Здравствуйте,

У меня простой вопрос: по какой методике и формуле вы подсчитываете концентрацию клеток?

И еще: можно ли использовать камеру Горяева для подсчета микроконидий и бактериальных клеток?
Спасибо заранее.

  Совсем разленились.
http://www.animal.ufl.edu/hansen/protocols/hemacytometer.htm

Среднее арифметическое по четырём большим квадратам умножаем на разведение и на 10^4.

Количество окрашенных клеток увеличивается потому, что они умирают от инкубации при комнатной температуре, в обычной атмосфере и в растворе красителя.

  Здравствуйте,

У меня простой вопрос: по какой методике и формуле вы подсчитываете концентрацию клеток?

И еще: можно ли использовать камеру Горяева для подсчета микроконидий и бактериальных клеток?
Спасибо заранее.

  Мы 0,1% раствор использовали с разведением в 2 раза, 0,4% с разведением в 4 или 8 раз. Еще как-то купили трипанку, она была подозрительного яркого синего цвета, красила все клетки вне зависимости живые они или мертвые (что туда добавили, не знаю). А в общем 20 мин держать в камере это.......... Готовьте смесь с краской непосредственно перед тем как поместить в камеру Горяева.

  Я считаю количество клеток в 4-х больших квадратах, состоящих из 16 маленьких. Полученное число делю на 4, чтобы узнать среднее. Далее среднее делю на 100 и получаю миллионы в мл.

На том увеличении, на котором видны эукариотические клетки, микроконидии и бактериальные клетки не будут видны тем более без специального окрашивания.

  Я считаю количество клеток в 4-х больших квадратах, состоящих из 16 маленьких. Полученное число делю на 4, чтобы узнать среднее. Далее среднее делю на 100 и получаю миллионы в мл.

На том увеличении, на котором видны эукариотические клетки, микроконидии и бактериальные клетки не будут видны тем более без специального окрашивания.

  Какая разница, что подсчитывать, в камере Горяева подсчитывается в количестве (в штуках) в единице объема, т.е. концентрацию.
Формула зависит от концентрации клеток. Если концентрация средняя (1-15 млн/мл) удобно использовать следующую формулу: А*5* разбавление*10000 (размерность млн клеток в мл), где А - количество клеток в 5, 16-ти иссчерченных квадратах по диагонали. Есть формулы для меньшего и большего количества клеток.

  До этого момента я считал по методике из какой-то старенькой методичке по культуре клеток.

Считаю 4 ряда (камера в целом: 15х15 рядов). Среднее арифметическое умножаю на 15 и на 1111 (забыл что это) и на разбавление красителем.
Попутно еще вопрос: не сталкивались ли Вы с тем, что после 15 минут нахождения клеток в камере увеличивается количество окрашенных клеток? Я подумал, что требуется какая-то инкубация с красителем, но вновь зарядив камеру ТОЙ ЖЕ пробой вновь наблюдал подобное.

  Здравствуйте,

У меня простой вопрос: по какой методике и формуле вы подсчитываете концентрацию клеток?

И еще: можно ли использовать камеру Горяева для подсчета микроконидий и бактериальных клеток?
Спасибо заранее.