Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Димеры праймеров -- Димеры в ГЦ богатых праймерах --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! AlbertGainetdinov




 прочитанное сообщение 01.06.2021 14:57     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование
Проблема
Добрый день уважаемые коллеги!
Подскажите, получаю постоянные димеры.
Помогите понять, с чем связано?
На фото форез после ПЦР:первая колонка маркёр, 16 последующих-образцы, последняя колонка тоже маркер.

Размер ампликонов около 100 п.н.
F: GATCTGCCCTGCACTTCG

R:GCTCATCCCACACCGCTA
Праймеры подобраны к бактерии туберкулезной палочке (не мной). Моя задача получить соотвествующий ожидаемому выход продукта в 100 п.н. без димеров и шмеров. wall.gif
Маркер длин 100+bp
Протокол Амплификации:
Предденатурация 95-5 минут, денатурация 94-15 секунд,отжиг 56-15 секунд,элонгация 72-40 секунд.
Использую готовую пцр смесь screen mix evrogen. Готовлю общую смесь на 25 мкл: 15 мкл (Screen mix 5 мкл+ каждый праймер по 2,5 мкл+h20 5мкл) и 10 мкл днк матрицы(рекомендовано было добавлять всего 5 мкл матрицы днк в инструкции к смеси screen mix,но в таком случае выхода пцр продукта практически не было).

Сообщение было отредактировано AlbertGainetdinov - 02.06.2021 00:23

Файл/ы:

скачать файл 08_05_21__6.bmp
размер: 1.27мб
кол-во скачиваний: 30



скачать файл 08_05_21.bmp
размер: 1.27мб
кол-во скачиваний: 28


Участник оффлайн! semi
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 06.06.2021 16:57     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Какая концентрация праймеров в реакции? Указанные вами мкл делу не помогают, так как непонятно, какая у вас концентрация стока праймеров.
Снизьте до 150-200 nM.
И зачем так долго держать реакцию на элонгации?

Сообщение было отредактировано semi - 06.06.2021 16:57
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  10.09.2021 15:32     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

http://replicarolexwatches.simpsite.nl/
https://www.smore.com/rj7kh-best-replica-watches
https://www.athleticsnation.com/users/Replicarolexwatches
https://pastebin.pl/view/ab0e458a
https://mix.com/watcheshutukcom
https://www.woddal.com/post/359216_tiny-acc...nybody-039.html
https://share.naturalnews.com/posts/3904099
https://demo.wowonder.com/post/214429_the-i...-producers.html
https://rapichat.com/post/5369_our-purpose-...ible-there.html
https://dashburst.com/replicarolexwatches/1
https://sway.office.com/KifcQvn36MK821G8
https://flipboard.com/@replicarolex24
https://getpocket.com/redirect?url=https%3A...eshut.uk.com%2F
https://www.openstreetmap.org/user/Hints%20...20Rolex%20Watch
Участник оффлайн! ASDF
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 10.09.2021 20:01     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Димеров не видно на форезе. Неспецифика на 300 но.
Guest
IP-штамп: frpXPq5TOmUHs
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  12.09.2021 11:08     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

It only takes a few minutes to apply. You can now bet on บาคาร่า various casino games. More importantly, สูตรบาคาร่า You can apply for free, absolutely free WM CASINO online gambling game at the service user Must be known very well, of course, because the game is easy to play. The rules are not complicated. Suitable for new players who just pay attention to invest in casinos today are ready to open for service to everyone in full, with dealers (Dealer) more than 100 beautiful girls waiting to rotate To provide you with the most wonderful service 24 hours a day.
of charge. When you become a member with allbet บาคาร่า and don't forget to come and receive สูตรบาคาร่าonline gambling game at the service user Must be known very well, of course, because the game is easy to play. The rules are not complicated. Suitable for new players who just pay attention to invest in casinos today are ready to open for service to everyone in full, with dealers (Dealer) more than 100 beautiful girls waiting to rotate To provide you with the most wonderful service 24 hours a day.

many benefits as well, it is definitely worth the price.

4. You can try casino games for free. Allbet Once you have successfully subscribed But still notAll bet new online gambling service website that has stepped into providing full service to Thai players. You can apply for membership To play at 123VEGA ready to serve you in full formula. full betting All in one website including famous online casino camps gathered from all over the world Our website has the readiness and professional potential to meet the needs of Thai players as much as possible. If you want to cheer for the right team, your favorite sport, 123VEGA has it all for you. Service with modern system
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 22.09.2021 12:37     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

1. Пара праймеров близка к идеальной, но, правда, есть один селф-димер F-праймера, который можно устранить убрав концевой G и, соответственно, начальный G R-праймера для выравнивания Т пл.
2. В данном ките нет хот-старта (как можно такое продавать... confused.gif), так что "горбатого..." сами знаете, пардон.
3. Для GC-богатых праймеров (и матрицы M.tub) слишком низкая темп. отжига 56 град. Можете смело довести до 60-62 град и, к тому же, в составе смеси не вижу денатурирующих компонентов, снижающих Т пл. Или же все параметры остаются как есть, но добавляете в смесь ДМСО хотя бы до 5%.
4. Согласен с semi - рекомендую сократить вдвое время на элонгации.
пы сы: Картинки у Вас отвратительного качества, пардон. frown.gif

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 26.10.21 10:59
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft