Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
watchesbiz | Отправлен 14.12.2021 08:03 |
Daemonarchestratygos | Отправлен 29.04.2011 23:43 |
(guest: ммм @ 27.04.2011 13:07) -- ТЕМЕDа надо раз в пять больше - полимеризация идет хуже при низком рН Лучше рибофлавин и свет, если есть возможность. Много темеда портит картинку в геле. Во-во, к тому же 1% витамин В2 в любой аптеке продаётся и стоит копейки. |
|
ERiNaCeUS | Отправлен 28.04.2011 17:40 |
буфер для нанесения тоже кислый надо | |
Aleg | Отправлен 27.04.2011 15:46 |
Спасиб, буду пробовать. | |
guest: ммм | Отправлен 27.04.2011 15:07 |
-- ТЕМЕDа надо раз в пять больше - полимеризация идет хуже при низком рН Лучше рибофлавин и свет, если есть возможность. Много темеда портит картинку в геле. |
|
ERiNaCeUS | Отправлен 27.04.2011 13:52 |
Кислый буфер надо, например бета-аланин-ацетатный (80mM Beta-alanine + 40 mM Acetic acid = pH 4.4), еще вариант - 10mM Histidine + 30mM MES = pH 5.4. Разумеется в обратную сторону. Только ТЕМЕDа надо раз в пять больше - полимеризация идет хуже при низком рН | |
guest: ммм | Отправлен 26.04.2011 19:50 |
--может дело в рН буферов? Однозначно, кто ж щелочные белки в щелочных буферах, гоняет обратная полярность здесь не поможет. |
|
Aleg | Отправлен 26.04.2011 19:06 |
Никому не приходилось гонять лизоцим форезом без сдс? Я попытался, взяв стандартную методику SDS PAAG, но все растворы готовил без SDS и DTT, вместо бромфенолового синего взял метиловый зеленый и при гнал с обратной полярностью ( к минусу). Дак у меня в разделяющем геле краситель исчез а при проявке в кумасе оказалось что у меня белок вообще в разделяющий не пошел. Белочек то щелочной, может дело в рН буферов? |
|
Guest | Отправлен 08.04.2011 12:35 |
малые кол-ва ддс между прочим все равно меняют конформацию белка. Пусть это не полная денатурация, но св-ва все равно меняются | |
Guest | Отправлен 08.04.2011 12:33 |
нативный форез по мне это так себе метод, лучше уж на калиброваной колонке гель-фильтрации все делать, если уж нужно чтобы белок не денатурировал. кстати и препаративность присутствует) | |
Посмотреть тему (откроется в новом окне) | |