Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
AlexSky |
|
MMM Постоянный участник |
Сообщение было отредактировано MMM - 12.07.2018 15:48 |
Tom1 Постоянный участник |
30 минут и все.... |
vb Постоянный участник |
|
Tom1 Постоянный участник |
(vb @ 12.07.2018 12:00) Ну смотря что делать. Если быстро скрнцентрировать, то мне на центрифужных удобнее было. Заодно от мелочи почиститься. "Волобуев" читать совсем не товос..... пассажир спрашивает как проверить агрегацию белка.... |
sceptique Постоянный участник временной жизни |
Накой для проверки агрегации фильтр то нужен? Крутишь на 14 тысячах - переливаешь в другой эппендорф, осадок со дна со снятым супером растворяешь в одном и том же объёме 8М гуанидина с СДС и смотришь в 1см кювете на 280нм сколько там белка. Или по Лоури хромофором определяешь... И вся кинетика аггрегации - только эппендорфы, центрифуга и некривые руки... Открученный белок в супере тоже можно мерять на просвет, занулив бейслайн по нему в начале. ПОПРАВКА: если речь не об АГГРЕГАЦИИ, а о СВЯЗЫВАНИИ - метод не работает. Сообщение было отредактировано sceptique - 13.07.2018 15:49 |
Tom1 Постоянный участник |
зАТО их отлично видно на сайзинге.... то что описал пассажир тупое выпадение белка в осадок.... а уж про связывание и говорить нечего.... |
NMR-guy Постоянный участник временной жизни |
а если что-то доросло до микроагрегатов - то будет агрегировать и дальше, пока не вывалится всё что может. этот процесс, кстати, виден даже в 1см-кювете, по изменению поглощения на 280нм. также, если при концентрации 1х что-то неохотно агрегирует (медленно) - увеличь рабочие концентрации белка до 5-10х и всё пойдёт гораздо быстрее и заметнее. |
Tom1 Постоянный участник |
даже в концентрации высокой.... все конечно зависит от белка, но в среднем не агрегируют оне.... |
vb Постоянный участник |
(Tom1 @ 13.07.2018 13:42) Так непонятно. Я думал проверить как себя белки ведут в этих концентраторах. А имелось в виду проверить уже слипнутый белок? Тады эксклюзионная вэжх само то. Для аналитических целей эти приборы хреново приаенять. Там черте что происходить может. Может белок просто на мембрану налипнуть. |
NMR-guy Постоянный участник временной жизни |
(Tom1 @ 13.07.2018 18:16) о как.... мальчонка уже модерами мне грозит..... сразу видно из мальчишей-кибальчишей.... заложник.... Милай совершенно не обязательно что белок с микроагрегатами перейдет в макро осадок.... даже в концентрации высокой.... все конечно зависит от белка, но в среднем не агрегируют оне.... "В среднем", "хайли лайкли" - так будете в отчётах писать хозяевам. Не видел ни одного белка, который при превышении предела растворимости при pH-ионной силе не валился бы на дно (откуда его по часам, дням и месяцам спокойно отковыриваешь и измеряешь, следя за тем, чтобы сумма была близкой в растворе и над ним к 100%). А комплексы после образования вываливаются и клеются друг к другу даже ещё более радостно, чем отдельные белки их составляющие. Более того, почти все белки требуют специальной стабилизации и долгосрочной оптимизации хранения, поскольку не в каждом растворе год пролежат в холодильнике или морозилке без потери активности, если их нельзя сушить. (vb @ 13.07.2018 19:57) Так непонятно. Я думал проверить как себя белки ведут в этих концентраторах. А имелось в виду проверить уже слипнутый белок? Тады эксклюзионная вэжх само то. Для аналитических целей эти приборы хреново приаенять. Там черте что происходить может. Может белок просто на мембрану налипнуть. Если человек просит амиконы - врятли у него есть хроматограф или марсоход с ракетой SpaceX, господа. НАсчёт мембраны - полностью согласен, так наверняка и будет. Посему этот дикий способ приведет у него к исчезновению белка и сверху и снизу мембраны, после чего он её помыв обнаружит, что просил её зря. |
litvaalexa |
|
Horse-radish Участник |
|
watchesonline89 Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |