Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Приготовление проб -- электрофорез сыворотки крови --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Felix Stenio
Постоянный участник
study



 прочитанное сообщение 13.11.2014 02:03     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование
Проблема
Пытаюсь сделать электрофорез в ПААГ в трубочках. С целью научиться этому делу. Собираюсь использовать сыворотку крови. Объясните, плиз по поводу проб. Сколько микрограмм или чего еще там надо сыворотки, как это измерить, с чем, как, что, в каких количествах, концентрациях, соотношениях смешать, чтобы получилась готовая проба для внесения. Какой уплотнитель, как использовать? redface.gif mol.gif confused.gif wall.gif
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  13.11.2014 03:13     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

http://molbiol.ru/protocol/17_01.html#s5
http://biomed.spbu.ru/user/methods/1d-page...trophoresis.php

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Felix Stenio
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 13.11.2014 03:39     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Ну, сыворотка это специфичный объект. 90% белка сыворотки составляют сыворточный альбумин и иммуноглобулины, причем альбумина раз в 5-10 больше иммуноглобулинов. Средняя по больнице концентрация белка в сыворотке 50-100 г/л. В зависимости от того чем будут окрашивать и какой толщины гель(трубочка) подбирают нагрузку белка в э/ф. При толщине геля 1мм и окраске геля с помощью Кумаси - это где то 0,1-1 мкг на зону, при большей толщине геля нагрузку можно увеличивать пропорционально толщине. Белок в основном измеряют с помощью различных спектрофотометрических и фотоколорометрических методов: биуретовый метод, метод Лоури, метод с БЦК(BCA), метод Брэдфорд, поглощение при 280, 230,205нм. Все эти методы имеют свои особенности и ограничения.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Felix Stenio
Участник оффлайн! Felix Stenio
Постоянный участник
study



 прочитанное сообщение 13.11.2014 08:24     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Я думаю, мне понадобится около 5 мкл сыворотки на трубочку. Сколько тогда микролитров сыворотки надо добавить в буфер для проб? И в контрольную пробирку надо просто буфер для проб добавить без ничего? Зачем в буфер для проб добавляют меркаптоэтанол?
Участник оффлайн! Felix Stenio
Постоянный участник
study



 прочитанное сообщение 13.11.2014 09:05     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

(MMM @ 13.11.2014 04:39)
Ссылка на исходное сообщение  Ну, сыворотка это специфичный объект. 90% белка сыворотки составляют сыворточный альбумин и иммуноглобулины, причем альбумина раз в 5-10 больше иммуноглобулинов. Средняя по больнице концентрация белка в сыворотке 50-100 г/л. В зависимости от того чем будут окрашивать и какой толщины гель(трубочка) подбирают нагрузку белка в э/ф. При толщине геля 1мм  и окраске геля с помощью Кумаси - это где то 0,1-1 мкг на зону, при большей толщине геля нагрузку можно увеличивать пропорционально толщине. Белок в основном измеряют с помощью различных спектрофотометрических и фотоколорометрических методов: биуретовый метод, метод Лоури, метод с БЦК(BCA), метод Брэдфорд, поглощение при 280, 230,205нм. Все эти методы имеют свои особенности и ограничения.

Толщину геля в трубочке определять по ее диаметру? И что значит 1 мкг НА ЗОНУ? Что имеется в виду под понятием зона здесь?
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 13.11.2014 10:37     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

Белки в геле разделяются на зоны. В идеале в одной зоне содержится один белок(но это в идеале)

Если в какой-то смеси содержится 5 белков, на форезе в идеале они разделятся на 5 зон.

В буфер для проб добавляют меркаптоэтанол и ДТТ, для того что бы они восстанавливали и тем самым разрушали S-S связи внутри и между глобулами белка.

--Толщину геля в трубочке определять по ее диаметру?
Естественно внутреннему диаметру.

5мкл сыворотки это 200-500мкг белка, сколько там у вас диаметр трубочки я не знаю основные белки сыворотки разделятся на три главные зоны 20, 55, 67 кДа все остальные зоны будут минорными.

Сообщение было отредактировано MMM - 13.11.2014 10:39

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Felix Stenio
Участник оффлайн! Felix Stenio
Постоянный участник
study



 прочитанное сообщение 13.11.2014 12:06     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

Спасибо. Внутренний диаметр трубочки 5 миллиметров. Сколько мкг или мкл белка должно быть в пробе, чтобы все получилоcь?
Участник оффлайн! Felix Stenio
Постоянный участник
study



 прочитанное сообщение 13.11.2014 12:14     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Это обычная сыворотка. Предплагается 5 зон-альбумины, альфа 1, альфа 2, бетта и гамма глобулины.
Участник оффлайн! Felix Stenio
Постоянный участник
study



 прочитанное сообщение 13.11.2014 21:37     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

(MMM @ 13.11.2014 11:37)
Ссылка на исходное сообщение  Белки в геле разделяются на зоны. В идеале в одной зоне содержится один белок(но это в идеале)

Если в какой-то смеси содержится 5 белков, на форезе в идеале они разделятся на 5 зон.

В буфер для проб добавляют меркаптоэтанол и ДТТ, для того что бы они восстанавливали и тем самым разрушали S-S связи внутри и между глобулами белка.

--Толщину геля в трубочке определять по ее диаметру?
Естественно внутреннему диаметру.

5мкл сыворотки это 200-500мкг белка, сколько там у вас диаметр трубочки я не знаю основные белки сыворотки разделятся на три главные зоны 20, 55, 67 кДа все остальные зоны будут минорными.

Спасибо)) Наконец то дошло)))
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  27.11.2021 06:05     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

https://jumpshare.com/v/QxZ9Rn2mfDCaBq2AdBG1
https://www.edocr.com/v/znnrba3z/watcheshut...lica-Watches-UK
https://www.tuugo.us/Companies/best-replica...s/0310006695505
https://topsitenet.com/article/988178-hints...ca-rolex-watch/
http://simp.ly/p/nxGlWb
https://telegra.ph/Hints-on-Choice-of-a-Hig...lex-Watch-02-22
https://replicarolexwatche2.blog.fc2.com/blog-entry-1.html
https://www.knowpia.com/s/blog_60f7e7c31014a97a
https://zenwriting.net/replicawatches24/hin...ica-rolex-watch
https://globalcatalog.com/replicawatchesuk.us/en
http://www.cplusplus.com/articles/iE1wvCM9/
https://eatsleepride.com/c/346210/hints_on_...ica_rolex_watch
https://www.myminifactory.com/users/watcheshutukcom
https://www.mioola.com/ReplicawatchesUK/post/199764/
https://en.gravatar.com/allreplicawatches24
https://8tracks.com/replicawatchesuk

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 18.04.24 08:13
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft