Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Rob Участник |
CHO-dhfr стабильная линия, которая находиться в адгезионной кондиции нужно адаптировать в суспензию. Мои попытки это провести остаюся неудачными. В адгезионной кондиции линия растет при 10% FBS и DMEM питательная среда, перевожу в шейкер и меняю среду на Expi-CHO и снижаю FBS до 5%. Т.к. планирую постепенно уменьшение концентрации FBS. Буду признателен за советы. Благодарю. |
MMM Постоянный участник |
А зачем такие мучения? Разве нет суспензионных линий CHO, которые можно тупо купить? |
Rob Участник |
Хочу уточнить алгоритм действий...Собираю плавающие клетки и перевожу их в колбу для суспензии. Среду не меняю и процент FBS не убавляю...Выращиваю...опять пересеваю в колбу...При этом уже не чистую среду DMEM, а смешиваю с новой средой... Все верно?...Или может надо сразу на шейкер ставить колбу? |
MMM Постоянный участник |
Вам хочется прямого решения - их нет у меня. Решать проблему придется самостоятельно. Методом проб и ошибок. Среду на среду с пониженным содержанием кальция можно менять даже на конфлюэнтной чашке. А вот содержание сыворотки менять до тех пор пока не отберется суспензионная популяция не стоит. Даже более того ее можно повышать до 15-20%, при пересеве на суспензионнную гидрофобную посуду. При пересеве в гидрофобную культуральную посуду(как бы для суспензий) суспензию надо довести до достаточно большой концентрации(центрифуга). Среду тоже использовать с уменьшением концентрации кальция. Если вы сняли суспензию в чистой DMEM, то снижать кальций надо медленнее, а не гопом-перескоком. Если вы уже постепенно уменьшили кальций в адгезионной чашке, то при переносе в гидрофобную, лучше по кальцию ничего не менять, а менять при следующем пересеве , когда будет видно, что популяция в суспензии делится. как то так. Еще раз: конкретное решение придется найти самому. При чем для другой линии оно может не сработать. И еще может быть неприятность - в процессе адаптации к суспензии можно потерять, генную модификацию, обеспечивающую продукцию целевого белка. |
Rob Участник |
Напрашивается вопрос, а может стоит делать линию уже в суспензионной среде. Вот как тогда проводить селекцию....Да, надо разбираться с этой темой. |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |