molbiol.ru -> Культивирование лейкоцитов человека

> Все форумы > Тематические форумы > Клеточные технологии

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* Культивирование лейкоцитов человека -- можно ли с ЭДТА? --

Компания Biocommerce - официальный дистрибьютер продукции компаний Miltenyi Biotec GmbH (Германия) и RanD S.r.l. (Италия).

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

Svetlana S

20.04.2010 10:04

URL #1

Здравствуйте, уважаемые коллеги!

Такая проблема: решили посмотреть метилирование в лейкоцитах. Параллельно с этим анализируем лейкоциты разными методами, в том числе смотрим хромосомные аберрации. Их можно оценить только после культивирования, поэтому все остальные методы подгоняем под ХА, чтобы можно было сопоставить результаты, полученные разными методами. Культивировать планируем 30 часов. Для остальных методов исследования подойдет культивирование с гепарином. Однако для оценки метилирования планируется проводить ПЦР, а гепарин является ее мощным ингибитором. Вот предстоит решить эту проблему.
В этой связи возникают вопросы:
1) Можно ли культивировать с ЭДТА?
2) Сколько по времени?
3) Можно ли культивировать просто кровь или нужно выделить лейкоциты и культивировать только их?
4) Кровь забирается уже в пробирку с ЭДТА, нужно ли добавлять дополнительный ЭДТА для культивирования?
5) Насколько сильно идет ингибирование ПЦР при использовании гепарина?
6) Можно ли добавить какой-нибудь активатор ПЦР в этом случае? Изменится ли эффективность ПЦР?

Очень рассчитываю на вашу помощь! Заранее благодарю.

Цолымба
Участник
46, XY

28.04.2010 17:45

URL #2

1) Нельзя.
2) Сколько угодно, все равно нельзя. Тем более если собираетесь культивировать 30 часов.
3) Цельная кровь шикарна. полумикрометод, и вперед.
4) Зачем? Все равно с ЭДТА ничего хорошего не вырастет.
5) Вот это не знаю, но гугл говорит, что насовсем.
6) Активатор: не выпендриваясь и не изобретая велосипед (хотя, это и не велосипед, пожалуй, можно и премию схватить) набираете 2 вака - сиреневый и зеленый, и все дела.

Поблагодарили (1): AlexanderL

Цолымба
Участник
46, XY

28.04.2010 17:46

URL #3

А если уж возьмете гепаринизированную, то тогда уже спрашивайте методику. 24-48-72-96 часов - на ваш выбор.

AlexanderL
Участник

28.04.2010 21:26

URL #4

Сформулировано в поставновке задачи не совсем точно. Никто не собирается культивировать лимфоциты с ЭДТА. С ЭДТА собираются взять кровь, выделить на фиколле лимфоциты, а после это на RPMI c 15% сывороткой стандартно культивировать. Ожидаемое время нахождения в ЭДТА - 0-3 часов.
А вообще чем обусловлены ответы 1,2 и 4?

Vadim Sharov
Постоянный участник
Россия

03.05.2010 19:02

URL #5

ЭДТА или гепарин добавляют, чтобы кровь не свернулась, а не для сохранности лимфоцитов. После фиколла антикоагулянты больше не нужны. В РПМИ тромбина и фибриногена нет. А вот кальций и магний в среде не помешают.

L-2M
Постоянный участник

05.05.2010 12:22

URL #6

А цитрат? Если уж нужен антикоагулянт (ну мало ли какие могут быть местные организационные особенности) - то с цитратом брать почему нельзя?

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.