molbiol.ru -> волоски в лунках

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* волоски в лунках -- ПААГ --

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

SofaSofia

16.04.2013 10:04

URL #1

Подскажите пожалуйста! Кто сталкивался и как решил эту проблему? После того как заливаешь гель и ставишь гребешки, гель застывает. и когда снимаешь их в лунках остаются мелкие волоски геля, которые потом мешают заливать образцы. Из за чего это может быть? Иногда их нет, прям идеальный гель получается, а иногда вот так, прям мучаюсь (((

R.J. Dio
Постоянный участник

16.04.2013 10:30

URL #2

ну, волоски- это неточно, скорее, ошметки, кусочки пленки ПААГ, образовавшиеся в зазоре месду стеклами и гребенкой. тут несколько советов: 1) возможно, у Вас неродная гребенка, чуть тоньше спейсеров, вот зазор и большой, туда много затекает, после вытаскивания все это остается в лунке и мешает наносить. Подберите гребенку потолще 2) попытайтесь вытаскивать гребенку чуть раньше, как только застыл остаток геля в стаканчике- остаток всегда надо оставлять как контроль полимеризации. При более раннем вытаскивании гребенки и Вас есть шанс застать гель в зазоре еще в полужидком состоянии и - переходим к пункту 3) промывайте лунки перед нанесением форезным буфером, берете шприц или кубовый самплер, и промываете, при этом все остатки вымываются и лунка становится чище

-Ъ-
Постоянный участник
Москва

16.04.2013 12:04

URL #3

Вытаскиваете гребенку раньше времени, я тоже такого же мнения.
Следите за комнатной температурой!

ernesta88
Постоянный участник
москва

16.04.2013 12:05

URL #4

аналогичная проблема кстати чаще нет чем есть, но одно время было постоянно лол.

по-моему с этим остается только смириться ну и еще несколько помогает использование наконечников типа таких: http://www.helicon.ru/catalog/detail.php?I...ELEMENT_ID=4212

ну и еще можно иглой инсулинового шприца (или чем-то другим тонким и железным) типа грубо прочистить ячейки (не промывать а просто все это "разгрести")

R.J. Dio
Постоянный участник

16.04.2013 12:15

URL #5

вообще, если это РЕАЛЬНО траболит, значит, точно слишком тонкая гребенка. Обычно зазор невелик и дерьма мало или нет вообще. Просто народ расслабился, уж никто не льет 0.2 мм гели, ну или толстые на 0.4, если б там были такие проблемы, ручного сиквенса не существовало бы вовсе!

-Ъ-
Постоянный участник
Москва

16.04.2013 12:20

URL #6

Засохшие полосочки геля на гребенке от предыдущей заливки тоже может быть причиной.
Если гребенка входит между стеклами свободно, нужно зажимать стекла осторожно бульдожками поверх гребенки чтобы исключить зазор между гребенкой и стеклами.

guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость

16.04.2013 12:32

URL #7

Еще если гребенка плохо отполирована(зубцы поцарапаны как с ребра так и с плоской поверхности или дефекты изготовления в виде неровностей на зубьях) тоже такая хрень может быть.

SofaSofia

16.04.2013 13:02

URL #8

ой спасибки всем за ответы!может действительно гребенка тоньше чем зазор.... как то не обращала внимания, но заходит свободно. разгрести тоже пытаюсь, но это столько времени занимает ((. И еще попробую на счет пораньше убрать гребенку

Thorn
Участник

16.04.2013 13:07

URL #9

Добрый день, Сам сталкивался с такой проблемой. Дело в соотношении ПСА и ТЕМЕДа, если слишком много ПСА и ТЕМЕДа, то полимеризация происходит очень быстро и образуется данная "сеть" в лунках.
способ решения проблемы: брать 1% ПСА. и добавлять не больше 1 мл на 10 мл геля и не больше 15 мкл ТЕМЕДа.

R.J. Dio
Постоянный участник

16.04.2013 13:30

URL #10

пропорции специй известны от века, с ними обычно не играются

Thorn
Участник

16.04.2013 14:06

URL #11

обычно все привыкают и добавляют их на глаз....

R.J. Dio
Постоянный участник

16.04.2013 14:54

URL #12

получится индийская кухня- тухлое мясо не чувствуется под тонной карри

Митин
Постоянный участник

16.04.2013 15:26

URL #13

я тупо чищу лунки полосками фильтровалки и только потом заливаю электродный буфер, работает на 100%

R.J. Dio
Постоянный участник

16.04.2013 17:16

URL #14

а ершиком не пробовали- ваще блестеть будет!

Сообщение было отредактировано R.J. Dio - 16.04.2013 17:17

-Ъ-
Постоянный участник
Москва

16.04.2013 17:55

URL #15

(Thorn @ 16.04.2013 15:06)

обычно все привыкают и добавляют их на глаз....

Я ПСА добавлял сухой на кончике скальпеля на глаз. Чтобы я готовил каждый раз свежий

да никогда!

-Ъ-
Постоянный участник
Москва

16.04.2013 18:05

URL #16

(SofaSofia @ 16.04.2013 14:02)

Все-таки раньше времени не рекомендую гребенку снимать - процесс полимеризации будет продолжаться и красота "строгих углов" лунки исчезнет. А это уже другая проблема. Лучше бульдожками сверху зажать стекла.

Сообщение было отредактировано -Ъ- - 17.04.2013 09:34

Guest
IP-штамп: frGqyYT8IU7LU
гость

17.04.2013 08:21

URL #17

(-Ъ- @ 16.04.2013 17:55)

Я ПСА добавлял сухой на кончике скальпеля на глаз. Чтобы я готовил каждый раз свежий

да никогда!

А мы готовим раствор ПСА и замораживаем в маленьких эппендорфах по 150-200 мкл; хранится хоть 3 месяца. и нормально все работает, без сбоев, гель всегда идеальный (тьфу-тьфу)

R.J. Dio
Постоянный участник

17.04.2013 09:42

URL #18

Я ПСА добавлял сухой на кончике скальпеля на глаз. Чтобы я готовил каждый раз свежий eek.gif да никогда!

это стремный совет, глаз у всех разный, в общем случае не катит. Если будет префорез, еще туда-сюда, а если Лэммли, я бы не рисковал, особенно тем, кто парится волосками- им все надо по прописи, пока опыт не придет

distemper
Постоянный участник

18.04.2013 02:11

URL #19

(-Ъ- @ 16.04.2013 15:55)

Я ПСА добавлял сухой на кончике скальпеля на глаз. Чтобы я готовил каждый раз свежий

да никогда!

а у нас в лабе принято персульфат не аммония а натрия, эффект тот же а стоит на столе в виде раствора год и и все работает
а про лунки уже верно сказали-катализаторов поменьше лейте

watchesbiz
Постоянный участник

07.12.2021 14:49

URL #20

https://archives.profsurv.com/forum/Profess...ert/-67881.aspx
https://atlanta.bubblelife.com/community/an...ex_Watch_Online
https://gumroad.com/rolexrelicawatches/p/di...replica-watches
https://onmogul.com/stories/guide-on-how-to...ex-watch-online
https://list.ly/i/5704105
https://www.behance.net/gallery/114237003/Replica-Rolex
https://www.mlbdailydish.com/users/Replicarolexwatches
http://replicawatches24.simplesite.com/
https://watcheshutuk.cabanova.com/
https://www.pinterest.com/watcheshutuk/_saved/
https://www.linkedin.com/pulse/guide-how-pu...online-hei-bai/
https://justpaste.it/8t11q
https://padlet.com/watcheshutuk/in2opwnfmnmclce8
https://www.allforxi.com/users/Replicarolexwatches
https://profile.hatena.ne.jp/Rolexrelicawatches/profile

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.