Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Лишние полосы в ПЦР!
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! AbramShimei




 прочитанное сообщение 15.08.2018 12:25     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #51 множественное цитирование

(R-J-Dio @ 15.08.2018 11:21)
Ссылка на исходное сообщение  что такое "попросить"? Это конечно, кууль, но работать на "попросить" вдолгую нельзя. Купите, блин, че за проблема?


Заказала, может и купят. Там суть в том еще, что как закажешь, идет пару месяцев заказ, пока ждем как раз и просим у тех кто с нами сотрудничает, они как бы по совместному проекту должны предоставлять...
Участник оффлайн! R-J-Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 15.08.2018 13:01     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #52 множественное цитирование

пару месяцев от россейскаго поставщика- да ладно, че за гон!
Участник оффлайн! banned sceptique-NMRguy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 15.08.2018 13:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #53 множественное цитирование

(R-J-Dio @ 15.08.2018 12:21)
Ссылка на исходное сообщение  что такое "попросить"? Это конечно, кууль, но работать на "попросить" вдолгую нельзя. Купите, блин, че за проблема?

Если бы у меня, как у -Ъ-, был свой полимеразный завод, мне было бы не жалко - первая доза безплатно. tongue.gif

Судя по тому, что этот "молекулярный биолог" у них в штате одна, и чтобы чего-то такое для себя поиметь, просит у целого ВУЗа (sic!), мне кажется, для нашего -Ъ- это просто иделаьный момент чтобы вмешаться. Потому что хоть он и несёт всякую ерунду, обычно, и весьма жаден до денег, но реактивы, особенно киты для выделения, у него весьма хорошие на выходе. Если он и нормальную полимеразу с антителом нашёл как производить - так он может в одиночку решать все проблемы нашего "молекулярного биолога". Кроме главной - качества работы коллег над штаммами их продуцентов в отсутствии денег на зарплату для них у супергениального и нежадного руководства. umnik.gif

2 месяца на праймеры - это дичь какая-то. Просите 4-5 тысяч рублей у руководства - и заказываете в ручном режиме на синтез с доставкой лиофильно высушенных обычной почтой. Пара недель пройдёт и они будут у Вас. И по статьям праймеры не подбирают. По статьям примерно берут регион и подбирают самостоятельно, с использованием Primer BLAST или IDTDNA-онлайн утилит.
Я лично обычно подбираю с ручкой и листочком в руках, потом долизываю их в праймер-бласте и заказываю 1-2 варианта из оптимальных, если он не один. Осечек пока не было. Если, конечно, это не какие-то замудрённоперемодифицированные штаммы-продуценты с засекреченным геномом и сиквенсом плазмид.

Топикстартер, кстати, работает на фирме, которая пытается выпускать пестициды. Если у них нету нормального штамма-продуцента, мне её даже жаль, поскольку в одиночку такую проблему ей не осилить. Особенно если полимеразу просить у целого ВУЗа, а праймеры ждать 2 месяца.

Также, что-то мне подсказывает, что アブラム всему этому не расстроится. redface.gif shuffle.gif

Сообщение было отредактировано banned sceptique-NMRguy - 15.08.2018 13:36
Участник оффлайн! AbramShimei




 прочитанное сообщение 15.08.2018 14:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #54 множественное цитирование

(banned sceptique-NMRguy @ 15.08.2018 13:15)
Ссылка на исходное сообщение  Если бы у меня, как у -Ъ-, был свой полимеразный завод, мне было бы не жалко - первая доза безплатно.  tongue.gif


2 месяца на праймеры - это дичь какая-то. Просите 4-5 тысяч рублей у руководства - и заказываете в ручном режиме на синтез с доставкой лиофильно высушенных обычной почтой.




Речь шла о полимеразе. Заказывали ее раньше с хеликона фирмы Thermo scientific, шла 3 месяца. Сейчас пользуюсь Диаэмовской, пришла чуть быстрее, но не намного.
Теперь заказала полимеразу с хот стартом от Биолаб микс, так как с их пробниками у меня получались весьма красивые картинки, кстати, сильно отличающиеся качеством от тех, что я тут показывала...
С праймерами все проще, хотя зависит от того, кто заказывает. Через человека, занимаюегося закупками ждала больше месяца. А вот, когда начальник сам для меня заказал, пришли за недельку с небольшим lol.gif mol.gif

Сообщение было отредактировано AbramShimei - 15.08.2018 14:17
Участник оффлайн! banned sceptique-NMRguy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 15.08.2018 14:29     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #55 множественное цитирование

А что Вам мешает реально начать всё своё закупать самой, а у начальства компенсироваться по чекам? Как показывает мой собственный опыт, если температура отжига в ПЦР выше 50С, то всё равно чьим хотстартом пользоваться. Свои, которые не тащат через границу, намного дешевле при этом. Пользовались HS Taq от сибэнзима из Новосибирска и SynTaq от Синтола - одно и то же, если аккуратно ими пользоваться и не размораживать до комнатной часто. И если Вам не нужно гены длиной 3000-5000 нуклеотидов перешивать в экспрессионные плазмиды. Тут без термофишеровских редкоошибающихся смесей никуда уже, боюсь.

За последний год я рынок не проверял, может уже и -Ъ- свои стал производить. Жаль только он с госструктурами почти не работает по причине жадности. А так может и у него бы брали. В Вашем универе есть наверняка люди, которые могут так же как Вы свой токсин Вам нарастить и начистить полимеразу, экспрессионные плазмиды вон вокруг уже валяются - только подбирай или покупай и юзай.

Праймеры сейчас тоже варят все кому не лень, наверняка и у вас там в Казани есть синтезаторы у кого-то. Синтол, Литех, Евроген, в Новосибе - Сибэнзим.

Сообщение было отредактировано banned sceptique-NMRguy - 15.08.2018 14:29
Участник оффлайн! R-J-Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 15.08.2018 16:02     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #56 множественное цитирование

в личку написал, коли про реактивы речь зашла
Участник оффлайн! vb
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 15.08.2018 22:59     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #57 множественное цитирование

Че такие все злые?
Участник оффлайн! AbramShimei




 прочитанное сообщение 16.08.2018 15:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #58 множественное цитирование

А теперь вот такой прикол. Получила новые праймеры. Поставила с ними реакцию, картинка вышла вполне себе ничего. Поставила второй раз с другим штаммом, получилось плохо. Поставила в третий раз, оба штамма, результат вообще пропал. Что происходит вообще eek.gif
Участник оффлайн! R-J-Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 16.08.2018 15:32     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #59 множественное цитирование

ну, дык... воспроизводимость-это вопрос культуры работы в широком определении. Интегральном, так сказать. Тут советовать ничего нельзя, кроме того, что...Тренируйтесь, доводите навыки до автоматизма. Шоб фраза "А что, ПЦРщик это у нас отдельная профессия?? " более никогда не звучала из Ваших уст

Сообщение было отредактировано R-J-Dio - 16.08.2018 15:38

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): banned sceptique-NMRguy
Участник оффлайн! AbramShimei




 прочитанное сообщение 16.08.2018 16:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #60 множественное цитирование

(R-J-Dio @ 16.08.2018 15:32)
Ссылка на исходное сообщение  Тренируйтесь, доводите навыки до автоматизма.

И так я уже три года работаю....
Участник оффлайн! banned sceptique-NMRguy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 16.08.2018 16:13     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #61 множественное цитирование

Кто Вас учил капать?

Неправильные навыки нельзя доводить до автоматизма.

Сообщение было отредактировано banned sceptique-NMRguy - 16.08.2018 16:13
Участник оффлайн! AbramShimei




 прочитанное сообщение 16.08.2018 16:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #62 множественное цитирование

(banned sceptique-NMRguy @ 16.08.2018 16:13)
Ссылка на исходное сообщение  Кто Вас учил капать?


Капать училась сама. Вроде бы проблем обычно особо не было. Пока вот эти вот праймеры не пошли для бацилл, если честно.
Участник оффлайн! R-J-Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 16.08.2018 16:17     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #63 множественное цитирование

(AbramShimei @ 16.08.2018 17:03)
Ссылка на исходное сообщение  И так я уже три года работаю....

смеялся до слез...
Участник оффлайн! banned sceptique-NMRguy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 16.08.2018 17:05     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #64 множественное цитирование

А смысл тут что-то советовать? Вас нужно брать и переучивать, месяца на 2-3.

Вообще, сделать молбиол-ячейку (это ж куча бабла, не меньше 2-3 миллионов) и посадить в неё одну студентку без опыта - это тоже диагноз... eek.gif

Сообщение было отредактировано banned sceptique-NMRguy - 16.08.2018 17:08
Участник оффлайн! R-J-Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 16.08.2018 17:26     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #65 множественное цитирование

наверное, не так. Контора или лаба, не суть, весьма от мол-биол. далекая, типа ИФА. но начальству показалось, что не сильно затратно, если кто-то будет ковыряться в мол-биоле, может, годика через 2-3 на что сгодится, тем более, что это модно и можно вдруг цепануть коллаборатов на стороне. на пол-ляма зарплаты и тыщ на 200 реактивов сожрет, цена одного скромного корпоратива, не big deal. Как квашенная капуста, и подать не стыдно, и съедят - не жалко
Участник оффлайн! banned sceptique-NMRguy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 16.08.2018 18:32     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #66 множественное цитирование

(R-J-Dio @ 16.08.2018 18:26)
Ссылка на исходное сообщение  Как квашенная капуста, и подать не стыдно, и съедят - не жалко

lol.gif mad.gif
Участник оффлайн! AbramShimei




 прочитанное сообщение 17.08.2018 08:44     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #67 множественное цитирование

(banned sceptique-NMRguy @ 16.08.2018 17:05)
Ссылка на исходное сообщение   Вас нужно брать и переучивать, месяца на 2-3.



Я бы поучилась, с удовольствием. Только вот кто меня научит....
Участник оффлайн! banned sceptique-NMRguy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 17.08.2018 09:46     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #68 множественное цитирование

Вам в личку DJ Rio написал - у него, может, не лучшее производство в Москве, но точно лучший учебный центр в нём. Договоритесь с ним и поезжайте.
Участник оффлайн! AbramShimei




 прочитанное сообщение Сообщение на английском  17.08.2018 10:18     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #69 множественное цитирование

yes.gif rolleyes.gif
Участник оффлайн! R-J-Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 17.08.2018 11:52     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #70 множественное цитирование

учебный центр? Хм...интересно познакомиться. ну, дерзайте, тут едят людей
Участник оффлайн! banned sceptique-NMRguy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 17.08.2018 13:32     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #71 множественное цитирование

так проведите её через него официально, может ещё и немного денег на её фирмачах заработаете. wink.gif

http://www.ibch.ru/education/esc

Я там народ из КГУ встречал.
Участник оффлайн! AbramShimei




 прочитанное сообщение 17.08.2018 15:39     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #72 множественное цитирование

(R-J-Dio @ 17.08.2018 11:52)
Ссылка на исходное сообщение  тут едят людей


Так и подавиться можно...
Участник оффлайн! AbramShimei




 прочитанное сообщение 17.08.2018 15:40     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #73 множественное цитирование

(banned sceptique-NMRguy @ 17.08.2018 13:32)
Ссылка на исходное сообщение  может ещё и немного денег на её фирмачах заработаете. wink.gif

http://www.ibch.ru/education/esc




Да, я по идее могу командироваться от работы на обучение...
Участник оффлайн! R-J-Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 17.08.2018 15:56     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #74 множественное цитирование

(AbramShimei @ 17.08.2018 16:39)
Ссылка на исходное сообщение  Так и подавиться можно...

не, не должно. обычно нормально заходит
Участник оффлайн! metrim
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 20.08.2018 13:42     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #75 множественное цитирование

Ну уж не знаю, что там за "мегаэксперты" в Евроген.
Коллеги в последнее время жалуются на качество секвенирований.
Сами мы на прошлой неделе передали на секвенирование ПЦР продукты очищенные на геле (актиномицеты) со специальной пометкой "GC-rich". Результаты пришли безобразнейшие с пометкой что ШПИЛЬКИ У НИХ ТАМ ОКАЗЫВАЕТСЯ!
Отписал рекламацию с просьбой переделать материалы и ни слуху ни духу.
Так что стоит ли доверять Еврогену?
Участник оффлайн! AbramShimei




 прочитанное сообщение 20.08.2018 14:11     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #76 множественное цитирование

(metrim @ 20.08.2018 13:42)
Ссылка на исходное сообщение  
Так что стоит ли доверять Еврогену?


Мы с коллегами обращались к ним также за секвенированием, проблем особо не было. Только в 1 из 20 образцах был некачественный сиквенс...

Сообщение было отредактировано AbramShimei - 20.08.2018 14:12
Участник оффлайн! metrim
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 20.08.2018 14:39     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #77 множественное цитирование

(AbramShimei @ 20.08.2018 15:11)
Ссылка на исходное сообщение  Мы с коллегами обращались к ним также за секвенированием, проблем особо не было. Только в 1 из 20 образцах  был некачественный сиквенс...
Ну тут как раз именно вопрос в профессионализме лаборантов. Если образцы GC-rich, то мягко говоря им нужны иные условия процессинга , чем для эукариот.

Сообщение было отредактировано metrim - 20.08.2018 14:39
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.08.2018 15:08     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #78 множественное цитирование

(metrim @ 20.08.2018 04:39)
Ссылка на исходное сообщение  Ну тут как раз именно вопрос в профессионализме лаборантов. Если образцы GC-rich, то мягко говоря им нужны иные условия процессинга , чем для эукариот.

Коллега зря ты так счаз рио дио накапает на тибя и тибя зобанят....
Участник оффлайн! R-J-Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.08.2018 17:26     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #79 множественное цитирование

(metrim @ 20.08.2018 14:42)
Ссылка на исходное сообщение  Ну уж не знаю, что там за "мегаэксперты" в Евроген.
Коллеги в последнее время жалуются на качество секвенирований.
Сами мы на прошлой неделе передали на секвенирование ПЦР продукты очищенные на геле (актиномицеты) со специальной пометкой "GC-rich". Результаты пришли безобразнейшие с пометкой что ШПИЛЬКИ У НИХ ТАМ ОКАЗЫВАЕТСЯ!
Отписал рекламацию с просьбой переделать материалы и ни слуху ни духу.
Так что стоит ли доверять Еврогену?

видите ли. 1. термин "шпилька"- возможно, и не совсем корректно в данном случае, но детализировать, что именно препятствует нормальному секвенированию, "шпилька" ли, GC- богатая область, через которую не пробивает полимераза и тп, не всегда на это есть время и возможность. 2. особые условия ПЦР для таких образцов, затребованные заказчиком, часто просто не могут быть реальзованы на китовой полимеразе для сиквенса- о чем высоколобым ученым может быть невдомек, но это факт. 3 образцы повторно процессируются со всевозможными ухищрениями, имейте терпение 4. все рекламации и прочие пожелания направляются напрямую исполнителю, а не во флуд в форум, как мин. это бессмысленно
Участник оффлайн! Carbon Copy
Постоянный участник
So close no matter how far



 прочитанное сообщение 20.08.2018 18:16     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #80 множественное цитирование

(metrim @ 20.08.2018 11:42)
Ссылка на исходное сообщение  Ну уж не знаю, что там за "мегаэксперты" в Евроген.
Коллеги в последнее время жалуются на качество секвенирований.
Сами мы на прошлой неделе передали на секвенирование ПЦР продукты очищенные на геле (актиномицеты) со специальной пометкой "GC-rich". Результаты пришли безобразнейшие с пометкой что ШПИЛЬКИ У НИХ ТАМ ОКАЗЫВАЕТСЯ!
Отписал рекламацию с просьбой переделать материалы и ни слуху ни духу.
Так что стоит ли доверять Еврогену?

Никого не защищаю, но порой клиенты ждут от сеkвенаторов чудес. Если Вы подсунете какашку для анализа, написав на ней "какашка", она ведь какашкой быть не перестанет. А в таких случаях действует эмпирический закон "shit in - shit out ". В больших сиквенс-центрах с единичными сложными образцами никто трахаться не будет ни за какие деньги. Секвенируйте сами, если есть желание и время. Оптимизируйте реакции и доложите потом о своих успехах.
Участник оффлайн! R-J-Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.08.2018 18:21     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #81 множественное цитирование

примерно так. кастомер думает одну свою любимую мысль, свой объект, который знает (?) вдоль и поперек, и свято уверен, что весь мир ( в том числе и фирма, предоставляющая сервисные услуги) не спит-не ест, а только об их объекте и думает. И таких кастомеров десятки...одновременно
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.08.2018 19:07     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #82 множественное цитирование

как сплотились ряды сиквенаторофф....
а в рекламах то чтои только не пишут только закажите у нас....
ржунимагу....
видать в стране родных осинок закон " покупатель" сичечь "клиент всегда прафф" не работал и не работает и скорее всего не будет работать...
Оно и понятно 2 максимум тгри конторы делают синвенс -наквенс на продажу практически монополия...
Да и Евреигена исчо и административныиь ресурс помогает....
как говорится " такие времена" , " O tempero, o v more"....
tongue.gif
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 20.08.2018 20:20     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #83 множественное цитирование

Да никому не нужен сиквенс этих "лишних полос" - я уже предупреждал, что ядрёный заморочит голову бедной дамочке и бросит.
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 20.08.2018 20:29     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #84 множественное цитирование

Я Вам шо, лошад-Ь-? Дамочка пока не выкладывала картинки с того же материала с повышением температуры отжига на 3С и/или сокращением количества циклов на 5-10.

Вначале это, потом если полосы очевидной неспицифики не исчезнут - секвенировать то, что переживёт ужесточение условий. Но должно остаться то что есть яркое, остальное исчезнуть. Поскольку во всех образцах кроме 4 и 5 ничего специфического нету, или праймеры развалились (был бы положительных контроль хоть один на геле - было бы сразу понятно праймеры это или специфики нету).
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.08.2018 21:01     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #85 множественное цитирование

(-Ъ- @ 20.08.2018 10:20)
Ссылка на исходное сообщение  Да никому не нужен сиквенс этих "лишних полос" - я уже предупреждал, что ядрёный заморочит голову бедной дамочке и бросит.

Просто пассажир из тех " я все знаю я учил"....
lol.gif
Участник оффлайн! Carbon Copy
Постоянный участник
So close no matter how far



 прочитанное сообщение 20.08.2018 21:59     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #86 множественное цитирование

(Tom1 @ 20.08.2018 17:07)
Ссылка на исходное сообщение  как сплотились ряды сиквенаторофф....
а в рекламах то чтои только не пишут только закажите у нас....
ржунимагу....
видать в стране родных осинок закон " покупатель" сичечь "клиент всегда прафф" не работал и не работает и скорее всего не будет работать...
Оно и понятно  2 максимум тгри конторы делают синвенс -наквенс на продажу практически монополия...
Да и Евреигена исчо и административныиь ресурс  помогает....
как говорится " такие времена" , " O tempero, o v more"....
tongue.gif

Упорство всех, кто делает молекулярную биологию в России достойно восхищения. Безумству храбрых, как говорится, поём мы песню. Праймеры у них по два месяца идут, ёшкин кот. А с башни время сыплет звон, дин-дон, дин-дон, дин-дон. (С)
Участник оффлайн! R-J-Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 21.08.2018 03:46     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #87 множественное цитирование

(Tom1 @ 20.08.2018 20:07)
Ссылка на исходное сообщение  как сплотились ряды сиквенаторофф....
а в рекламах то чтои только не пишут только закажите у нас....
ржунимагу....
видать в стране родных осинок закон " покупатель" сичечь "клиент всегда прафф" не работал и не работает и скорее всего не будет работать...
Оно и понятно  2 максимум тгри конторы делают синвенс -наквенс на продажу практически монополия...
Да и Евреигена исчо и административныиь ресурс  помогает....
как говорится " такие времена" , " O tempero, o v more"....
tongue.gif

болтун. пыжащийся показать, что он что-то знает или даже имеет некий инсайд. Пустое место, сколько б не лаял
Участник оффлайн! R-J-Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 21.08.2018 03:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #88 множественное цитирование

(Carbon Copy @ 20.08.2018 22:59)
Ссылка на исходное сообщение  Упорство всех, кто делает молекулярную биологию в России достойно восхищения. Безумству храбрых, как говорится, поём мы песню. Праймеры у них по два месяца идут, ёшкин кот. А с башни время сыплет звон, дин-дон, дин-дон, дин-дон. (С)

все не так грустно, хотя веселого и немного. 2 месяца-это бред, разумеется, 2-3 дня, летом может, 4-5
Участник оффлайн! AbramShimei




 прочитанное сообщение 21.08.2018 09:52     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #89 множественное цитирование

(NMR-guy @ 20.08.2018 20:29)
Ссылка на исходное сообщение  Я Вам шо, лошад-Ь-? Дамочка пока не выкладывала картинки с того же материала с повышением



Вы уже мои картинки по совсем другой чужой теме обсуждаете shuffle.gif

Те опыты мне велели оставить так как есть. Поскольку сейчас пришли новые праймеры, которые руководство больше интересуют. Кстати, по ним, сейчас идет все нормально tongue.gif tongue.gif tongue.gif

Сообщение было отредактировано AbramShimei - 21.08.2018 09:53
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 21.08.2018 16:38     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #90 множественное цитирование

(R-J-Dio @ 20.08.2018 17:46)
Ссылка на исходное сообщение  болтун. пыжащийся показать, что он что-то знает или даже имеет некий инсайд. Пустое место, сколько б не лаял

Порвался пассажир...
несите нового.....
)))))
Участник оффлайн! R-J-Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 21.08.2018 16:55     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #91 множественное цитирование

(AbramShimei @ 21.08.2018 10:52)
Ссылка на исходное сообщение  Вы уже мои картинки по совсем другой чужой теме обсуждаете    shuffle.gif

Те опыты мне велели оставить так как есть. Поскольку сейчас пришли новые праймеры, которые руководство больше интересуют. Кстати, по ним, сейчас идет все нормально  tongue.gif  tongue.gif  tongue.gif

может и правда все дело в праймерах? Перечитайте первые посты, как разводить, как хранить, глядишь, и наладится
Участник оффлайн! banned sceptique-NMRguy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 21.08.2018 23:57     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #92 множественное цитирование

Если кроме как нравится руководству других задач нерешённых нет - мои соболезнования. И Вам и руководству "с праймерами".
Участник оффлайн! metrim
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 25.08.2018 21:20     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #93 множественное цитирование

(R-J-Dio @ 20.08.2018 18:26)
Ссылка на исходное сообщение  видите ли. 1. термин "шпилька"- возможно, и не совсем корректно в данном случае, но детализировать, что именно препятствует нормальному секвенированию, "шпилька" ли, GC- богатая область, через которую не пробивает полимераза и тп, не всегда на это есть время и возможность. 2. особые условия ПЦР для таких образцов, затребованные заказчиком, часто просто не могут быть реальзованы на китовой полимеразе для сиквенса- о чем высоколобым ученым может быть невдомек, но это факт. 3 образцы повторно процессируются со всевозможными ухищрениями, имейте терпение 4. все рекламации и прочие пожелания направляются напрямую исполнителю, а не во флуд в форум, как мин. это бессмысленно

1 2 3 4 5 - увы и ах Евроген оказался обратно не на высоте с сиквенированием материала. Как только что то выходит ха пределы "дрожжевой рутины" - увы и ах. Зато сколько рассуждений про "высоколобых ..." то .....
Праймеры взяты из статей, ПЦР "не густо", но прошло. У авторов в статьях прописано, что "сиквенировалось в коммерческих фасилитиз", никаких рассказов про то, что "совсем никак не возможно". В другой конторе в Москве нам подобные образцы великолепно сиквенировали. Мы полагали, что такая то продвинутая контора как Евроген - не подведет.
Увы, то что без проблем делают индусские и китайские конторы по сиквенированию - для Еврогена оказывается не по силам..... У них ток хамаватые выпады про "высоколобых ученых" норм выходят.

Ну что ж, раз повторить то что на востоке без проблем делается невозможно - придется мудрить с праймерами, попробуем участки внутри последовательности с бОльшей долей АТ ....
Участник оффлайн! banned sceptique-NMRguy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 26.08.2018 04:54     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #94 множественное цитирование

Проведите секвенирующий ПЦР сами в присутствии 10% ДМСО, потом почистите получившуюся реакцию очистным китом для ПЦР и тащите на сиквенс.

Да, для высоких ГЦ при секвенировании нужно выбирать праймер с отжигом не ниже 72С и делать двустадийный ПЦР. Подбирать такие условия и рисковать дорогими реактивами Евроген не будет, безплатные рабы студенты этих областей не знают, потому у них и фэйлы одни со сложными шаблонами. В Индии и Китае сложные шаблоны разные попадаются часто, поэтому лежат готовые протоколы на каждую ненормальность. Ну и, понятно, студенты - совсем другие, поскольку "угонять трактор" им некуда... wink.gif
Участник оффлайн! R-J-Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 26.08.2018 08:49     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #95 множественное цитирование

mitrim улыбнул своими выпадами, пишет не по теме, и все как моська, пытается куснуть слона за пятку. пообщался бы с Еврогеном напрямую, причем тут тема, которая совсем не про то? видимо, проблемы не только с мозгами-руками, но еще и с этикой и порядочностью. за рекламу спасибо отдельное, это дорогого стоит, приходите, скидку дадут на следующие сиквесы (три раза ха-ха)
Участник оффлайн! metrim
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 27.08.2018 00:06     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #96 множественное цитирование

(banned sceptique-NMRguy @ 26.08.2018 05:54)
Ссылка на исходное сообщение  Проведите секвенирующий ПЦР сами в присутствии 10% ДМСО, потом почистите получившуюся реакцию очистным китом для ПЦР и тащите на сиквенс.
Думаете 10% сразу. Я полагал с 5% для начала попробовать.

Да, для высоких ГЦ при секвенировании нужно выбирать праймер с отжигом не ниже 72С и делать двустадийный ПЦР. Подбирать такие условия и рисковать дорогими реактивами Евроген не будет, безплатные рабы студенты этих областей не знают, потому у них и фэйлы одни со сложными шаблонами. В Индии и Китае сложные шаблоны разные попадаются часто, поэтому лежат готовые протоколы на каждую ненормальность.
Ну молекулярка не моя сфера. Мне она в основном для идентификаций нужна, потому я искренне и расчитывал, что уж хотя бы проблемы секвенирования, коль скоро получил я многострадальные ампликоны - волновать не должны. Тем более уж у индокитайских мартышек все получается.
Тут вероятно в целом проблема в корпоративной культуре в Еврогене, судя по поведению на данном форуме их представителя, а уж что за гнусь он в ЛС катает - это уж просто за гранью. Если подобное чмо ошивается по коридорам и позволяет такой тон общения - разумеется свалят все, обладающие более-менее чувством брезгливости и собственного достоинства.
Участник оффлайн! R-J-Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 27.08.2018 00:11     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #97 множественное цитирование

тебе- срочно лечиться от глупости, хамства и расизма, а мне руки -помыть

Сообщение было отредактировано R-J-Dio - 27.08.2018 00:12
Участник оффлайн! banned sceptique-NMRguy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 27.08.2018 12:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #98 множественное цитирование

(metrim @ 27.08.2018 01:06)
Ссылка на исходное сообщение  Думаете 10% сразу. Я полагал с 5% для начала попробовать.

5% безполезно. А 15% уже ингибирует полимеразу, причём довольно заметно по конечному выходу. 20% и выше продукта не будет вообще. попробовать нужно 7% и 10%. Если на 10% лучше не будет - можно ДОПОЛНИТЕЛЬНО удлиннить праймер "влево" нуклеотидов на 5-10 (если известен сиквенс того, на что он садится).

По поводу индокитая - там просто учебники отвратительные по физике, химии и биологии, были бы лучше - они бы давно уже всех уделали во всём. И мартышками я бы их определённо не считал, сейчас Китай выходит на технологический обгон Великой Объединённой Пендосии. Поскольку уже лет 30 "грабит их кОрОваны" особо не стесняясь и сделав так, что те вынуждены всё своё брахло производить на его, Китая, территории. В том числе - и секвенаторы и почти всю микроэлектронику.

Сообщение было отредактировано banned sceptique-NMRguy - 27.08.2018 12:20
Участник оффлайн! Carbon Copy
Постоянный участник
So close no matter how far



 прочитанное сообщение 27.08.2018 16:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #99 множественное цитирование

По собственному опыту бетаин работает лучше, чем ДМСО. Я когда-то ставил ПЦРки (Fragile X syndrome), где вся вода в реакции была замещена на 5М бетаин. Правда, то были обычные ПЦР, не сиквенс.
Участник оффлайн! R-J-Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 27.08.2018 17:18     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

я часто смешиваю оба, они все же разный эффект имеют. бетаин до 1 М

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 28.03.24 13:02
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft