Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Felix Stenio Постоянный участник study |
|
MMM Постоянный участник |
|
MMM Постоянный участник |
|
Felix Stenio Постоянный участник study |
|
Felix Stenio Постоянный участник study |
(MMM @ 13.11.2014 04:39) Ну, сыворотка это специфичный объект. 90% белка сыворотки составляют сыворточный альбумин и иммуноглобулины, причем альбумина раз в 5-10 больше иммуноглобулинов. Средняя по больнице концентрация белка в сыворотке 50-100 г/л. В зависимости от того чем будут окрашивать и какой толщины гель(трубочка) подбирают нагрузку белка в э/ф. При толщине геля 1мм и окраске геля с помощью Кумаси - это где то 0,1-1 мкг на зону, при большей толщине геля нагрузку можно увеличивать пропорционально толщине. Белок в основном измеряют с помощью различных спектрофотометрических и фотоколорометрических методов: биуретовый метод, метод Лоури, метод с БЦК(BCA), метод Брэдфорд, поглощение при 280, 230,205нм. Все эти методы имеют свои особенности и ограничения. Толщину геля в трубочке определять по ее диаметру? И что значит 1 мкг НА ЗОНУ? Что имеется в виду под понятием зона здесь? |
MMM Постоянный участник |
Если в какой-то смеси содержится 5 белков, на форезе в идеале они разделятся на 5 зон. В буфер для проб добавляют меркаптоэтанол и ДТТ, для того что бы они восстанавливали и тем самым разрушали S-S связи внутри и между глобулами белка. --Толщину геля в трубочке определять по ее диаметру? Естественно внутреннему диаметру. 5мкл сыворотки это 200-500мкг белка, сколько там у вас диаметр трубочки я не знаю основные белки сыворотки разделятся на три главные зоны 20, 55, 67 кДа все остальные зоны будут минорными. Сообщение было отредактировано MMM - 13.11.2014 10:39
|
Felix Stenio Постоянный участник study |
|
Felix Stenio Постоянный участник study |
|
Felix Stenio Постоянный участник study |
(MMM @ 13.11.2014 11:37) Белки в геле разделяются на зоны. В идеале в одной зоне содержится один белок(но это в идеале) Если в какой-то смеси содержится 5 белков, на форезе в идеале они разделятся на 5 зон. В буфер для проб добавляют меркаптоэтанол и ДТТ, для того что бы они восстанавливали и тем самым разрушали S-S связи внутри и между глобулами белка. --Толщину геля в трубочке определять по ее диаметру? Естественно внутреннему диаметру. 5мкл сыворотки это 200-500мкг белка, сколько там у вас диаметр трубочки я не знаю основные белки сыворотки разделятся на три главные зоны 20, 55, 67 кДа все остальные зоны будут минорными. Спасибо)) Наконец то дошло))) |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |