Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Rob Участник |
Спасибо за помощь.
|
MMM Постоянный участник |
Значит дело в пробах. а) Наиболее вероятная причина проблемы - банальный перегруз по пробам. Вы слишком много наносите общего белка для такого небольшого количества зон. У вас фактически одна зона. Если бы у вас весь общий белок распределялся между несколькими десятками зон, то тогда такая нагрузка на дорожку по общему белку была бы оправдана. При таком бедном спектре нагрузку можно уменьшить в 10-100раз. б) Пробы развалились при приготовлении или хранении. |
Rob Участник |
Делал разведение дополнительное, как Вы и предложили, в10 раз. На геле ничего не было видно. Белки храняться на -80С |
Rob Участник |
|
MMM Постоянный участник |
Странно что у вас ничего не видно при 10х разведении, хотя если зоны так же размыты(деградированы) - это вероятно. Попробуйте сделать раститровку проб по нагрузке. С шагом ~1,5-2х, но похоже это не поможет. Как вернуть деградировавшую пробу в исходное состояние, я думаю, не знает никто. Какой у вас сэмпл буфер? А именно какая концентрация SDS в нем? |
Rob Участник |
Повторил эксперимент, загрузил 0.05mg/mL. Картинка выглядит лучше, но все еще есть смер. Если уменьшить температуру нагрева образцов с 95С до, к примеру, 70С? Это может помочь? |
MMM Постоянный участник |
Сообщение было отредактировано MMM - 08.08.2017 07:57
|
Rob Участник |
|
MMM Постоянный участник |
Там в буфере есть еще сам буфер и чем он концентрированнее тем хуже для фореза. Так что компенсационный SDS лучше добавлять в конечный раствор. |
Rob Участник |
Перегоню образцы. А может быть такой шмер результатом гликозелирования белка? Спасибо. |
MMM Постоянный участник |
(Rob @ 08.08.2017 20:34) Может, но маловероятно там, в шмере обычно хоть какие-то зоны видны, а у вас сплошная мазня. |
Rob Участник |
При добавлении SDS 1.5% гель стал выглядить просто чудесно. Ну и концентрацию уменьшил тоже. Благодарю |
metrim Постоянный участник Москва |
Это чем и как именно его "стабилизируют"? |
Guest IP-штамп: frms6N2MIKC3Y гость |
|
MMM Постоянный участник |
|
metrim Постоянный участник Москва |
(MMM @ 12.11.2017 07:56) У меня тоже вызвало сомнение, что "для стабилизации убирают ингибитор полимеризации".Думал наоборот что барбатируют воздухом, али вовсе кислородом. У меня кстати получилось забавно: я сток акриламидовый не в холодильнике а в комнате держал и год за годом - как бы ничего страшного не происходило. Засыпал я туда смешанный ионобменник и через пару месяцев - вся внезапно заполимеризовалось. |
vb Постоянный участник |
|
metrim Постоянный участник Москва |
1. Фирма дегазирует готовый стоковый раствор, что бы избавить от этой необходимости конечного потребителя. При этом если затем взболтать это дело - дегазация "тютю" + возрастает вероятность самопроизвольной полимеризации 2. Раствор продувают, чем то, может быть воздухом, может газовой смесью, обогащенной кислородом, что бы избежать самополимеризации. Неужели никто не знает единственный верный ответ? В случае со "стабилизированным хлороформом" - туда например добавляют что ли этанол, что бы пресечь образование фосгена... |
-Ъ- Постоянный участник Москва |
(metrim @ 13.11.2017 02:35) Ну т.е. версий, что означает "gas stabilised" в итоге 2: 1. Фирма дегазирует готовый стоковый раствор, что бы избавить от этой необходимости конечного потребителя. При этом если затем взболтать это дело - дегазация "тютю" + возрастает вероятность самопроизвольной полимеризации 2. Раствор продувают, чем то, может быть воздухом, может газовой смесью, обогащенной кислородом, что бы избежать самополимеризации. Неужели никто не знает единственный верный ответ? В случае со "стабилизированным хлороформом" - туда например добавляют что ли этанол, что бы пресечь образование фосгена... Элементарно - используют закон Генри и инертный газ N2, без всяких эксикаторов. |
nigoal123 IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE гость |
and technical language to help |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |