Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Трансфекция HeLa -- и трансфекция вообще --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Shuriko
Участник



 прочитанное сообщение 17.09.2012 23:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Доброго дня, коллеги.
Как обычно, буду обращаться с детскими вопросами. Недавно перешла с дрожжей на клетки млекопитающих, осваиваю методики. Хотя очень многое прописано в протоколах, у меня пока нет никакого "чувства" клеток, и я не очень понимаю, сколько клеток высевать, сколько часов ждать, доросли клетки до нужной конфлюентности или еще нет, и так далее. Буду очень благодарна, если кто-нибудь не пожалеет времени и поделится опытом. Если вам вдруг захочется меня пнуть в ответ на дурацкие вопросы... ну пните, что делать.

Сначала совсем простое:
1. Насколько клеткам плохо, если при ресуспендировании образуются пузыри? Наверное, этого желательно избегать?
2. Заметила, что при рассеве культуры, даже если покачать чашку, на следующий день клетки распределяются неравномерно - большая плотность в середине, меньшая по краям. Я так понимаю, это не очень хорошо, например, для трансфекции. И что, просто более тщательно перемешивать?
3. Действительно HeLa можно пассировать не более 20 раз? А что потом? Новая пробирка из азота?
4. Прочитала про развитие устойчивости к трипсину. На 100 мм чашку я добавляю от 1 до 2 мл трипсина. Это как - много?
5. От чего зависит выбор "сосуда" - чашки или flask (ох, как же это по-русски)?

И по трансфекции. Использую липофектамин 2000, с 293F вроде получается нормально, но такое чувство, что пока просто везет. Да и линия в этом смысле самая легкая. Но вот дошло дело до HeLa.
1. Я использую 6-well dish. С учетом коэффициента по методике нужно взять 4*10х5 клеток per well. Я так понимаю, что столько клеток должно быть на момент трансфекции. Сколько клеток HeLa нормально высеять накануне трансфекции? 2*10х5, если считать время удвоения примерно 24 часа? Больше, меньше? Просто есть мнение, что лучше брать больше, чтобы сгладить результат токсичности липофектамина.
2. 4 мкг плазмидной ДНК нормально для такого количества клеток?
3. Или не париться и сделать reverse transfection? Существенна ли разница в эффективности? Мне надо потом на этих клетках смотреть локализацию GFP-меченого белка.

Наверное, еще что-то важное забыла, ну да ладно. Огромное спасибо за помощь.
Участник оффлайн! petr
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 18.09.2012 01:06     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

(Shuriko @ 17.09.2012 21:48)
Ссылка на исходное сообщение  Доброго дня, коллеги.
Как обычно, буду обращаться с детскими вопросами. Недавно перешла с дрожжей на клетки млекопитающих, осваиваю методики. Хотя очень многое прописано в протоколах, у меня пока нет никакого "чувства" клеток, и я не очень понимаю, сколько клеток высевать, сколько часов ждать, доросли клетки до нужной конфлюентности или еще нет, и так далее. Буду очень благодарна, если кто-нибудь не пожалеет времени и поделится опытом. Если вам вдруг захочется меня пнуть в ответ на дурацкие вопросы... ну пните, что делать.

Сначала совсем простое:
1. Насколько клеткам плохо, если при ресуспендировании образуются пузыри? Наверное, этого желательно избегать?
2. Заметила, что при рассеве культуры, даже если покачать чашку, на следующий день клетки распределяются неравномерно - большая плотность в середине, меньшая по краям. Я так понимаю, это не очень хорошо, например, для трансфекции. И что, просто более тщательно перемешивать?
3. Действительно HeLa можно пассировать не более 20 раз? А что потом? Новая пробирка из азота?
4. Прочитала про развитие устойчивости к трипсину. На 100 мм чашку я добавляю от 1 до 2 мл трипсина. Это как - много?
5. От чего зависит выбор "сосуда" - чашки или flask (ох, как же это по-русски)?



1. Разницы никогда не замечал
2. Для трансфекции это не очень хорошо, надо лучше перемешивать и не давать плашке стоять в ламинаре, а сразу убирать в инкубатор. Имхо клетки собираются в середине в кучу из-за вибрации. Если они так постояли, то перед тем, как убирать в термостат надо потрясти еще раз. Трясти не круговыми движениями, а восьмеркой.
3. Нет. Хеля такая уже старая культура, что ей число пассажей фиолетово. Она даже в ATCC считается неидентифицируемой (это я о STR profiling).
4. перед тем как добавлять трипсин клетки надо промыть PBS-ом. 1-2мл трипсина - это нормально. С чашки клетки снимайте средой с сывороткой, тогда соплей не будет.
5. Как кому удобнее. Если клетки предполагается соскр***, то лучше чашка, и т.д.

(Shuriko @ 17.09.2012 21:48)
Ссылка на исходное сообщение 
И по трансфекции. Использую липофектамин 2000, с 293F вроде получается нормально, но такое чувство, что пока просто везет. Да и линия в этом смысле самая легкая. Но вот дошло дело до HeLa.
1. Я использую 6-well dish. С учетом коэффициента по методике нужно взять 4*10х5 клеток per well. Я так понимаю, что столько клеток должно быть на момент трансфекции. Сколько клеток HeLa нормально высеять накануне трансфекции? 2*10х5, если считать время удвоения примерно 24 часа? Больше, меньше? Просто есть мнение, что лучше брать больше, чтобы сгладить результат токсичности липофектамина.
2. 4 мкг плазмидной ДНК нормально для такого количества клеток?
3. Или не париться и сделать reverse transfection? Существенна ли разница в эффективности? Мне надо потом на этих клетках смотреть локализацию GFP-меченого белка.

Наверное, еще что-то важное забыла, ну да ладно. Огромное спасибо за помощь.


1. Липофектамин в помойку. Есть много других менее токсичных реагентов. Вот тут посмотрите http://www.mirusbio.com/products/transfection , там для Хели тоже есть, хотя она трансфецируется много чем и со свистом.
Я предпочитаю конфлюентность около 70-80%. Посейте клетки в разведениях, Ваша Хеля может расти не так как наша, поэтому сколько клеток сажать не подскажу.
2. Многовато, но нормально. Можно и 2 мкг. Только это не на количество клеток, а на лунку и на количество трансф.реагента должно считаться.
3. Не пробовал. Если надо смотреть локализацию, то так сильно напрягаться по поводу эффективности трансфекции нет смысла (разве чтобы поучиться). Вам достаточно было бы и 10% трансфецированных клеток.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Shuriko
Участник оффлайн! Shuriko
Участник



 прочитанное сообщение 18.09.2012 01:39     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Спасибище! Вы мне очень помогли.

По поводу липофектамина - эк вы сурово smile.gif Судя по форуму, многие пользуются и довольны. Но на будущее учту.

Сообщение было отредактировано Shuriko - 18.09.2012 01:44
Участник оффлайн! ship
Постоянный участник
Moscow



 прочитанное сообщение 18.09.2012 12:11     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

ХеЛа как и ХЕКи у всех разные, я сею 150 000 на 6 well лунку, 400 000 думаю слишком много.
Если прям вообще хотите все сделать хорошо - то просто посейте клетки в диапазоне от 100 000 до 400 000 на лунку и оцените конфуентность на след день, там где 70-80% - вот столько и сейте на трансфекцию потом.

Собственно тоже самое можно сделать и количеством ДНК и реагента для трансфекции, все это титруется и смотрится сколько дает хорошую трансфекцию и при этом нетоксично.

Если смотрите локализацию -то желательно чтобы клеток было не сильно много, ибо они не смогут нормально распластататься, и картинка будет хуже, да и картина локализации белка может отличаться в зависимости от пплотности посева

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Shuriko
Участник оффлайн! irinav15




 прочитанное сообщение 25.01.2013 15:06     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Люди добрые. Может не в тему, помогите, пожалуйста!!!

Очень надо матрасик с культурой Hela, у кого есть разогнанная.
Покупали в Панэко, пока везли до дома, до хаты - клетки при пересеве стали апоптозными и быстро сдохли (((( Мы не из Москвы, но могли бы с оказией подъехать, забрать, если договоримся.

Заранее спасибо за помощь.
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  08.12.2021 15:23     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

https://replicawatches24.tumblr.com/post/64...lica-watches-uk
https://ello.co/replicawatchesuk/post/ubut9ig9g4glx-q6nyphka
https://www.evernote.com/shard/s451/client/...%2BWatches%2BUK
https://www.bloglovin.com/@rolexrelicawatch...replica-watches
https://www.designspiration.com/watcheshutuk/saves/
https://write.as/fakerolexwatches/hints-to-...lica-watches-uk
https://www.dailystrength.org/journals/hint...lica-watches-uk
https://issuu.com/replicawatchesuk/docs/dif...he_replica_watc
https://www.keepandshare.com/discuss2/5601/...lica-watches-uk
https://penzu.com/public/9e250377
https://bestreplicawatc.livejournal.com/336.html
https://www.pearltrees.com/replicawatchesuk/item349627941
https://www.intensedebate.com/people/watches24
https://anonfiles.com/N039Qf66q9/Guide_On_H...atch_Online_pdf
Участник оффлайн! vadimchik152a
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.10.2022 19:16     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

Не следует, однако, забывать, что сложившаяся структура организации позволяет выполнить важные задания по разработке позиций, занимаемых участниками в отношении поставленных задач. https://www.cherrycrestfarm.com/profile/grualert/profile
Участник оффлайн! Ufa1688
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  03.10.2022 19:28     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Seaman Recruit Ryan ufa1688 Mays was acquitted on ราคาบอล charges of willful hazarding สล็อตออนไลน์ of a vessel and aggravated UFA1688 arson, the Navy said in a statement ลิงค์รับทรัพย์ following a court martial แฮนดิแคป in which a judge ruled บอลสเต็บ there was not enough evidence ufabet เข้า สู่ระบบ that Mays set the fire that destroyed ufa1688auto the USS Bonhomme Richard ufa1688 auto ทางเข้า more than two years ago.
Участник оффлайн! vadimchik152a
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 04.10.2022 23:35     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Хотя на самом деле уже очевидно, что новая модель организационной деятельности создает все необходимые предпосылки для утверждения новых предложений. https://www.riseaccel.com/profile/tolik20h/profile
Участник оффлайн! vadimchik152a
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 05.10.2022 01:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

Таким образом движение в данном направлении требует определения и уточнения позиций, занимаемых участниками в отношении поставленных задач. https://www.talitykombucha.com/profile/dmitrij75l/profile
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  05.10.2022 14:46     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

Je hebt een kavel gekocht, wat nu? Als je een bouwkavel hebt bemachtigd, kun je het eerste ontwerp maken. Een bouwproject is een complex proces waarbij elke stap de volgende beïnvloedt. Een goede organisatie is daarom erg belangrijk. Keuzes moeten zorgvuldig worden gemaakt. Als je ervoor kiest om samen te werken met een eigen architect en aannemer, hoef je dit werk gelukkig niet alleen te doen. Als vuistregel raden wij je aan om jouw architect en aannemer zorgvuldig te kiezen. Vraag architecten en aannemers om referenties en praat daadwerkelijk met oude klanten om te zien of ze het protocol volgen. Bewaar alle afspraken ook schriftelijk om toekomstige misverstanden te voorkomen. Huis laten bouwen op eigen kavel
shutdown
IP-штамп: frAafNuYANUh2
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  05.10.2022 15:28     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

North Korea has fired a suspected missile over Japan, in what appears to be a deliberate escalation to เกมส์ สล็อต
get the attention of Tokyo and Washington.
waqas
IP-штамп: fr24zn4QqqQcw
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  06.10.2022 12:08     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

Thanks for sharing this information. I really like your blog post very much. You have really shared a informative and interesting blog post with people.. ceramic tiles oman
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  06.10.2022 12:57     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

I appreciated your work very thanks largest charitable organizations in the world
Участник оффлайн! clickhere
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  07.10.2022 09:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

Noovids uit Waskemeer biedt sinds 2010 audiovisuele ondersteuning aan door heel Nederland. Door onze uitgebreide kennis en ervaring van de markt vertalen we iedere wens naar een evenement die je niet snel zult vergeten. Noovids DJ en evenementen ook voor particulieren
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  13.10.2022 18:58     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

Training dartborden zijn speciaal gemaakt om je spel en concentratie te verbeteren. Deze hebben kleinere dubbels en triples waardoor het een stuk moeilijker is om deze te raken. Training dartborden bieden dus vele voordelen. Wanneer je een wedstrijd speelt op een bristle dartboard zijn de vakken groter en is het dus makkelijker om deze te raken. Omdat de vakken kleiner zijn is het wel veel lastiger om de juiste getallen te raken. Deze zijn dus alleen geschikt wanneer je al meer getraind bent of wanneer je je spel drastisch wilt verbeteren. Let wel, trainen kan frustrerend zijn wanneer het niet lukt. Begin met korte sessies en breidt uit wanneer je de juiste flow te pakken hebt. Je zult zien dat je naar een tijdje steeds beter wordt om de juiste dubbels en triples te raken. Een voorbeeld van dit soort dartborden is de Winmau Blade 5 Champions Choice. Training Dartborden
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  13.10.2022 21:19     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

I recently found many useful information in your website especially this blog page. Among the lots of comments on your articles. Thanks for sharing. satta
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  15.10.2022 12:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

Took me time to read all the comments, but I really enjoyed the article. It proved to be Very helpful to me and I am sure to all the commenters here! It’s always nice when you can not only be informed, but also entertained! เว็บบาคาร่าฝากถอนไม่มีขั้นต่ำ
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  15.10.2022 17:23     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

Took me time to read all the comments, but I really enjoyed the article. It proved to be Very helpful to me and I am sure to all the commenters here! It’s always nice when you can not only be informed, but also entertained! matka guessing
Участник оффлайн! clickhere
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  15.10.2022 23:41     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #20 множественное цитирование

Let your customers order online for takeout, curbside pickup, delivery, and more with FerryPal's Online Ordering System for Restaurants. There are no contracts and zero upfront costs. Plus, your direct online ordering site is custom designed for FREE to match your brand.
Участник оффлайн! clickhere
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  16.10.2022 10:20     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #21 множественное цитирование

Een herenhuis wordt gebouwd met mooie materialen, zoals dorpels van Belgisch hardsteen, een rijke detaillering en een opvallende entree. In vroegere eeuwen was een herenhuis het domein van de gegoede burgerij. Een nieuwbouw herenhuis van Blauhuis heeft dezelfde statige en karaktervolle uitstraling, passend bij je wensen. STATIG HERENHUIS NIEUWBOUW
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  16.10.2022 13:21     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #22 множественное цитирование

I admire this article for the well-researched content and excellent wording. I got so involved in this material that I couldn’t stop reading. I am impressed with your work and skill. Thank you so much. รวมโปรโมชั่นสล็อต
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  17.10.2022 10:40     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #23 множественное цитирование

This is such a great resource that you are providing and you give it away for free. I love seeing blog that understand the value of providing a quality resource for free. charity organizations list
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  17.10.2022 14:41     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #24 множественное цитирование

I admire this article for the well-researched content and excellent wording. I got so involved in this material that I couldn’t stop reading. I am impressed with your work and skill. Thank you so much. donate charity
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  17.10.2022 20:02     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #25 множественное цитирование

Thanks for taking the time to discuss this, I feel strongly about it and love learning more on this topic. If possible, as you gain expertise, would you mind updating your blog with extra information? It is extremely helpful for me. fuel save pro
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  18.10.2022 06:53     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #26 множественное цитирование

Some truly wonderful work on behalf of the owner of this internet site , perfectly great articles . fuel save pro review
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  18.10.2022 10:32     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #27 множественное цитирование

This content is written very well. Your use of formatting when making your points makes your observations very clear and easy to understand. Thank you. 5 Awesome Poster Ideas for Interior Design
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  18.10.2022 12:35     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #28 множественное цитирование

Excellent blog! I found it while surfing around on Google. Content of this page is unique as well as well researched. Appreciate it. https://www.jewishwigswholesale.com/
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  19.10.2022 11:02     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #29 множественное цитирование

When you use a genuine service, you will be able to provide instructions, share materials and choose the formatting style. โปรโมชั่น ฝากแรกของวัน
Участник оффлайн! rajkumar




 прочитанное сообщение Сообщение на английском  19.10.2022 11:35     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #30 множественное цитирование

Thanks for sharing.

https://www.decidimmataro.cat/profiles/rajkumar/activity
https://agora.terrassaencomu.cat/profiles/rajkumar/activity
https://reptes.dca.cat/profiles/rajkumar/activity?locale=en
https://participa.leconomat.queviure.cat/pr...jkumar/activity
https://decidim.sencelles.cat/profiles/rajkumar/activity
https://decidim.santjaumedelsdomenys.cat/pr...jkumar/activity
http://camidelmar.demo.decidim.coditramunt...jkumar/activity
https://decidim.cunit.cat/profiles/rajkumar/activity
https://participa.economiasocialcatalunya.c...jkumar/activity
https://decidim.guissona.cat/profiles/rajkumar/activity
https://decidim.tjussana.cat/profiles/rajkumar/activity
https://participa.salou.cat/profiles/rajkumar/activity
https://decidim.barcelonaenergia.cat/profil...jkumar/activity
https://decidim.calafell.cat/profiles/rajkumar/activity
https://participa.gavaciutat.cat/profiles/rajkumar/activity
https://decidim.rezero.cat/profiles/rajkumar/activity
https://decidim.calafell.cat/profiles/rajkumar/activity
https://agoradedrets.idhc.org/profiles/rajkumar/activity
https://participa.rubi.cat/profiles/rajkumar/activity
https://construim.fedaia.org/profiles/rajkumar/activity
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.10.2022 12:09     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #31 множественное цитирование

Thanks For sharing this Superb article.I use this Article to show my assignment in college.it is useful For me Great Work. Senegal cargo
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.10.2022 14:57     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #32 множественное цитирование

Thanks for taking the time to discuss this, I feel strongly about it and love learning more on this topic. If possible, as you gain expertise, would you mind updating your blog with extra information? It is extremely helpful for me. โบนัส 100 ไม่ต้องทําเทิร์น
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  22.10.2022 10:39     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #33 множественное цитирование

A very awesome blog post. We are really grateful for your blog post. You will find a lot of approaches after visiting your post. เจ้ฟองเบียร์ล่าสุด แจกเลขเด็ดแทงหวย
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  22.10.2022 12:37     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #34 множественное цитирование

Wow, cool post. I’d like to write like this too – taking time and real hard work to make a great article… but I put things off too much and never seem to get started. Thanks though. สูตรหุ้นอังกฤษ ออกรางวัลเลขเด็ด
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  23.10.2022 13:38     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #35 множественное цитирование

I would like to say that this blog really convinced me to do it! Thanks, very good post. Arti Penjelasan Istilah Adalah
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  23.10.2022 15:29     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #36 множественное цитирование

hi was just seeing if you minded a comment. i like your website and the thme you picked is super. I will be back. Download aplikasi emiten
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  24.10.2022 11:02     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #37 множественное цитирование

Pretty good post. I just stumbled upon your blog and wanted to say that I have really enjoyed reading your blog posts. Any way I'll be subscribing to your feed and I hope you post again soon. Big thanks for the useful info. bom dia sexta feira
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  24.10.2022 15:08     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #38 множественное цитирование

Super-Duper site! I am Loving it!! Will come back again, Im taking your feed also, Thanks. bom dia sexta feira
Участник оффлайн! topseom1144




 прочитанное сообщение Сообщение на английском  25.10.2022 10:10     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #39 множественное цитирование

Your website is really cool and this is a great inspiring article. <a href="https://www.topseom114.net/baccarat-site" rel="nofollow">바카라사이트</a>
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  25.10.2022 12:46     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #40 множественное цитирование

Nice post! This is a very nice blog that I will definitively come back to more times this year! Thanks for informative post. Aplikasi investasi saham
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  25.10.2022 17:02     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #41 множественное цитирование

Hello There. I found your blog using msn. This is an extremely well written article. I will be sure to bookmark it and return to read more of your useful information. Thanks for the post. I’ll certainly comeback. Download aplikasi emiten
Участник оффлайн! topseom1144




 прочитанное сообщение Сообщение на английском  26.10.2022 08:43     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #42 множественное цитирование

Perfect piece of work you have done, this website is really cool with superb information. <a href="https://www.topseom114.net/baccarat-site" rel="nofollow">바카라사이트</a>
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  26.10.2022 12:05     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #43 множественное цитирование

Fantastic blog! Do you have any tips and hints for aspiring writers? I’m planning to start my own website soon but I’m a little lost on everything. Would you propose starting with a free platform like WordPress or go for a paid option? There are so many options out there that I’m completely overwhelmed .. Any suggestions? Many thanks! Buy hybrid weed strain
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  26.10.2022 16:09     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #44 множественное цитирование

This is a great post. I like this topic.This site has lots of advantage.I found many interesting things from this site. It helps me in many ways.Thanks for posting this again. Buy vape cards online
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  02.11.2022 15:16     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #45 множественное цитирование

i really like this article please keep it up. bank vault manufacturers
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  03.11.2022 12:11     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #46 множественное цитирование

Positive site, where did u come up with the information on this posting?I have read a few of the articles on your website now, and I really like your style. Thanks a million and please keep up the effective work. HOTELS IN SEYCHELLES
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  07.11.2022 14:22     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #47 множественное цитирование

Great write-up, I am a big believer in commenting on blogs to inform the blog writers know that they’ve added something worthwhile to the world wide web!.. 壯陽藥
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  07.11.2022 15:54     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #48 множественное цитирование

This is very educational content and written well for a change. It's nice to see that some people still understand how to write a quality post.! BEACH WEDDING SEYCHELLES
bqseo
IP-штамп: frCTlEX/2mZLc
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  08.11.2022 05:30     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #49 множественное цитирование

>slotpg
aesexy
>sexyGaming
>allbet
xoslot
ยูฟ่า
pgsoft
spinixslot
wmcasino
spadegamnig
prettygaming
918kiss
evolution
pragmatic
เว็บคาสิโน
แทงหวย24
เกมสล็อต
เว็บแทงบอล
pgเว็บตรง
betflix
Участник оффлайн! Ok Bro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  11.11.2022 09:24     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #50 множественное цитирование

I appreciated your work very thanks 壯陽藥

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 29.03.24 15:29
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft