Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Ответ в Методы

Иконка сообщения*  [ Без иконки ]   Важно!   Вопрос   Информация     Обмен опытом   Шутка, забавная история     Поздравления, благодарности   Возмутительно!   Проблема   Картинки, фотографии
Введите имя

 [вст. закрывающие теги*

*


*



Смайлик: согласен Смайлик: не согласен Смайлик: улыбка Смайлик: пожалуйста, умоляю! Смайлик: помираю со смеху Смайлик: подмигивание Смайлик: подшучивать, дразнить Смайлик: смущение Смайлик: мне стыдно Смайлик: жуть! Смайлик: не понял Смайлик: закатывать глаза Смайлик: недовольство, огорчение Смайлик: рёв в три ручья Смайлик: злость Смайлик: супер Смайлик: умник Смайлик: чайник Смайлик: сходка Смайлик: Ура! Смайлик: не получается!
Перевод выделенного текста из латиницы в кирилицу. Текст в квадратных скобках '[]' не преобразуется

Пример: biologija -> биология [b] - полужирный шрифт

Пример: [b]полужирный[/b] [i] - курсив

Пример: [i]курсив[/i] [u] - подчёркнутый

Пример: [u]подчёркнутый[/u] [sup] - верхний индекс

Пример: температура 37[sup]o[/sup]C [sub] - нижний индекс

Пример: H[sub]2[/sub]O - вода [QUOTE] - применяется для цитирования чужих сообщений, цитата вставляется с небольшим отступом от края текста

Пример: [QUOTE]цитата[/QUOTE] [code] - форматирование как при вводе
Применяется для вывода теста как он есть, с предотвращением форматирования (автопереноса на новую строку), без интерпретации кодов форума и смайликов; вставляется с небольшим отступом от края текста.

Пример: 
[code]
программный код
	1 строка
	2 строка
[/code] [list] - список:
возможны опции: 1, a, A, i, I
[list] неупорядоченный; 
[list=1] нумерованный; 
[list=A] упорядоченный по буквам A-Z

Пример:
[list=1]
[*] первая строка;
[*] вторая строка;
[/list] Тег [hr] - горизонтальная разделительная линия

Пример: 
Абзац 1
[hr]
Абзац 2 [url] - гиперссылка

Примеры:
[url]www.ncbi.nlm.nih.gov[/url]
[url=http://www.ncbi.nlm.nih.gov/]NCBI[/url] [email] - ссылка на адрес электронной почты

Пример: [email]masha@mail.ru[/email] Тег [img] - рисунок
[img] - в строке;
[imgL] - выравнивание по левому краю; 
[imgR] - выравнивание по правому краю.

Пример:
[img]http://molbiol.ru/izo/rl.gif[/img] [ru] - только для русских читателей

Пример:
[ru]это увидят только те, кто использует русский интерфейс[/ru] [en] - только для английских читателей

Пример:
[en]это увидят только те, кто использует английский интерфейс[/en] [self] - текст виден только вам и администрации

Пример:
[self]это увидите только вы сами[/self]
[left] - выравнивание по левому краю

Пример: [left]текст слева[/left] [center] - выравнивание по центру

Пример: [center]текст в центре[/center] [right] - выравнивание по правому краю

Пример: [right]текст справа[/right] [just] - выравнивание по обоим краям

Пример: [just]выровненный текст[/just]

     размер сообщения / макс. размер:  / 15360


Последние 10 сообщений [ в обратном порядке ]
Liudmila Отправлен 05.08.2010 20:26
  Спасибо, ммм, спасибо, Tom1!
Учту ваши советы!
Tom1 Отправлен 05.08.2010 19:48
 
(Liudmila @ 05.08.2010 09:16)
Ссылка на исходное сообщение  Том1, спасибо за внимание!
1.Оцениваю увеличение фосфорилирования качественно, на глазок.
2.Использую антитела к фосфопептидам.
3. Да, присутствуют: использую апротинин, леупептин, ортованадат и ПМСФ. Несколько лет назад эта методика работала в этой же научной группе, а теперь в моих руках - не получается.
Обнаружила в интернете, что в случае антител против фосфопептидов надо использовать БСА вместо молока на всех этапах обработки блота, а я использовала молоко в случае вторичного антитела. Неужели это имеет значение?!

1. я бы насыпал кроме вандата исчо и флорит натрия и ортофосфат натрия.
2. НИКАКОГО МОЛОКА!!!!!! ТОЛьКО БСА!!!!! в молоке полным полно фосфобелков и большауя веротность что ваши антела туда и уходят.
3. что бы я обязательно сдлел бы поставил контроль на фосфорелирование ваших белков схема такая : ИП ваших белков делите на три части и одну не обрабатываите фосфотазой, вторая треть + фосфотаза и третья +фосфотаза+ ингибиторы и смотрите все вестерном.....
guest: ммм Отправлен 05.08.2010 19:47
  --Да, присутствуют: использую апротинин, леупептин, ортованадат и PMSF. Несколько лет назад эта методика работала в этой же научной группе, а теперь в моих руках - не получается

Гуга! Здесь ингибитор фосфатаз ванадат, разве что.

Мой вам совет добавить в форез и во все буфера: сэмпл, для переноса, инкубации и тд. ЭДТА до 1мМ. Очень помогает от фосфатаз дешево и сердито.

-а я использовала молоко в случае вторичного антитела. Неужели это имеет значение?!

А вы сами то подумайте основной белок молока это что? - КАЗЕИН. А казеин один из самых фосфорилированных белков. Желатин еще можно вместо BSA.
Liudmila Отправлен 05.08.2010 19:16
  Tom1, спасибо за внимание!
1.Оцениваю увеличение фосфорилирования качественно, на глазок.
2.Использую антитела к фосфопептидам.
3. Да, присутствуют: использую апротинин, леупептин, ортованадат и PMSF. Несколько лет назад эта методика работала в этой же научной группе, а теперь в моих руках - не получается.
Обнаружила в интернете, что в случае антител против фосфопептидов надо использовать БСА вместо молока на всех этапах обработки блота, а я использовала молоко в случае вторичного антитела. Неужели это имеет значение?!
Tom1 Отправлен 05.08.2010 18:28
 
(Liudmila @ 05.08.2010 08:05)
Ссылка на исходное сообщение  Дорогие коллеги,
Кто-нибудь определял уровень фосфорилирования белков вестерн-блоттингом? У меня методика упорно не работает: уровень фосфорилирования оказывается многократно ниже, чем должно быть. Обращаюсь с белками как для обычного вестерн-блота. Куда могут деться фосфатные группы?
Спасибо за любые предположения!

1. Что вы имеите ввиду говоря об уровне фосфорелирования???? Типа количественный анализ с помощью щестерна??????
2. Чем красите??? просто антителами на белок????? или специфическими к фосфопептидам или же на фосфо-аминокилоты??????
3. В когда получаите образцы ( до варки) в буфере присуствуют ингибиторы фосфотаз и какие???????
Liudmila Отправлен 05.08.2010 18:05
  Дорогие коллеги,
Кто-нибудь определял уровень фосфорилирования белков вестерн-блоттингом? У меня методика упорно не работает: уровень фосфорилирования оказывается многократно ниже, чем должно быть. Обращаюсь с белками как для обычного вестерн-блота. Куда могут деться фосфатные группы?
Спасибо за любые предположения!
АннБелла Отправлен 07.07.2010 16:02
  Почему вы не заливаете гель и сразу гребенку в него,зачем такие сложности.

А вы попробуйте хоть раз! smile.gif))))
Поскольку агарозе в смешанном геле положено застывать раньше, чем ПААГ (отсюда и хитрости с подбором концентрации ТЭМЕД и ПСА), то и правильность приготовления такого геля подтверждается образованием характерной границы при застывании. Она напоминает шхеры и фьорды на карте Норвегии smile.gif И если опустить гребёнку сразу (что, кстати, и делалось ради прикола), то весь этот сюр образуется вокруг зубцов. Старик Остерман про это предупреждает. До того, чтобы посмотреть, какие при этом будут полосы, мои приколы не не дошли smile.gif
Гели на стекле я красила. Это первое, что приходит в голову. Честно говоря, не очень понравилась степень прокрашивания. Но попробовать один раз "пришить его
ковалентно" и возможно, подувеличить насыщенность растворов серебра и проявителя попробовать можно. И хочется посмотреть, потеряю я стекло после этого, или нет. Есть у меня парочка покоцаных, могу пожертвовать ради науки smile.gif


Если в Москве, то могу подсказать, где их можно купить. Если в Пущино, то заходите. Налью .
Я в Питере smile.gif
В Пущино бывать доводилось, месяцок там жила smile.gif


В любом случае, спасибо всем за живейшее участие!
guest: ммм Отправлен 06.07.2010 14:07
  -Потом немного помучаетесь, сдирая гель со стекла, но это можно и стерпеть.

Стекол не напасешси.

Уж лучше модифицировать ПЭТ пленку, или подложку из полистирола.

Тогда проблема отдирания отпадет сама собой.
genseq Отправлен 06.07.2010 13:43
  Тогда всё проще. Нужно работать на чистом ПААГ, но как-то решить проблему его окрашивания. Это не так уж и сложно. На стекло наносите винилтриэтоксисилан. Можно раствор в ацетоне, а можно и без растворителя. Достаточно смочить сторону, прилегающую к гелю. Он пришивается к стеклу и активирует поверхность винильными группами. Промываете водой, сушите и всё. К этой поверхности тонкий гель в процессе полимеризации пришивается, причём ковалентно. Держится намертво. Гель будете красить прямо на стекле. Потом немного помучаетесь, сдирая гель со стекла, но это можно и стерпеть.

Если винилтриэтоксисилан отсутствует, подойдёт и более распространённый АПТЭС (аминопропилтриэтоксисилан), но его нужно будет обработать ещё глицидилметакрилатом. Остаётся только добыть требуемые реактивы. Если Вы за бугром, то ничем не могу помочь. Если в Москве, то могу подсказать, где их можно купить. Если в Пущино, то заходите. Налью beer.gif .

Успехов!
guest: ммм Отправлен 06.07.2010 13:31
  --он рекомендует после застывания основного геля и срезания границы заливать сверху агарозу 0.3%, в которой формируются карманы. Ну не липнет она к основному гелю! С гребёнкой кусками выходит. Делала и 0.5% (как в основном геле) и 0,4% - вроде всё нормально, формируются карманы, пробы вносятся хорошо.

Почему вы не заливаете гель и сразу гребенку в него,зачем такие сложности.

--В принципе, можно работать на ПААГ без агарозы - там нет вопросов, всё очень хорошо и замечательно. Кроме момента прокрашивания. Надо быть просто хирургом высшей квалификации, чтобы красить в серебре гель 20*20, 0.75мм и 2,6% ПААГ ((

Могу лишь посоветовать сделать много-много биса. Например 2% АА и 1% Биса
Посмотреть тему (откроется в новом окне)

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 17.10.19 12:27
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft