Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Marisellina |
Вопрос следующий: можно использовать кДНК??? |
vb Постоянный участник |
|
distemper Постоянный участник |
|
Marisellina |
(vb @ 18.07.2016 07:43) Не факт. Вообще такой вопрос нужно разработчикам наборов задавать. Смотря на какие области у них праймеры. Потом, чисто теоретически, вирусная мрнк наверняка быстро деградирует. Пробовать нужно. Хотя, кому это нужно, выдирать зубы через задний проход? Спасибо за отличную идею написать разработчикам! В том то и дело, что очень нужно))) |
Marisellina |
(distemper @ 19.07.2016 12:39) Спасибо за ответ! Но кроме Google, хотелось бы грамотного и обоснованного ответа от человека, который хорошо разбирается в данной тематике. Я исследователь "зеленый" и хочется, чтоб кто-то подсказал! |
NMR-guy Постоянный участник временной жизни |
(Marisellina @ 17.07.2016 23:30) Ситуация такая. Есть кДНК образцов. Есть набор для дифференциальной диагностики ВПГ1/ВПГ2 (фирма РЕАЛБЕСТ). Протокол подразумевает использование ДНК. ДНК выделить не удалось (выделяли из соскобов эпителия, которые хранились в Trizol (остались после выделения из них РНК). Вопрос следующий: можно использовать кДНК??? Попробовать точно можно - хуже уже не будет, разве не так? Если там активная вирусная инфекция протекает, то кДНК должно содержать мишень праймеров. Я бы попробовал а не спрашивал тут. |
X34 Участник |
(NMR-guy @ 20.07.2016 14:07) Попробовать точно можно - хуже уже не будет, разве не так? Если там активная вирусная инфекция протекает, то кДНК должно содержать мишень праймеров. Я бы попробовал а не спрашивал тут. я вас умоляю, это явно медики, у них есть набор для дифференциальной диагностики ВПГ1/ВПГ2. и потом эти диагносты с вашей помощью поставят плюс-минус диагноз жЫвому чилавеку. контролей выделения нет уже по определению. при минус результате что в карту пациенту писать будем?: вирус не обнаружен, но мы правда не тем набором выделили, ХЗ как поставили, вобщем ответственности за резалт не несем
|
MMM Постоянный участник |
|
NMR-guy Постоянный участник временной жизни |
|
ship Постоянный участник Moscow |
Кстати вопрос девочке, а как вы определили то, что ДНК из соскобов не удалось выделить и чем вы выделяли? Так как количество материала в соскобе думаю таки очень ограниченное, и если вы выделяете тотальную днк, то ее и выделиться крохи, и если вы вдруг например меряли концентрацию и она была на уровне нуля и гнали форез и ничего не увидели, то это не значит что с этого нельзя поставить ПЦР успешно.
|
Marisellina |
Да, я врач. Но моя специальность никак не связана с этим исследованием! Никто не собирается ставить диагноз пациенту, ибо генитальный герпес и так виден невооруженным глазом. Работа фундаментальная!!! Все протоколы были соблюдены. Изначально нужна была РНК, ее и выделяли. А на данном этапе нужно отдифференцировать ВПГ1 от ВПГ 2. А те образцы, в которых ничего не найду, просто исключу из анализа. Вобщем, буду пробовать выделять ДНК из тризола и ставить ПЦР с тем количеством, которое получится. |
vb Постоянный участник |
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
(Marisellina @ 21.07.2016 00:48) пытаюсь разобраться Образцы таки залиты тризолом и хранятся или кДНК в наличии?
|
NMR-guy Постоянный участник временной жизни |
(Marisellina @ 20.07.2016 23:48) Спасибо всем откликнувшимся!!! Да, я врач. Но моя специальность никак не связана с этим исследованием! Никто не собирается ставить диагноз пациенту, ибо генитальный герпес и так виден невооруженным глазом. Работа фундаментальная!!! Все протоколы были соблюдены. Изначально нужна была РНК, ее и выделяли. А на данном этапе нужно отдифференцировать ВПГ1 от ВПГ 2. А те образцы, в которых ничего не найду, просто исключу из анализа. Вобщем, буду пробовать выделять ДНК из тризола и ставить ПЦР с тем количеством, которое получится. После долгого хранения в тризоле ДНК-шаблон будет терять свою реакционную активность в ПЦР. Если бы в тризоле не было ГТЦ - у Вас бы получилось. По моим наблюдениям - в любом аминосодержащем буфере при комнатной температуре время полуинактивации шаблона составляет 2-3 дня (сильно зависит от длины ампликона между праймерами, 2-3 дня это для амликонов 500-700 нуклеотидов, 100-150 нуклеотидов и через месяц стояния в аминных буферах относительно неплохо ПЦРятся). Если вдруг у Вас появятся специфичные положительные продукты в ПЦР против ДНК-шаблона из тризола - пожалуйста отпишитесь, мне важно это знать. (-Ъ- @ 21.07.2016 10:32) По-моему сия дама имеет как образцы в тризоле, так и кДНК с них.
|
Marisellina |
(NMR-guy @ 21.07.2016 13:26) После долгого хранения в тризоле ДНК-шаблон будет терять свою реакционную активность в ПЦР. Если бы в тризоле не было ГТЦ - у Вас бы получилось. По моим наблюдениям - в любом аминосодержащем буфере при комнатной температуре время полуинактивации шаблона составляет 2-3 дня (сильно зависит от длины ампликона между праймерами, 2-3 дня это для амликонов 500-700 нуклеотидов, 100-150 нуклеотидов и через месяц стояния в аминных буферах относительно неплохо ПЦРятся). Если вдруг у Вас появятся специфичные положительные продукты в ПЦР против ДНК-шаблона из тризола - пожалуйста отпишитесь, мне важно это знать. По-моему сия дама имеет как образцы в тризоле, так и кДНК с них. Точно! И хоть к Тризолу прилагается протокол для выделения ДНК, выделилась она в концентрации 8-10 нг/мкл максимум... (мерила на нанодропу). |
Marisellina |
(NMR-guy @ 21.07.2016 13:26) После долгого хранения в тризоле ДНК-шаблон будет терять свою реакционную активность в ПЦР. Если бы в тризоле не было ГТЦ - у Вас бы получилось. По моим наблюдениям - в любом аминосодержащем буфере при комнатной температуре время полуинактивации шаблона составляет 2-3 дня (сильно зависит от длины ампликона между праймерами, 2-3 дня это для амликонов 500-700 нуклеотидов, 100-150 нуклеотидов и через месяц стояния в аминных буферах относительно неплохо ПЦРятся). Если вдруг у Вас появятся специфичные положительные продукты в ПЦР против ДНК-шаблона из тризола - пожалуйста отпишитесь, мне важно это знать. По-моему сия дама имеет как образцы в тризоле, так и кДНК с них. Спасибо Вам за ответ! Я обязательно напишу, что получится! |
ship Постоянный участник Moscow |
(Marisellina @ 21.07.2016 20:48) Точно! И хоть к Тризолу прилагается протокол для выделения ДНК, выделилась она в концентрации 8-10 нг/мкл максимум... (мерила на нанодропу). этого более чем достаточно для ПЦР! хотя конечно и развал и нуклеотиды тоже дадут поглощение. вообще с ПЦР проще поставить реакцию с того что есть, чем два дня форуме искать ответы))) ну если конечно у вас реактивов не на пару реакций есть
|
aelana Москва |
|
IMK Участник |
|
vb Постоянный участник |
(IMK @ 12.08.2016 11:07) потому что труд должен быть трудным. потому что удаление гланд через жопу - национальный вид спорта.
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |