Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
metrim Постоянный участник Москва |
Подготовил и уравновесил колонку с G-10 , проверил по голубому декстрану, емкость - 2мл. Нанес 2 мл образца наколонку, выдавил причитающиеся 3 Потом для уверенности решил пособирать еще фракции и потом, при проверке активности, обнаружил что даже в 7мл активность такая же как в первых 3х мл, в которых по идее весь белок должен был выйти. Могут ли в данном случае быть какие то неспецифические взаимодействия гидролазы с декстраном? Как мне их избежать, заставить систему "работать как полагается" ? Помимо этого, наблюдались еще и вероятно специфичные взаимодействия пигмента из культуральной жидкости с сефадексом, который "вмертвую" вставал в начале колонки компактной зоной и начал смываться только на промывке бидистилятом. |
MMM Постоянный участник |
PS Если уж использовать сульфат аммония, то имеет смысл какое-то фракционирование, а не просто тупое высаливание всего до победы. Сообщение было отредактировано MMM - 08.06.2017 05:59
|
metrim Постоянный участник Москва |
Правда как то не хочется вводить тритон и другие детергенты в систему, хотелось получить белочек в чистом буфере "Уменьшить соль" - это уменьшить NaCl в буфере на который перевожу образец? (MMM @ 08.06.2017 06:56) Ну у меня какой то сволочной белок: он и при 25% частично в осадок идет, но в супернатанте остается приличная активность (я её потом на бутил-тойоперле собираю) и даже при 90% в супрнатант дает следы целевой активности...
|
MMM Постоянный участник |
С тем же сульфато выбросите фракцию 20-25% и соберите 30( или 50) остальное в помойку или объеденить со следующей новой партией экстракта. "Уменьшить соль" - это уменьшить NaCl в буфере на который перевожу образец? Да, сделайте какой нибудь 10-15мМ фосфат или трис 20мМ, а соль вообще уберите.
|
guest: metrim IP-штамп: frjaKLxMUHILM гость |
|
MMM Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |