спектр? Когда соскоб с чашки (для выделения вектора) имеет лимоново-зеленый оттенок, это наводит на вполне определенные мысли
|
criplenie Участник |
Как минимум должно помочь добавление глюкозы в среду (хотя эффект может быть и обратным). А еще лучше - выращивание на минимальной среде типа M9.
|
R-J-Dio Постоянный участник |
(criplenie @ 13.09.2017 12:10) pET-28 по идее должен еще содержать сайт lac-репрессора. Да и остальные промоторы на плазмиде направлены в противоположную сторону. Что, впрочем, не исключает наличие промоторо-подобных последовательностей в самих генах. Как минимум должно помочь добавление глюкозы в среду (хотя эффект может быть и обратным). А еще лучше - выращивание на минимальной среде типа M9. lac I есть, но это репрессор lac-пр, а тут непонятно с чего. И глюкоза тоже потому не поможет (по идее). Минималку, да, попробовать стОит
|
R-J-Dio Постоянный участник |
(plotter @ 13.09.2017 12:09) ASDF, пошукайте у зиморесёрча среду, по их утверждениям полностью блокирующую экспрессию с т7. R-J-Dio, зачем спектр? Когда соскоб с чашки (для выделения вектора) имеет лимоново-зеленый оттенок, это наводит на вполне определенные мысли когда зеленое, тады да, сомнений нет. а ссылку на среду можно? |
plotter Постоянный участник Стыдно признаваться о том, где живу... |
Соседи с этого набора кипятком писают. Но лично я вообще не впечатлился. |
R-J-Dio Постоянный участник |
|
criplenie Участник |
(R-J-Dio @ 13.09.2017 12:40) lac I есть, но это репрессор lac-пр, а тут непонятно с чего. И глюкоза тоже потому не поможет (по идее). Минималку, да, попробовать стОит pETы начиная с pET-11 имеют модифицированный T7-промотор, который дополнительно регулируется lac-репрессором. Но по идее это именно защита от протекания промотора на DE3-лизогенах. One approach is to use vectors that contain what is termed a T7lac promoter (Studier et al., 1990; Dubendorff and Studier, 1991; see table on p. 7). These plasmids contain a lac operator sequence just downstream of the T7 promoter. They also carry the natural promoter and coding sequence for the lac repressor (lacI), oriented so that the T7lac and lacI promoters diverge. См. новагеновский мануал - Там же вопросы терминаторов разобраны. |
qwatra |
Компетентные клетки обеспечивают: - высокую эффективность трансформации большинством плазмидных и λ- векторов - возможность бело-голубой селекции XL1-Blue генотип: recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 supE44 relA1 lac [F'proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)] Эффективность трансформации: 1-5х107 cfu/μg |
R-J-Dio Постоянный участник |
|
nigoal123 IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE гость |
and technical language to help |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |