Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Квест |
(Pharmaсol @ 27.02.2013 16:00) Официально метод называется sperm chromatin dispersion test. Метод хорош тем, что используется световая микросокпия. Если есть флуоресцентник, метод теряет смысл, ибо если заключили спермии с гель, денатурировали ДНК и депротеинизировали, то до полноценных ДНК-комет остается только шаг электрофореза. А ценность показателей поврежденности ДНК в кометах выше, чем просто посчитать соотношение спермиев с различной степенью дефрагментации ДНК. Кроме того, обратите внимание, что спермиями с фрагментированной ДНК они считают те, которые не дают гало или оное маленькое. И это очень странно, ибо если есть разрывы в ДНК, то она будет охотнее давать гало. Здесь у г-на Фернандеса нестыковочка получается. Есть идея получать данные непосредственно в поле, куда флуоресцентный микроскоп везти не хочется, а форезить в поле для последующего фотографирования дома не хватит времени. Что касается размера гало, то в предыдущих работах они выявили отрицательную корреляцию между площадью ореола и "сигналом гибридизации in situ с использованием в качестве зонда суммарной геномной ДНК человека, согласно методу DBD-FISH <...> , используемому для визуализации уровня фрагментации ДНК". Хотя, чего-то я не понимаю, как это получается... Заведующий предположил, что из "плохих" клеток получаются огромные рыхлые гало, которые не красятся/красятся слабо и не могут быть детектированы. Интерес из чисто академического переходит в практический. Авторы пишут, что "наиболее предпочтительным является раствор, который содержит около 2,5 М NaCl, около 0,2 М DTT, около 0,2 М триса, около 1% Тритона Х-100 и имеет рН около 7,5". Чем, кроме 2-меркаптоэтанола (указан авторами как альтернатива), можно заменить DTT? Интернет сообщает, что DTT используется для восстановления дисульфидных связей в молекулах белков. Что еще Вы используете для этой цели? Сообщение было отредактировано Квест - 29.03.2013 10:04 |
Pharmaсol Постоянный участник |
Сообщение было отредактировано Pharmaсol - 31.03.2013 13:12 |
Квест |
(Pharmaсol @ 30.03.2013 20:03) Для релаксации хроматина спермиев для ДНК-комет инкубируем сначала в лизирующем буфере с DTT, потом с дийодосалицилатом лития (Lithium 3,5-diiodosalicylate). Чем заменить ДТТ кроме "ароматного" 2-меркаптоэтанола не могу подсказать. А почему ДТТ не хотите? DTT хотим, только ещё не купили, а запуститься нужно вчера Можно, конечно, поклянчить в других лабораториях, тогда чем шире спектр, тем больше вероятность, что что-нибудь наидётся. |
Pharmaсol Постоянный участник |
OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 4, Health Effects TG 489 In Vivo Mammalian Alkaline Comet Assay. Метод официально признан в качестве экспертного. ЗЫ. за этот год обновлены руководства на 4 метода по оценке генотоксичности, еще на 2 - драфты. Чтобы это значило Сообщение было отредактировано Pharmaсol - 19.11.2014 00:55
|
kent |
|
semi Постоянный участник Москва |
(Pharmaсol @ 19.11.2014 01:52) OECD выпустил финальную версию руководства по проведению метода ДНК-комет in vivo. OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 4, Health Effects TG 489 In Vivo Mammalian Alkaline Comet Assay. Метод официально признан в качестве экспертного. ЗЫ. за этот год обновлены руководства на 4 метода по оценке генотоксичности, еще на 2 - драфты. Чтобы это значило Вдобавок: Специализированный выпуск журнала Mutagenesis от 1 января 2015 года, посвящённый comet assay
|
rambler87 Участник |
(Pharmaсol @ 10.04.2010 21:54) я бы сказал нюансов мы делали МСК, нормально получалось, могу картинку выложить. Про ЭСК ничего сказать не могу согласен, надо поработать с качеством препаратов PS коллеги, хочу поделиться ссылкой на книжку Dhawan A.,Anderson D.(eds.) The Comet Assay in Toxicology (RSC, 2009), найденной в глубинах инета У кого-нибудь есть электронный вариант книжки? |
Pharmaсol Постоянный участник |
|
rambler87 Участник |
А могли бы в открытом доступе файл положить |
Olia Brie |
|
я IP-штамп: frHhgVquL86aY гость |
(Pharmaсol @ 30.03.2013 19:03) TCEP |
KS7 |
|
Pharmaсol Постоянный участник |
|
KS7 |
(Pharmaсol @ 11.03.2016 15:00) По идее можно поместить клетки на лед и в нем же перевозить, но исследований, в которых оценивали бы влияние длительного хранения/перевозки экспонированных клеток на показатели нет, следовательно полученные результаты могут быть поставлены под сомнение. Pharmacol, спасибо за объяснение |
Nett Постоянный участник |
|
Swordy |
|
semi Постоянный участник Москва |
(Swordy @ 21.06.2016 17:34) Ребята, скажите, а ни у кого нет 4-5 микролитров тысяча- или десятитысячекратного раствора красителя sybr green?? В обмен на что-нибудь=) У меня есть. В Москве. |
Olia Brie |
The Comet Assay in Toxicology: 2nd Edition Поделитесь, пожалуйста. |
dk Постоянный участник Россия |
Для подобных запросов на форуме есть А книжка |
Olia Brie |
(dk @ 26.04.2017 16:14) О! Спасибо огромное! |
-Ъ- Постоянный участник Москва |
(Swordy @ 21.06.2016 17:34) Ребята, скажите, а ни у кого нет 4-5 микролитров тысяча- или десятитысячекратного раствора красителя sybr green?? В обмен на что-нибудь=) Обнаружил пост слишком поздно. У меня есть. Буду в Москве 15 мая. |
LMP Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |