Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Нужен совет!
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Marisellina




 прочитанное сообщение 17.07.2016 23:30     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Ситуация такая. Есть кДНК образцов. Есть набор для дифференциальной диагностики ВПГ1/ВПГ2 (фирма РЕАЛБЕСТ). Протокол подразумевает использование ДНК. ДНК выделить не удалось (выделяли из соскобов эпителия, которые хранились в Trizol (остались после выделения из них РНК).

Вопрос следующий: можно использовать кДНК???
Участник оффлайн! vb
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 18.07.2016 06:43     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Не факт. Вообще такой вопрос нужно разработчикам наборов задавать. Смотря на какие области у них праймеры. Потом, чисто теоретически, вирусная мрнк наверняка быстро деградирует. Пробовать нужно. Хотя, кому это нужно, выдирать зубы через задний проход?

Всего благодарностей: 2Поблагодарили (2): borigv, NMR-guy
Участник оффлайн! distemper
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 19.07.2016 11:39     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Я бы не стал, все вопросы "почему?" в Google

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Marisellina
Участник оффлайн! Marisellina




 прочитанное сообщение 19.07.2016 23:58     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

(vb @ 18.07.2016 07:43)
Ссылка на исходное сообщение  Не факт. Вообще такой вопрос нужно разработчикам наборов задавать. Смотря на какие области у них праймеры. Потом, чисто теоретически, вирусная мрнк наверняка быстро деградирует. Пробовать нужно. Хотя, кому это нужно, выдирать зубы через задний проход?



Спасибо за отличную идею написать разработчикам!

В том то и дело, что очень нужно)))
Участник оффлайн! Marisellina




 прочитанное сообщение 20.07.2016 00:02     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

(distemper @ 19.07.2016 12:39)
Ссылка на исходное сообщение  Я бы не стал, все вопросы "почему?" в Google



Спасибо за ответ!
Но кроме Google, хотелось бы грамотного и обоснованного ответа от человека, который хорошо разбирается в данной тематике. Я исследователь "зеленый" и хочется, чтоб кто-то подсказал!
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 20.07.2016 13:07     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

(Marisellina @ 17.07.2016 23:30)
Ссылка на исходное сообщение  Ситуация такая. Есть кДНК образцов. Есть набор для дифференциальной диагностики ВПГ1/ВПГ2 (фирма РЕАЛБЕСТ). Протокол подразумевает использование ДНК. ДНК выделить не удалось (выделяли из соскобов эпителия, которые хранились в Trizol (остались после выделения из них РНК).

Вопрос следующий: можно использовать кДНК???

Попробовать точно можно - хуже уже не будет, разве не так? shuffle.gif rolleyes.gif Если там активная вирусная инфекция протекает, то кДНК должно содержать мишень праймеров. Я бы попробовал а не спрашивал тут.
Участник оффлайн! X34
Участник



 прочитанное сообщение 20.07.2016 14:59     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

(NMR-guy @ 20.07.2016 14:07)
Ссылка на исходное сообщение  Попробовать точно можно - хуже уже не будет, разве не так?  shuffle.gif  rolleyes.gif Если там активная вирусная инфекция протекает, то кДНК должно содержать мишень праймеров. Я бы попробовал а не спрашивал тут.

я вас умоляю, это явно медики, у них есть набор для дифференциальной диагностики ВПГ1/ВПГ2. и потом эти диагносты с вашей помощью поставят плюс-минус диагноз жЫвому чилавеку. контролей выделения нет уже по определению. при минус результате что в карту пациенту писать будем?: вирус не обнаружен, но мы правда не тем набором выделили, ХЗ как поставили, вобщем ответственности за резалт не несем

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Marisellina
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.07.2016 15:57     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Че та я в России не встречал врачей, которые диагнозы по ПЦР ставят. Вот тех кто отправляет делать ПЦР - анализы хоть катерпиллером в пирамиду собирай.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Marisellina
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 20.07.2016 16:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Не, по написанному видно что это не медик - какой-то горе-биолог был на работе заставлен заниматься не своим делом. Это НИИ чего-то, судя по уровню обращения с биоматериалом. И диагно оно никакой ставить не будет, этому чуду важно есть там ДНК вируса или нет. Понятное всем дело, что нарушенный изначально протокол и результаты его траблшутинга не дают ни результатов публикабельного качества (все равно придется повторять!), ни, разумеется, основания для диагностики. Чудо сие просто спрашивает, можно ли что-то еще узнать ДЛЯ СЕБЯ. Я и отвечаю - для себя можно, и коротко обосновываю почему. Если человек под это подпишет заключение - сама будет дура. Ибо совет на молбиоле не считается за экспертную консультацию за подписью с печатью учреждения shuffle.gif

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Marisellina
Участник оффлайн! ship
Постоянный участник
Moscow



 прочитанное сообщение 20.07.2016 17:39     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

для ПЦР диагнотстики герпеса явно не выделяют рнк тризолом, с последующим синтезом кДНК и хранением остатоков биоматериала.

Кстати вопрос девочке, а как вы определили то, что ДНК из соскобов не удалось выделить и чем вы выделяли?
Так как количество материала в соскобе думаю таки очень ограниченное, и если вы выделяете тотальную днк, то ее и выделиться крохи, и если вы вдруг например меряли концентрацию и она была на уровне нуля и гнали форез и ничего не увидели, то это не значит что с этого нельзя поставить ПЦР успешно.

Всего благодарностей: 2Поблагодарили (2): Marisellina, NMR-guy
Участник оффлайн! Marisellina




 прочитанное сообщение 20.07.2016 23:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

Спасибо всем откликнувшимся!!!

Да, я врач. Но моя специальность никак не связана с этим исследованием! Никто не собирается ставить диагноз пациенту, ибо генитальный герпес и так виден невооруженным глазом.

Работа фундаментальная!!!

Все протоколы были соблюдены. Изначально нужна была РНК, ее и выделяли. А на данном этапе нужно отдифференцировать ВПГ1 от ВПГ 2. А те образцы, в которых ничего не найду, просто исключу из анализа.

Вобщем, буду пробовать выделять ДНК из тризола и ставить ПЦР с тем количеством, которое получится.
Участник оффлайн! vb
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 21.07.2016 08:01     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

Расскажешь, что получилось. Для расширения кругозора, так сказать.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Marisellina
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 21.07.2016 10:32     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

(Marisellina @ 21.07.2016 00:48)
Ссылка на исходное сообщение   буду пробовать выделять ДНК из тризола

confused.gif пытаюсь разобраться confused.gif
Образцы таки залиты тризолом и хранятся или кДНК в наличии? confused.gif

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Marisellina
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 21.07.2016 12:26     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

(Marisellina @ 20.07.2016 23:48)
Ссылка на исходное сообщение  Спасибо всем откликнувшимся!!!

Да, я врач. Но моя специальность никак не связана с этим исследованием!  Никто не собирается ставить диагноз пациенту, ибо генитальный герпес и так виден невооруженным глазом.

Работа фундаментальная!!!

Все протоколы были соблюдены. Изначально нужна была РНК, ее и выделяли. А на данном этапе нужно отдифференцировать ВПГ1 от ВПГ 2. А те образцы, в которых ничего не найду, просто исключу из анализа.

Вобщем, буду пробовать выделять ДНК из тризола и ставить ПЦР с тем количеством, которое получится.

После долгого хранения в тризоле ДНК-шаблон будет терять свою реакционную активность в ПЦР. Если бы в тризоле не было ГТЦ - у Вас бы получилось. По моим наблюдениям - в любом аминосодержащем буфере при комнатной температуре время полуинактивации шаблона составляет 2-3 дня (сильно зависит от длины ампликона между праймерами, 2-3 дня это для амликонов 500-700 нуклеотидов, 100-150 нуклеотидов и через месяц стояния в аминных буферах относительно неплохо ПЦРятся).

Если вдруг у Вас появятся специфичные положительные продукты в ПЦР против ДНК-шаблона из тризола - пожалуйста отпишитесь, мне важно это знать.

(-Ъ- @ 21.07.2016 10:32)
Ссылка на исходное сообщение  confused.gif пытаюсь разобраться confused.gif
Образцы таки залиты тризолом и хранятся или кДНК в наличии? confused.gif

По-моему сия дама имеет как образцы в тризоле, так и кДНК с них.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Marisellina
Участник оффлайн! Marisellina




 прочитанное сообщение 21.07.2016 22:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

(NMR-guy @ 21.07.2016 13:26)
Ссылка на исходное сообщение  После долгого хранения в тризоле ДНК-шаблон будет терять свою реакционную активность в ПЦР. Если бы в тризоле не было ГТЦ - у Вас бы получилось. По моим наблюдениям - в любом аминосодержащем буфере при комнатной температуре время полуинактивации шаблона составляет 2-3 дня (сильно зависит от длины ампликона между праймерами, 2-3 дня это для амликонов 500-700 нуклеотидов, 100-150 нуклеотидов и через месяц стояния в аминных буферах относительно неплохо ПЦРятся).

Если вдруг у Вас появятся специфичные положительные продукты в ПЦР против ДНК-шаблона из тризола - пожалуйста отпишитесь, мне важно это знать.
По-моему сия дама имеет как образцы в тризоле, так и кДНК с них.



Точно!
И хоть к Тризолу прилагается протокол для выделения ДНК, выделилась она в концентрации 8-10 нг/мкл максимум... (мерила на нанодропу).
Участник оффлайн! Marisellina




 прочитанное сообщение 21.07.2016 22:49     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

(NMR-guy @ 21.07.2016 13:26)
Ссылка на исходное сообщение  После долгого хранения в тризоле ДНК-шаблон будет терять свою реакционную активность в ПЦР. Если бы в тризоле не было ГТЦ - у Вас бы получилось. По моим наблюдениям - в любом аминосодержащем буфере при комнатной температуре время полуинактивации шаблона составляет 2-3 дня (сильно зависит от длины ампликона между праймерами, 2-3 дня это для амликонов 500-700 нуклеотидов, 100-150 нуклеотидов и через месяц стояния в аминных буферах относительно неплохо ПЦРятся).

Если вдруг у Вас появятся специфичные положительные продукты в ПЦР против ДНК-шаблона из тризола - пожалуйста отпишитесь, мне важно это знать.
По-моему сия дама имеет как образцы в тризоле, так и кДНК с них.



Спасибо Вам за ответ! Я обязательно напишу, что получится!
Участник оффлайн! ship
Постоянный участник
Moscow



 прочитанное сообщение 21.07.2016 23:07     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

(Marisellina @ 21.07.2016 20:48)
Ссылка на исходное сообщение  Точно!
И хоть к Тризолу прилагается протокол для выделения ДНК, выделилась она в концентрации 8-10 нг/мкл максимум... (мерила на нанодропу).

этого более чем достаточно для ПЦР! хотя конечно и развал и нуклеотиды тоже дадут поглощение.
вообще с ПЦР проще поставить реакцию с того что есть, чем два дня форуме искать ответы))) ну если конечно у вас реактивов не на пару реакций есть

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): NMR-guy
Участник оффлайн! aelana

Москва



 прочитанное сообщение 11.08.2016 14:25     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

так наймите специалиста он ответит на все ваши вопросы) бесплатно вряд ли вам расскажут
Участник оффлайн! IMK
Участник



 прочитанное сообщение 12.08.2016 13:07     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

Герпесвирусы - это ДНК-содержащие вирусы. Причем тут кДНК?
Участник оффлайн! vb
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 12.08.2016 14:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #20 множественное цитирование

(IMK @ 12.08.2016 11:07)
Ссылка на исходное сообщение  Герпесвирусы - это ДНК-содержащие вирусы. Причем тут кДНК?

потому что труд должен быть трудным.
потому что удаление гланд через жопу - национальный вид спорта.

Всего благодарностей: 2Поблагодарили (2): Ivalex, IMK
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  24.11.2021 15:24     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #21 множественное цитирование

https://www.uptrennd.com/post-detail/hints-...-watch~ODY3MDU2
https://anotepad.com/note/read/mqg8p5jm
https://www.crokes.com/replicarolexwatches/profile/
https://ko-fi.com/post/Watches-Shopping-Gui...-Watc-E1E13PZV9
https://www.merchantcircle.com/blogs/replic...x-Watch/1966540
https://www.nairaland.com/6427528/watches-s...de-finding-fake
https://www.vingle.net/posts/3587193
https://fortunetelleroracle.com/sport/replica-watches-280478
https://www.goodreads.com/story/show/132736...ake-rolex-watch
https://www.diigo.com/item/note/85twz/phwr?...2395edb2dac07ea
https://github.com/ReplicawatchesUK/Replica...ake-Rolex-Watch
https://www.reddit.com/user/Bestreplicawatc...ke_rolex_watch/
https://slashdot.org/submission/13306958/wa...ake-rolex-watch
https://www.wattpad.com/1030107359-replica-...guide-finding-a
https://www.instructables.com/member/Fakero...licPreview=true

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.04.24 22:26
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft