Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Локализация вставки
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 08.10.2002 13:40     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Кто-нибудь пробовал определить позпцию трансформированного гена в геноме растения (Arabidopsis)? Я использую специфический праймер, и как пару к нему случайный декамерный. PCR содержит 2 части. Одна с 25-ю циклами и температурой отжига подходящей для специфического праймера, другая с 20 циклами и отжигом для декамерного. Как ни странно с одной трансгенной линией этот фокус у меня прошёл, но появились подозрения что получилось это только случайно. Хотелось бы обсудить с опытными людьми. Может кто знает другой, более надёжный метод?
Участник оффлайн! artemboudilov
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 08.10.2002 19:02     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Я бы сделал один праймер специфичным (на интегрированную последовательность), а другой на какой-нибудь хромосомный повтор.
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 08.10.2002 20:16     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

А что за хромосомный повтор может быть? Можно немножечко поподробней объяснить?
Участник оффлайн! artemboudilov
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 08.10.2002 21:10     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Честно говоря, я не в курсе внутригеномных особенностей Arabidopsisа. Но если есть достаточно длинный, неинвертированный высококопийный транспозон - то можно попробовать. К примеру, на человеке часто (правда для других целей) используют Alu-специфичный ПЦР.
Ну вот что-то вроде: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.f...om_uid=10229572
Участник оффлайн! EKalina




 прочитанное сообщение 08.10.2002 21:17     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

У Clontech'а есть удобный кит, как раз для таких целей сделанный
http://www.clontech.com/archive/OCT96UPD/G...omeWalker.shtml
Еще можно попробовать Inverse PCR, про который здесь была дискуссия. Удачи!
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 09.10.2002 13:37     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

to EKalina: Интересно, а у Вас есть опыт использования этого кита? Как он работает? Высока ли степень удачи? Немного сложновато выглядит процесс...
Участник оффлайн! IIM
Постоянный участник
Heidelberg



 прочитанное сообщение 09.10.2002 20:17     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

А какая Вам разница куда он встроился?
Участник оффлайн! EKalina




 прочитанное сообщение 09.10.2002 20:18     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Я использовала этот подход два раза. Один раз нужны были _все_ кДНК, содержащие опеределенный повтор в заданной ориентации. И втророй раз я картировала вставку. ПРедварительно порезала геном и посмотрела размер рестрикционных фрагментов (а заодно и копийность вставки) на Southern блоте. ТАк откартировала по 3' концу две свои вставки. С 5' какие-то проблемы (впрочем, я его и на гибридизации не особенно вижу). Так что ваша удача зависит от качества вашиг ген-специфичных праймеров. А сложность пропорциональна сложности генома, на мой взгляд.
Удачи!
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 10.10.2002 11:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

to IIM: Разница очень большая. При работе с трансгенными растениями, особенно когда получается серьёзное изменение в фенотипе, в первую очередь возникает вопрос - а не эффект ли это от позиции гена. Во-вторых, даже если показываешь повторяемость эффекта на нескольких линиях, возникает другой вопрос - а действительно ли эти растения разные. А в-третих, это очень красивая часть для диссертации. smile.gif
to EKalina: спасибо за информацию о ките. Если сработает - напишу Вам благодарность в диссере. smile.gif
Участник оффлайн! IIM
Постоянный участник
Heidelberg



 прочитанное сообщение 10.10.2002 16:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

2 <Шелдон> Убедили :-)
А какой ген вы используете как трансген?
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 10.10.2002 17:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

to IIM: А это как раз и есть самое интересное в моей работе. Это ген, который кодирует антитела, а вернее их обрубки (одиночные цепи тяжёлых вариабельных цепей от полноценных антител), связывающих очень специфично некоторый гормон растений. Очень простым методом клонирования такие антитела можно экспрессировать в любом компартменте растительной клетки. А используя разные промоторы можно задать орган растения и время когда будет происходить экспрессия. Интересно? smile.gif
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 10.10.2002 18:57     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

Вопрос ( глупыи) а зачем этот гормон связывать????
[Текст переведён с транслита]
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 11.10.2002 11:20     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

to Tom1: Если не рассматривать этот вопрос глобально, то ответить можно. Связывая горомон, можно определить его функцию в растениях. Этот метод является как бы альтернативой получения мутантов, антисенса или overexpression (извините, не знаю как точно перевести на русский). А если на Ваш вопрос посмотреть с филосовской стороны, то я думаю что в этом связывании действительно нет никакого смысла. Природа и без нас умная. Всёравно сделает всё по своему.
Участник оффлайн! IIM
Постоянный участник
Heidelberg



 прочитанное сообщение 15.10.2002 15:08     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

То <Шелдон> Классно!!! Я уже такойе где-то слышала. А можно поподробнейе о том, что надо клонировать? Получайется, можно к создать растения, кот. будут содержать Ат к нужному белку?
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 15.10.2002 15:54     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

Понял. спасибо за ответ.
[Текст переведён с транслита]
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 15.10.2002 17:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

to IIM: можно и к белку, но с этим проблемы. Т.к. молекула сложная, то антител соответственно может было много хороших и разных, "приклеивающихся" к самым разным его местам. Но где гарантия того, что антитела свяжут белок так, что его функция нарушится? Во время подбора антител это узнать трудно. В нашей лаборатории уже была проделана работа по связыванию одного белка. Показано, что комплекс белка с антителом есть, но белок функционирует абсолютно нормально. А вот другой белок "выключить" удалось. Повезло в подбором антител. Зато на гормонах такая система работает безотказно.
А клонировать надо последовательность, кодируюшую специфическое антитело. Мы делаем отбор с помошью скринирования фаговой библиотеки. Это у нас уже на потоке.
Участник оффлайн! vadimchik152a
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.10.2022 19:34     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

Тем не менее стоит отметить так же, что движение в данном направлении требует определения и уточнения идей по выходу из сложившейся ситуации. https://www.aylelum.com/profile/ilja77k/profile
Участник оффлайн! Ufa1688
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  03.10.2022 19:29     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

Seaman Recruit Ryan ufa1688 Mays was acquitted on ราคาบอล charges of willful hazarding สล็อตออนไลน์ of a vessel and aggravated UFA1688 arson, the Navy said in a statement ลิงค์รับทรัพย์ following a court martial แฮนดิแคป in which a judge ruled บอลสเต็บ there was not enough evidence ufabet เข้า สู่ระบบ that Mays set the fire that destroyed ufa1688auto the USS Bonhomme Richard ufa1688 auto ทางเข้า more than two years ago.
Участник оффлайн! vadimchik152a
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 05.10.2022 01:13     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

Равным образом новая модель организационной деятельности играет важную роль в формировании позиций, занимаемых участниками в отношении поставленных задач. https://pt.projectbiodiversity.org/profile/kolja90r/profile
Участник оффлайн! vadimchik152a
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  05.03.2023 23:32     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #20 множественное цитирование

Does not follow, however, to forget that general conception of the folded position provides to the wide circle (specialists) participating in forming of ideas on an exit from the folded situation. http://phillipsservices.net/UserProfile/ta...80/Default.aspx
Участник оффлайн! vadimchik152a
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  06.01.2024 17:56     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #21 множественное цитирование

It is now obviously, that general conception of the folded position requires determination and clarification of forms of influence. Addr.bio

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 29.03.24 00:00
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft