 * |   |
|
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда |  Zbio-wikiNG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: |
|
Правила
* PAAG электрофорез нативных белков -- comments to a permanent page of the site --
Тема связана с: PAAG в неденатурирующих условиях
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.
   |
 Forum robotПостоянный участник на сервере в Москве  |
 13.05.2005 13:17
|
|
Гость IP-штамп: fra6xdMWXgbHc гость |
13.05.2005 13:17
|
|
А Постоянный участник Россия |
14.05.2005 12:42
|
|
Tecan Участник |
16.05.2005 08:56
|
|
Shusha СПб - Magdeburg |
17.05.2005 11:35
|
|
Гость IP-штамп: frDQwa9k7riYg гость |
12.07.2005 11:47
|
|
Elshad |
22.01.2006 15:44
|
|
Werta Участник Москва |
22.01.2006 20:14
А как было правильно замечено выше - надо гнать разные белки при разном pH |
|
Samuray Suomi |
23.01.2006 23:56
Я как-то пытался определить димеризуется или олигомеризуестя мой рецептор при активации ростовым фактором, приходилось как раз использовать тотальные лизаты и нативный форез. Картинка была страшная, и выходило, что мой рецептор в клетках тетрамеризовался. При добавлении в гель следовых количеств саркозила окрашивание антителами показало присутствие только димера. Позже мы показали что это действительно так - обычный димер. Думаю, что и мизерные кол-ва SDS будут также работать. Хотя нкто не даст грантии, что если есть димер то нет более высокой олигомеризации.... |
|
antiximik Постоянный участник |
15.04.2006 16:42
Лично я подбирал условия для нативного фореза (концентрация "геля", сила тока, рН буфера для разделяющего геля и рН электродного буфера), причем НИГДЕ не присутствовали даже следовые количества ДДС, а пробы подготавливали простым смешением анализируемого раствора с бромфеноловым синим с добавлением глицерина. При этом удавалось "пронаблюдать" наличие тетрамеров, додекамеров, икосамеров... :) З.Ы. К минусам стоит отнести то, что "загружать" белка приходится больше, чем для "обычного" денатурирующего фореза... Дерзайте... |
|
Kas London,UK |
26.06.2006 11:03
|
|
Kas London,UK |
26.06.2006 11:05
|
|
ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
26.06.2006 17:36
|
|
real-sugar |
 01.12.2006 15:24
|
|
Гость IP-штамп: frtbMasbqESIo гость |
13.02.2007 13:25
|
|
Гость IP-штамп: frHWt7eplAB5c гость |
22.02.2007 06:52
|
|
Krosha Участник Москва |
27.03.2007 10:12
|
|
Guest IP-штамп: frtbMasbqESIo гость |
29.03.2007 14:30
|
|
Krosha Участник Москва |
04.04.2007 14:35
Возможно, дадут подробную методику. 1. Вырастить вирус в курином эмбрионе или на культуре клеток 2. Инактивировать формальдегидом 3. Детергент Триметил-Цетил-Аммониум Бромид (TCAD) позволяет выделять гемагглютинин и нейраминидазу в самостоятельные субъединицы. 4. Поверхностные белки выделяются с помощью очередного ультрацентрифугирования. Белки очищаются от детергента и внутренних составляющих вирусной частицы при помощи диализа. Активность выделенного белка зависит от штамма. Некоторые вообще не растут на яйцах, а только на клетках и тд. Там нюансов много. Идентифицировать ГА Вы можете в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) А чью сыворотку Вы собираетесь получать, если не секрет? Протокол иммунизации у Вас есть? Метод РТГА умеете ставить? Условия, чтоб с живым вирусом работать? |
|
SASh IP-штамп: frDQwa9k7riYg гость |
12.04.2007 12:54
|
|
Krosha Участник Москва |
13.04.2007 15:32
В УФЕ этим занимается Микроген. Но будут ли они кому помогать - вопрос. |
|
Krosha Участник Москва |
13.04.2007 15:33
Пишите мне в личку. |
|
Гость IP-штамп: frWKf2AKRVu2Q гость |
26.04.2007 03:42
|
|
guest: ммм IP-штамп: fr.ReEIhc9B8A гость |
16.06.2007 10:46
Дык! это! Пихаете куски геля с вырезанной зоны в диализный пакетик и подвергаете электрофорезу в трис глициновом или трис боратном буфере. Потом извлекаете раствор из мешочка и концентрируете на микроконе или центриконе от милипора. Это один из вариантов. |
|
avor moderator |
16.06.2007 11:25
 
|
|
Tivan |
31.03.2011 18:54
|
|
Tom1 Постоянный участник |
31.03.2011 21:37
(Tivan @ 31.03.2011 08:54)  Помогите, пожалуйста, как провести нативный форез смеси ИгГ ИгМ ИгА. Пробовала в 4% нативном ПААг - смесь не входит в гель. Хочу попробовать агарозный гель. Подскажите, какой нужно использовать буфер для фореза?2-D native-PAGE/SDS-PAGE visualization of an oligomer’s subunits: Application to the analysis of IgG Leticia Gonzalez et. at. Electrophoresis 2006, 27, 2016–2023 © 2006 2.2.1 First-dimensional native PAGE IgG oligomers in sample buffer (60 mM potassium hydroxide, 63 mM glacial acetic acid, 25% v/v glycerol, pH 4) were electrophoresed in a 1 mm thick first-dimensional discontinuous native polyacrylamide slab gel (4% T, 2.1% CBIS stacking gel, pH 4; 6% T, 2.1% CBIS running gel) under acidic conditions (pH 4) according to Reisfeld et al. [3] in a BioRad Mini-Protean II cell. The aqueous anode buffer contained potassium hydroxide (48.5 mM) and glacial acetic acid (4.3% v/v). The aqueous cathode buffer contained b-alanine (350 mM) and glacial acetic acid (0.8% v/v). Proteins were electrophoresed at constant voltage (200 V) until the tracking dye (dimethyl green) reached the bottom of the gel. 2.2.2 Staining of native polyacrylamide gels Separated proteins were visualized by staining polyacrylamide gels by either the native fast silver method of Shevchenko et al. [4], the permanganate silver stain tion for 26 h at room temperature in the dark, and then visualizing using a Chromato-Vac Transilluminator Model TM 10 with a wavelength of 302 nm. Table 1 provides a summary of the fixing and staining protocols. извиняюсь что стайку не привожу полностью. Модеры не дают пдф файл прикреплять гы-гы))) |
|
plotter Постоянный участник Стыдно признаваться о том, где живу... |
01.04.2011 12:47
извиняюсь что стайку не привожу полностью. Лучше так. Статейка через две недели того. А в такой форме будет долго лежать. |
|
Guest IP-штамп: frNgDO7rvIshI гость |
08.04.2011 12:33
|
|
Guest IP-штамп: frNgDO7rvIshI гость |
08.04.2011 12:35
|
|
Aleg |
26.04.2011 19:06
а при проявке в кумасе оказалось что у меня белок вообще в разделяющий не пошел. Белочек то щелочной, может дело в рН буферов? |
|
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
26.04.2011 19:50
Однозначно, кто ж щелочные белки в щелочных буферах, гоняет обратная полярность здесь не поможет. |
|
ERiNaCeUS Участник Москва |
27.04.2011 13:52
|
|
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
27.04.2011 15:07
Лучше рибофлавин и свет, если есть возможность. Много темеда портит картинку в геле. |
|
Aleg |
27.04.2011 15:46
|
|
ERiNaCeUS Участник Москва |
28.04.2011 17:40
|
|
Daemonarchestratygos Постоянный участник |
29.04.2011 23:43
(guest: ммм @ 27.04.2011 13:07) -- ТЕМЕDа надо раз в пять больше - полимеризация идет хуже при низком рНЛучше рибофлавин и свет, если есть возможность. Много темеда портит картинку в геле. Во-во, к тому же 1% витамин В2 в любой аптеке продаётся и стоит копейки. 
|
|
watchesbiz Постоянный участник |
14.12.2021 08:03
|
| « Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |
 |
· Викимарт - все интернет-магазины в одном месте · Доска объявлений Board.com.ua ·
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Powered by Invision Power Board(Trial) v2.0.0 © 2022 IPS, Inc.