Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
SkyGen Участник Москва |
Под доступностью мы понимаем цены близкие или равные европейским, собственный склад реактивов и оборудования, доставку за 1-3 дня в любой крупный город России. Иными словами, мы делаем все возможное, чтобы поставить Вам качественную продукцию, недорого и быстро. Мы начали с New England Biolabs и у нас получилось! Мы верим в то, что чтобы быть близким к Вам, недостаточно просто выставлять счета и осуществлять доставку. «Логистических» и «каталожных» компаний много и все они известны. Нам же важно глубоко разобраться в теме и быть поддержкой для Вас. Для этого мы публикуем новости, обзоры и высоко ценим любые замечания и критику. Каждый продукт мы «пропускаем» через себя. Анализируем плюсы и минусы, представляем, как и где он будет работать, консультируемся с Вами. И, как результат, создаем методички, семинары и презентации. Мы стараемся угнаться за Вами в научном познании мира, мы стараемся учиться и расти вместе с Вами. Даже уйдя из науки, мы все равно остались в душе искателями и открывателями. Пусть наша работа будет полезна Вам - и в этом мы видим свою реализацию. Мы являемся официальными дистрибьюторами New England Biolabs, QIAGEN, Agilent Technologies, Oxford Nanopore Technologies, 10x Genomics, Macherey-Nagel, NIMAGEN, IDT, Thermo Scientific, SIGMA-ALDRICH, ChemGenes, Bio Molecular Systems, Gilson. У нас есть сервисная служба. Мы осуществляем обслуживание, калибровку и поверку дозаторов, лабораторных весов и ПЦР-амплификаторов различных производителей, а также занимаемся организацией валидации оборудования IQ/OQ. Сообщение было отредактировано SkyGen - 12.02.2018 15:54 |
SkyGen Участник Москва |
Данный обзор предназначен для всего широкого числа пользователей, которым для самых разных целей требуются протяженные двуцепопченые фрагменты генов, длиной до 200 до 5000 пар оснований, как в виде фрагментов цепи ДНК, так и в составе плазмиды. Воспользуйтесь возможностью ускорить свои научные исследования уже сегодня, используя в работе готовые протяженные фрагменты генов, синтезированные с высочайшей точностью, по доступной цене, которые могу быть доставлены из США в течение 2-3 недель. Научные группы, перед которыми стоят задачи конструирования генов, создания рекомбинантных антител, вакцин, работы с CRISPR-системой редактирования генома, и которым требуются контроли для ПЦР и реал-тайм ПЦР, сегодня могут не тратить время и силы на сшивку длинных фрагментов. Также, возможно избежать трудностей и ошибок при встраивании гена интереса в плазмидный вектор. Следовательно, все время и средства, сэкономленные на осуществление на данных этапов, возможно потратить на решение интересующей научной проблемы. Данный обзор предназначен для всего широкого числа пользователей, которым необходимы протяженные двуцепопченые фрагменты генов, длиной от 200 до 5000 пар оснований, как в виде фрагментов двухцепочечной ДНК, так и в составе плазмиды. 1. Фрагменты двуцепочечных генов gBlocks [b]gBlocks - это двуцепочечные фрагменты генов от компании IDT DNA Technologies. В чем преимущество этого продукта по сравнению с другими предложениями на рынке? Проверенное временем качество IDT DNA, лидера рынка США и мира в области синтеза ДНК и РНК Сроки поставки из США от 2 до 3 недель, в зависимости от сложности последовательности и длины гена Подтвержденная секвенированием последовательность генов и высокая точность синтеза gBlocks могут быть использованы для конструкции и модификации генов, разработки антител и в исследованиях с использованием системы редактирования генома CRISP, а также быть как стандарты для qPCR и для решения многих других задач. некоторые направления возможных приложений таких генов приведены на рисунке 1. Рисунок 1. Схема возможных направлений применения gBlocks от компании IDT DNA. Кроме генов с определенной последовательностью, мы предлагаем библиотеки фрагментов двуцепочечных генов gBlocks - это множество генов, у которых консервативные участки перемежаются с участками до 18 последовательных варьирующихся оснований (N или K), такие библиотеки могут использоваться для производства рекомбинантных антител и конструирования белков. 2. Какие форматы синтеза и доставки доступны в компании СкайДжин? А. Вы можете заказать гены в виде протяженного фрагмента двухцепочечной ДНК - в виде gBlocks, который далее может использоваться для любого метода клонирования, включая сборку по Гибсону, методы клонирования по тупым концам и клонирования с липкими концами. gBlocks могут быть синтезированы с/без фосфатной группой на 5'-конце. Длина таких фрагментов может составлять от 12 до 2000 п.о. Такие гены доставляются в сухом виде, с количеством вещества 200 нг. Б. Также возможно заказать двухцепочечный ген, клонированный в плазмидный вектор, уже готовый к введению в E.Coli. Такой вариант заказа гена называется Custom gene. Такой вектор может содержать участок устойчивости к ампициллину, канамицину или хлорамфениколу, а также сайты рестрикции на 3'- и 5'-концах. Также, для специальных задач по in vitro транскрипции можно выбрать вектор pIDTBlue для генов с длиной большей, чем 1500 п.о. Гены с длиной более чем 5000 п.о. поставляются в составе плазмид или бактериальных искусственных хромосом (BACs). Гены, встроенные в плазмиду длиной более 5000 п.о., поставляются в количестве 4 мкг, в сухом виде. Гены длиной менее 5000 п.о., в составе бактериальных искусственных хромосом (BACs), доставляются в сухом виде, в количестве 1 мкг. 3. При выборе синтеза гена в векторе, какие варианты плазмид доступны? Если вы приняли решение заказать ген в составе плазмиды, вы получите его в виде, готовом к трансформации в E. coli. При заказе гена с длиной менее чем 5000 п.о. вам предложат воспользоваться способом заказа Best-Fit. В таком случае во время процесса клонирования, желаемый фрагмент ДНК будет встроен в наиболее подходящий вектор, что помогает избежать непредвиденных трудностей с клонировнаием или токсичностью. В таком случае не будет происходить задержек при синтезе. Гены, длина которых не превышает 1500 п.о. могут быть заказаны в векторе pIDTBlue, если предполагается использование гена в in vitro транскрипции. Аналогично вектору pBluescript II, вектор pIDTBlue содержит большое количество сайтов клонирования в альфа фрагменте гена LacZи в промотерах T3 и T7, по краям сайта встраивания. PIDTBlue плазмида содержит устойчивость к ампициллину. BACs и гены длиной более чем 5000 п.о. Гены с длиной более 5000 п.о. поставляются в BAC с устойчивостью к хлорамфениколу. Инструкции по тому, как работать с BAC векторами, на английском языке, могут быть найдены Таблица 1. Возможные варианты векторов, в которых могут поставляться фрагменты генов. 4. Какие шаги необходимо предпринять, чтобы заказать двухцепочечный ген в компании СкайДжин? К тексту обзора прикреплены форма для заказа генов, которую можно заполнить и выслать на почту info@skygen.com. При заполнении таблицы обратите внимание на то, что если ваш ген будет доставляться в плазмиде, необходимо указать сайты рестрикции на 3' и 5' концах и тип антибиотика, к которому должна быть резистентность. После этого будет сформирована цена, вам будет прислан на проверку скан заказа который надо будет подписать с вашей стороны, и мы попросим заполнить форму безопасности гена, которая также прикреплена к данному обзору. Для того, чтобы принять решение о возможности осуществить синтез и об его окончательной стоимости, принимаются во внимание следующие факторы: Вторичная структура: шпильки длиной более 10 оснований, и GC-богатые участки Повторы и гомополимерные участки: длинные повторы более чем 10 пар для G/C, или более чем 30 пар для A/T Общее содержание GC более 65% и содержание GCболее 25% в отдельных частях гена Повторы рестрикционных сайтов и сайт метилирования Dam/Dcm, которые могут влиять на разрезание эндонуклеазами рестрикции 5. Как правильно использовать полученные фрагменты генов gBlocks? Чтобы облегчить работу наших клиентов, мы предлагаем ряд опробованных и оптимизированных протоколов для использования фрагментов генов gBlocks. Следующие протоколы (на английском языке) - рекомендуются для сборки и амплификации фрагментов gBlocks. Условия работы с фрагментами и инструкции по хранению также включены. В оригинальной статье, в которой был описан методв Гибсона [Gibson et al., 2009], были представлены рекомендации по сборке конструктов, размер которых варьируется от малых бактериальных геномов до миллиона п.о. при помощи этой методики. Тем не менее, IDT предлагает ограничить размер собираемых участков до 2300 п.о. с использованием 4-5 фрагментов. Для сборки рекомендуется использовать готовую смесь Gibson Assembly от компании New England Biolabs, которую также можно заказать в нашей компании. Протокол можно найти в статье Gibson DG, Young L, et al. (2009) В дополнение к приведенным протоколам, можно привести несколько советов по работе с gBlocks. Клонирование с использованием gBlocks аналогично использованию очень чистого ПЦР-продукта. Для клонирования с рестриктазами важно добавить 6-8 нуклеотидов на концы фрагментов, за пределами рестрикционного сайта узнавания. Большинство ферментов будет терять эффективность, если фрагмент гена будет заканчиваться сайтом рестрикции. Добавлять на 5′-конце фосфатную модификацию необязательно для большинства задач. Добавление 5′ фосфата необходимо для традиционного клонирования по тупым концам. Нельзя добавлять фосфорилирование при использовании Zero Blunt TOPO клонирования. 6. Биологическая безопасность синтезируемых генов Каждый синтезируемый ген контролируется для избежания содержания в них последовательности, кодирующей потенциально опасных патогенов, каждый пользователь должен подтвердить отсутствие таковых участков в составе заказываемого гена. Заключение Мы надеемся, что информация, представленная в этом обзоре, будет полезна и поможет Вам в ваших дальнейших исследованиях. Сообщение было отредактировано SkyGen - 09.08.2017 11:39 |
страницы (8): 1 2 3 > » |