Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Гель-электрофорез изолированных клеток -- DNA-comet assay --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Квест




 прочитанное сообщение 29.03.2013 08:54     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Pharmaсol @ 27.02.2013 16:00)
Ссылка на исходное сообщение  Официально метод называется  sperm chromatin dispersion test. Метод хорош тем, что используется световая микросокпия. Если есть флуоресцентник, метод теряет смысл, ибо если заключили спермии с гель, денатурировали ДНК и депротеинизировали, то до полноценных ДНК-комет остается только шаг электрофореза. А ценность показателей поврежденности ДНК в кометах выше, чем просто посчитать соотношение спермиев с различной степенью дефрагментации ДНК.
Кроме того, обратите внимание, что спермиями с фрагментированной ДНК они считают те, которые не дают гало или оное маленькое. И это очень странно, ибо если есть разрывы в ДНК, то она будет охотнее давать гало. Здесь у г-на Фернандеса нестыковочка получается.


Есть идея получать данные непосредственно в поле, куда флуоресцентный микроскоп везти не хочется, а форезить в поле для последующего фотографирования дома не хватит времени.
Что касается размера гало, то в предыдущих работах они выявили отрицательную корреляцию между площадью ореола и "сигналом гибридизации in situ с использованием в качестве зонда суммарной геномной ДНК человека, согласно методу DBD-FISH <...> , используемому для визуализации уровня фрагментации ДНК".
Хотя, чего-то я не понимаю, как это получается... Заведующий предположил, что из "плохих" клеток получаются огромные рыхлые гало, которые не красятся/красятся слабо и не могут быть детектированы.

Интерес из чисто академического переходит в практический.
Авторы пишут, что "наиболее предпочтительным является раствор, который содержит около 2,5 М NaCl, около 0,2 М DTT, около 0,2 М триса, около 1% Тритона Х-100 и имеет рН около 7,5".
Чем, кроме 2-меркаптоэтанола (указан авторами как альтернатива), можно заменить DTT? Интернет сообщает, что DTT используется для восстановления дисульфидных связей в молекулах белков. Что еще Вы используете для этой цели?

Сообщение было отредактировано Квест - 29.03.2013 10:04
Участник оффлайн! Pharmaсol
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 30.03.2013 19:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Для релаксации хроматина спермиев для ДНК-комет инкубируем сначала в лизирующем буфере с DTT, потом с дийодосалицилатом лития (Lithium 3,5-diiodosalicylate). Чем заменить ДТТ кроме "ароматного" 2-меркаптоэтанола не могу подсказать. А почему ДТТ не хотите?

Сообщение было отредактировано Pharmaсol - 31.03.2013 13:12
Участник оффлайн! Квест




 прочитанное сообщение 01.04.2013 06:34     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Pharmaсol @ 30.03.2013 20:03)
Ссылка на исходное сообщение  Для релаксации хроматина спермиев для ДНК-комет инкубируем сначала в лизирующем буфере с DTT, потом с дийодосалицилатом лития (Lithium 3,5-diiodosalicylate). Чем заменить ДТТ кроме "ароматного" 2-меркаптоэтанола не могу подсказать. А почему ДТТ не хотите?

DTT хотим, только ещё не купили, а запуститься нужно вчераsmile.gif
Можно, конечно, поклянчить в других лабораториях, тогда чем шире спектр, тем больше вероятность, что что-нибудь наидётся.

A new method to analyze boar sperm DNA fragmentation under bright-field or fluorescence microscopy - статья с картинкой про размер гало и фрагментацию.
Участник оффлайн! Pharmaсol
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 19.11.2014 00:52     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

OECD выпустил финальную версию руководства по проведению метода ДНК-комет in vivo.
OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 4, Health Effects
TG 489 In Vivo Mammalian Alkaline Comet Assay.
http://www.oecd-ilibrary.org/environment/t...789264224179-en
Метод официально признан в качестве экспертного.

ЗЫ. за этот год обновлены руководства на 4 метода по оценке генотоксичности, еще на 2 - драфты. Чтобы это значило confused.gif

Сообщение было отредактировано Pharmaсol - 19.11.2014 00:55

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): semi
Участник оффлайн! kent




 прочитанное сообщение 19.11.2014 18:42     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

а зачем нужен метод комет вроде один из древних ненужных методов
Участник оффлайн! semi
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 13.01.2015 18:05     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Pharmaсol @ 19.11.2014 01:52)
Ссылка на исходное сообщение  OECD выпустил финальную версию руководства по проведению метода ДНК-комет in vivo.
OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 4, Health Effects
TG 489 In Vivo Mammalian Alkaline Comet Assay.
http://www.oecd-ilibrary.org/environment/t...789264224179-en
Метод официально признан в качестве экспертного.

ЗЫ. за этот год обновлены руководства на 4 метода по оценке генотоксичности, еще на 2 - драфты. Чтобы это значило  confused.gif

Вдобавок:
Специализированный выпуск журнала Mutagenesis от 1 января 2015 года, посвящённый comet assay http://mutage.oxfordjournals.org/content/30/1.toc

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Pharmaсol
Участник оффлайн! rambler87
Участник



 прочитанное сообщение 14.01.2015 02:21     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Pharmaсol @ 10.04.2010 21:54)
Ссылка на исходное сообщение  я бы сказал нюансов  smile.gif

мы делали МСК, нормально получалось, могу картинку выложить. Про ЭСК ничего сказать не могу

согласен, надо поработать с качеством препаратов
PS коллеги, хочу поделиться ссылкой на книжку Dhawan A.,Anderson D.(eds.) The Comet Assay in Toxicology (RSC, 2009), найденной в глубинах инета  smile.gif
user posted image
КАЧАЕМ



У кого-нибудь есть электронный вариант книжки?
Участник оффлайн! Pharmaсol
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 14.01.2015 10:56     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Есть. Почту давайте (можно в ЛС).
Участник оффлайн! rambler87
Участник



 прочитанное сообщение 14.01.2015 21:25     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

скинул.
А могли бы в открытом доступе файл положить
Участник оффлайн! Olia Brie




 прочитанное сообщение 08.12.2015 12:54     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Всем добрый день! Опрос общественного мнения smile.gif кто какими микроскопами пользуется для анализа изображений комет? Мы пользовались старым добрым Carl Zeiss Jena Fluoval. Сейчас думаем приобрести что-то более современное jump.gif Что посоветуете?
я
IP-штамп: frHhgVquL86aY
гость



 прочитанное сообщение 11.12.2015 08:33     Сообщение для модератора       

(Pharmaсol @ 30.03.2013 19:03)
Ссылка на исходное сообщение  Чем заменить ДТТ кроме "ароматного" 2-меркаптоэтанола не могу подсказать.


TCEP shuffle.gif
Участник оффлайн! KS7




 прочитанное сообщение 11.03.2016 07:55     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Добрый день. В методических рекомендациях МР 4.2. 0014 – 10 «Оценка генотоксических свойств методом ДНК-комет in vitro» прочитала, что после инкубации клеток с исследуемым веществом и отмывкой клеток СРАЗУ приступают к приготовлению микропрепаратов для дальнейшего электрофореза. Возможно ли хранение клеток до этапа получения микропрепаратов в течении нескольких часов для транспортировки в другой институт?
Участник оффлайн! Pharmaсol
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.03.2016 14:00     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

По идее можно поместить клетки на лед и в нем же перевозить, но исследований, в которых оценивали бы влияние длительного хранения/перевозки экспонированных клеток на показатели нет, следовательно полученные результаты могут быть поставлены под сомнение.
Участник оффлайн! KS7




 прочитанное сообщение 11.03.2016 14:39     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Pharmaсol @ 11.03.2016 15:00)
Ссылка на исходное сообщение  По идее можно поместить клетки на лед и в нем же перевозить, но исследований, в которых оценивали бы влияние длительного хранения/перевозки экспонированных клеток на показатели нет, следовательно полученные результаты могут быть поставлены под сомнение.

Pharmacol, спасибо за объяснение smile.gif
Участник оффлайн! Nett
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.03.2016 16:05     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Коллеги перевозили из Мск в СПб пробы крови на +4, но опять же - на свой страх и риск.
Участник оффлайн! Swordy




 прочитанное сообщение 21.06.2016 16:34     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Ребята, скажите, а ни у кого нет 4-5 микролитров тысяча- или десятитысячекратного раствора красителя sybr green?? В обмен на что-нибудь=)

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Belkin hvost
Участник оффлайн! semi
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 21.06.2016 20:37     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Swordy @ 21.06.2016 17:34)
Ссылка на исходное сообщение  Ребята, скажите, а ни у кого нет 4-5 микролитров тысяча- или десятитысячекратного раствора красителя sybr green?? В обмен на что-нибудь=)

У меня есть.
В Москве.
Участник оффлайн! Olia Brie




 прочитанное сообщение 26.04.2017 13:36     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

А у кого-то есть вот эта книжечка?
The Comet Assay in Toxicology: 2nd Edition
http://pubs.rsc.org/en/content/ebook/978-1...;divbookcontent
Поделитесь, пожалуйста.
Участник оффлайн! dk
Постоянный участник
Россия



 прочитанное сообщение 26.04.2017 15:14     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес

to Olia Brie
Для подобных запросов на форуме есть специальная тема.
А книжка вот эта - она?
Участник оффлайн! Olia Brie




 прочитанное сообщение 27.04.2017 11:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(dk @ 26.04.2017 16:14)
Ссылка на исходное сообщение  to Olia Brie
Для подобных запросов на форуме есть специальная тема.
А книжка вот эта - она?


О! Спасибо огромное! smile.gif
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 27.04.2017 15:56     Сообщение для модератора         Личное письмо

(Swordy @ 21.06.2016 17:34)
Ссылка на исходное сообщение  Ребята, скажите, а ни у кого нет 4-5 микролитров тысяча- или десятитысячекратного раствора красителя sybr green?? В обмен на что-нибудь=)

Обнаружил пост слишком поздно. У меня есть. Буду в Москве 15 мая.
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 27.04.2017 16:28     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

надо было еще добавить: "30 литров, отолью бутылку бесплатно" smile.gif
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  23.11.2021 15:27     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

https://replicawatches24.tumblr.com/post/64...lica-watches-uk
https://ello.co/replicawatchesuk/post/ubut9ig9g4glx-q6nyphka
https://www.evernote.com/shard/s451/client/...%2BWatches%2BUK
https://www.bloglovin.com/@rolexrelicawatch...replica-watches
https://www.designspiration.com/watcheshutuk/saves/
https://write.as/fakerolexwatches/hints-to-...lica-watches-uk
https://www.dailystrength.org/journals/hint...lica-watches-uk
https://issuu.com/replicawatchesuk/docs/dif...he_replica_watc
https://www.keepandshare.com/discuss2/5601/...lica-watches-uk
https://penzu.com/public/9e250377
https://bestreplicawatc.livejournal.com/336.html
https://www.pearltrees.com/replicawatchesuk/item349627941
https://www.intensedebate.com/people/watches24
https://anonfiles.com/N039Qf66q9/Guide_On_H...atch_Online_pdf

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 02.04.24 13:31
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft