Здравствуйте.

Поясните, плиз, по ретровирусам.

На их вирионной (+)РНК обратной транскриптазой синтезируется (-)ДНК, а потом на ней как на матрице синтезируется обратной транскриптазой (+)ДНК. Потом эта вирусная двухцепочечная ДНК попадает в ядро клетки-хозяина и встраивается в его ДНК.

Вопрос. мРНК вируса потом с какой цепи синтезируется - с (-)ДНК или (+)ДНК?

Спасибо.

Спасибо, конечно, но, увы, эти методы недоступны ни по финансовым причинам, ни по материальному обеспечению. Нуклеотидная последовательность неизвестна. О получении антител и трансфекции я вообще молчу .

А почему вас смущает, что антитела к млекопитающим? (Про шипики уже забыли, концентрируемся на синапсах.)

Да, я потом прочитал внимательнее и понял, что нейроны друг друга не находят :-), а их заставляют найтись.

Вы думаете, что изолировать места контактов и выделить это всё из улитки, чтобы потом обработать антителами, не получится?

Так. Тема не закрыта.

Число дендритных шипиков у высших животных коррелирует с числом синапсов. У улиток, похоже, шипики отсутствуют.

Однако нашлась статья, в которой авторы связывают экспрессию синаптофизина в нейронах нужного нам организма, прудовика, с числом синапсов:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21722207

Таким образом, наблюдение за экспрессией этого белка с повестки дня не снимается. Возникает второй вопрос.
В статье изучали экспрессию в культуре сдвоенных нейронов, пре- и постсинептических, которые, насколько я понял, находят друг друга в культуральной жидкости.
Мы хотим всё это увидеть не в культуре, а в организме. Известны нейроны, которые образуют сеть.
Подскажите, пожалуйста, каким образом это следует поступить? Извлекать нейроны, искать место контакта и его окрашивать?

Похоже, кина не будет и этот ваш вопрос был ключевым...

Spiny neurons are rarely found in lower organisms (for example, Drosophila melanogaster
and Caenorhabditis elegans ), indicating that spines evolved to accommodate the more complex functions of ‘advanced’ nervous systems, such as the mammalian brain.

http://www.nature.com/nrn/journal/v2/n12/f...n1201-880a.html

Я с вами согласен, в принципе, но невозможно быть узким специалистом во всём. Мы положились на тех, кто занимается иммуногистохимией.

А можно ссылку, почему не является?

Спасибо.

В принципе, это не означает, что это нельзя интерпретировать как маркер дендритных шипиков.

Спасибо, глянем.

Спасибо, изучим.

Спасибо за идею, конечно, но, полагаю, это уже иной уровень финансирования, который мы не потянем.

1. У улиток многие нейроны легко идентифицируемы и внесены в атласы.
2. Да, не можем сделать так, чтобы нейрон попал в срез. Собственно, я поэтому и задаю вопрос специалистам, потому как гистологический метод и единичные нейроны я как-то не соотношу.
3. Ну, если будет светиться каждый шипик (а я не знаю, как оно там), то считать нормально. Но я не уверен, как оно там :-)

- Вам это для чего нужно?
Для того, чтобы понять, стало ли между клетками больше синапсов после воздействия.

- Считать надо конечно не 3 клетки, а десятки. Ну и в 2-3 повторах эксперимента.
У улитки есть 3 нейрона, ответственных за рефлекс, который будет формироваться в эксперименте. Что происходит с остальными нейронами - нам неважно. Именно их я и имел в виду. Естественно, будет набираться статистика по нескольким животным.

- Какое у вас оборудование? Во что смотреть будете?
У нас никакого оборудования нет, мы выступаем заказчиками. А нам предлагают иммуногистохимию для 3 нейронов, поэтому я пытаюсь разобраться, адекватный ли метод нам предлагают.

Идеальный вариант для нас - электронная микроскопия с подсчётом плотности шипиков в единицах штуки на микрон длины (к примеру). Но она недоступна.

День добрый.

Помогите, пожалуйста, разобраться с одной задачей.

Дано: 3 нейрона улитки, связанные друг с другом.
Надо: посчитать число дендритных шипиков у этих нейронов до и после воздействия.

Предлагается иммуногистохимический метод с использованием антител к синаптофизину.

Вопросы:
1) возможна ли количественная оценка?
2) насколько к 3 нейронам вообще применим данный метод?

Спасибо.

Здравствуйте.

Скажите, пожалуйста, как называется (в том числе по-английски) свойство ионных каналов пропускать ток ионов в обоих направления - как внутрь, так и наружу? Это ведь не универсальное свойство ионных каналов? Какие эксперименты надо поставить, чтобы определить, что канал обладает таким свойством?

Спасибки.

2 -Ъ-

:-)

2 avor

Я и не выхожу, а тут, оказывается, чтец моралей завёлся. Недоработка!

2 R.J.Dio

Мне такой вопрос задал физик, которого в своё время занесло в молбиол. Проблему-то я сразу понял, но у меня классический макроанализ, самая маленькая навеска - сотни миллиграммов, а объёмы - десятки и сотники кубиков, поэтому я сразу сюда написал в надежде, что ситуацию прояснят. Конкретно я не могу сказать, что ему там надо было развести, скину ему ссылку на наш тред - пусть пример приведёт, может, с конкретикой оно будет специалистам понятнее.

да, для примера. а если не стоковый?

Простите, я знаю, что такое КУО и даже знаю, где это применяется - в аптечной технологии лекарств. В статьях для рестриктазы КУО не указывают.

Но я веду речь о другом. Задача: надо приготовить 10 мкл раствора с концентрацией 40 % (масса/объём). Вопрос - как приготовить. Если бы надо было приготовить 10 мл раствора, то я бы готовил растворением навески 4 г в мерной колбе на 10 мл с доведением растворителя до метки. Но как готовить на малых объёмах?

Я имел в виду вот что. Если смешать 4 мг вещества и 10 мкл воды, то не получится 30 % раствор (массо-объёмной концентрации) из-за контракции. А контракция значима, когда концентрация высока. И меня интересует, как поступать в такой ситуации.

Что такое, не понял?

Ну я имел в виду, что растворитель - вода, тогда 1 мкл соответствует 1 мг. :-)

Я привёл пример про рестриктазу условно, я не знаю, как там на самом деле, так как сам молбиол и биохимом не занимаюсь. Но усугублю. Надо приготовить раствор 10 мкл, в котором 4 мг вещества. По сути это 4/14=30 % раствор. Он в итоге явно не будет занимать объём 10 мкл за счёт констрикции. Как быть?

Добрый день.

Мне сегодня задали вопрос, который я хотел бы переадресовать вам как специалистам. Задача такая - надо приготовить раствор малого объёма (для ПЦР рестриктазу развести и т.п.) с высокой концентрацией растворённого вещества, т.е. более 10 %. Как правило в методиках стоит масса/объём.

Я как классический химик готовлю раствор в мерных колбах, и там неважно, какая концентрация, так как всё доводится растворителем до метки. Но как поступать в случае растворов малых объёмов, ведь там до метки не доведёшь, а при смешивании раствора и растворителя объём может быть весьма неаддитивен? Подскажите, пожалуйста, как это делать?

Спасибо.

Я тут нашёл список мушиных "гнёзд". Прикрепляю, может, кому понадобится.

2 Replikant

Спасибо большое!

В мышах тоже используют! И тоже в этих же моделях! Мне нужно понять принципиальную возможность, и как оно работает. С Cre я более менее разобрался. И хочется всё-таки иметь возможность регулировать уровень экспрессии с помощью дозы тетра.