Rambler's Top100
 		Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Требуется помощь по Трис-трициновому электрофорезу
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

 
 Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Китри
 прочитанное сообщение 26.03.2013 11:06     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование
Уважаемые коллеги, помогите решить проблему. Проводим пептидный электрофорез в трис-трициновом буфере, все буферы согласно работе Hermann Schagger, Gebhard von Jagow (1987), гели концентрирующий 4 %, разделяющий 16 %, так же согласно прописям в вышеуказанной статье. Условия: 20 мА в концентрирующем геле, 150 В в разделяющем. Маркер молекулярного веса Fermentas SM 1861.
Так вот. При электрофорезе сначала, в концентрирующем буфере, пробы, как и должны, стягиваются в узкие полоски. Затем в разделяющем геле видно, что маркер начинает разделятся на отдельные узкие бэнды, которые постепенно расплываются и почти исчезают в геле. Фронт красителя (бромфеноловый синий), движется сначала нормально, одной относительно четкой линией, затем тоже начинает расплываться. В чём может быть проблема?
Возможно, кто-то имеет опыт в электрофорезе инсулина и может что-то порекомендовать относительно гелей, условий и т.п.? Будем очень благодарны за помощь.
Участник оффлайн! Esya
Постоянный участник
PA, USA
 прочитанное сообщение 26.03.2013 20:18     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование
в спрингеровских белковых протоколах был почти идеальный протокол не потребовавший от меня никакой адаптации и все работало

вот его и рекомендую
Участник оффлайн! dk
Постоянный участник
Россия
 прочитанное сообщение 26.03.2013 20:45     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование
АКА 16% имеет очень высокое сопротивление. Гель сильно греется? Как охлаждаете? Ещё - сколько идёт форез: не успевает ли истощиться электродный буфер?
ддд
IP-штамп: frgEmLsnX1R9U
гость
 прочитанное сообщение 26.03.2013 20:56     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование
закрепите белки в глутаровом альдегиде
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 26.03.2013 23:18     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование
если речь идет о инсулине значит где-то 5.6кД
зачем огород городить с яглоу????
совершенно спокоино все будет делится в обыкновенном лемли градиент 4-15 или 10-20 и никаких алибабофф...
помнится дафно гонял как раз рекомбинатныи инсулин ( проверял на наличие примесеи) на таких гелях....
Участник оффлайн! Китри
 прочитанное сообщение 27.03.2013 14:08     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование
(dk @ 26.03.2013 21:45)
Ссылка на исходное сообщение  АКА 16% имеет очень высокое сопротивление. Гель сильно греется? Как охлаждаете? Ещё - сколько идёт форез: не успевает ли истощиться электродный буфер?


Гель и буферы не сильно греются, и мы их не охлаждаем. в комнате - 24 градуса. форез прогоняем 2 часа, но расплываться бэнды начинают примерно через час.
Участник оффлайн! Китри
 прочитанное сообщение 27.03.2013 14:09     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование
(Tom1 @ 27.03.2013 00:18)
Ссылка на исходное сообщение  если речь идет о инсулине  значит где-то 5.6кД
зачем огород городить с яглоу????
совершенно спокоино все будет делится в обыкновенном лемли  градиент 4-15 или  10-20 и никаких алибабофф...
помнится дафно гонял как раз рекомбинатныи инсулин  ( проверял на наличие примесеи)  на таких гелях....

Спасибо, попробуем и так.
Guest
IP-штамп: frEiCLR.eotZc
гость
 прочитанное сообщение 27.03.2013 18:22     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование
конкретно этот протокол я не проверял, но этот мужик фигни не посоветует:
http://www.nature.com/nprot/journal/v1/n1/...rot.2006.4.html
Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Esya
Участник оффлайн! Esya
Постоянный участник
PA, USA
 прочитанное сообщение 27.03.2013 22:07     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование
(Китри @ 27.03.2013 06:09)
Ссылка на исходное сообщение  Спасибо, попробуем и так.


все зависит от того, нужен ли он вам чистуй или бы хотите сделать вид что он чистый... не надо так делать
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 27.03.2013 23:41     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование
(Esya @ 27.03.2013 12:07)
Ссылка на исходное сообщение  все зависит от того, нужен ли он вам чистуй или бы хотите сделать вид что он чистый... не надо так делать

я тя умоляю...
Участник оффлайн! Китри
 прочитанное сообщение 28.03.2013 23:08     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование
Спасибо всем откликнувшимся. Дело оказалось в некачественном акриламиде.
Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Esya
Участник оффлайн! shure
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 30.03.2013 19:37     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование
етот протокол работает менно как написано у Шеггера. в статье написана процентност акриламида в зависимости от того что хочется посмотрет.
Участник оффлайн! genseq
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 30.03.2013 19:50     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование
(Китри @ 28.03.2013 21:08)
Ссылка на исходное сообщение  Спасибо всем откликнувшимся. Дело оказалось в некачественном акриламиде.


Кстати, о качестве акриламида. Довелось как-то проверять несколько партий из различных источников. Проверяли по электропроводности, т.е. на предмет присутствия следов акриловой кислоты. Самым лучшим оказался не импортный, а отечественный, от Диа-М. Они наладили его многократную перекристаллизацию и превзошли всех иностранных конкурентов. Жалко, что этот факт малоизвестен в широких научных кругах.

Сообщение было отредактировано genseq - 30.03.2013 19:51
Участник оффлайн! R.J. Dio
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 31.03.2013 11:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование
берите Amresco от Хеликона, они отлично перефасовывают. Зато никаких проблем. А то эта ваша перекристаллизация... Оно, конечно, да, спирта много надо, процесс занятный, где-то полезный, но оно того стоит? В магазине даже после подорожания алкоголь качеством повыше будет
Guest
IP-штамп: frEiCLR.eotZc
гость
 прочитанное сообщение 31.03.2013 16:13     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование
Из опыта - бросаем в раствор акриламида смесь катионо- и анионообменных бидсов и с ними его и храним. Любо акриламид после этого работает прекрасно.
Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): -Ъ-
Участник оффлайн! R.J. Dio
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 31.03.2013 20:37     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование
это безусловно так, только не круто ли для белкового фореза? Одно дело готовить акриламид для тонких вещей, где качество решает (решало) все- типа Сенгера. А белковый форез- ну, откровенное г... (желтое) класть не надо, но х.ч. вполне сойдет
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва
 прочитанное сообщение 01.04.2013 00:08     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование
(Guest @ 31.03.2013 17:13)
Ссылка на исходное сообщение  Из опыта - бросаем в раствор акриламида смесь катионо- и анионообменных бидсов и с ними его и храним. Любо акриламид после этого работает прекрасно.

И туда же активированного угля.
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник
 прочитанное сообщение Сообщение на английском  07.12.2021 14:51     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование
https://archives.profsurv.com/forum/Profess...ert/-67881.aspx
https://atlanta.bubblelife.com/community/an...ex_Watch_Online
https://gumroad.com/rolexrelicawatches/p/di...replica-watches
https://onmogul.com/stories/guide-on-how-to...ex-watch-online
https://list.ly/i/5704105
https://www.behance.net/gallery/114237003/Replica-Rolex
https://www.mlbdailydish.com/users/Replicarolexwatches
http://replicawatches24.simplesite.com/
https://watcheshutuk.cabanova.com/
https://www.pinterest.com/watcheshutuk/_saved/
https://www.linkedin.com/pulse/guide-how-pu...online-hei-bai/
https://justpaste.it/8t11q
https://padlet.com/watcheshutuk/in2opwnfmnmclce8
https://www.allforxi.com/users/Replicarolexwatches
https://profile.hatena.ne.jp/Rolexrelicawatches/profile

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики 		Назначение кнопок:
   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -  
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 20.04.24 05:18
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft
Powered by Invision Power Board(Trial) v2.0.0 © 2024  IPS, Inc.