molbiol.ru -> Качество биологического материала

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* Качество биологического материала -- как может повлиять на исход ПЦР --

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

TumAnn

25.09.2010 04:58

URL #1

Здравствуйте, уважаемые коллеги.
Возможно, мой вопрос покажется кому-то глупым, а ответ очевидным... но я не так давно попала в эту сферу, и на работе не с кем посоветоваться, к сожалению...
Может быть, вы сможете если не помочь с ответом, то хоть подсказать где искать его.

Вот какой вопрос: насколько сильно качество биологического материала влияет на результат пцр? Особенно если работа идет с рнк. Может ли культура клеток после стресса давать иной выход рнк, нежели до стресса?

Почему возник вопрос:
Мы работаем с культурой клеток, из которой выделяем РНК, далее следует реакция ОТ и РТ-ПЦР. Цель - исследование влияния внешних индукторов на экспрессию гена. После проведения первой серии исследований и получения удовлетворяющего результата кто-то случайно выключил на выходные наш СО2-инкубатор. Большая часть клеток погибла... а оставшаяся была оживлена, разогнана. И вот первая попытка проведения эксперимента в тех же условиях, что и предыдущие, закончилась удивительным результатом: сигнал присутствует лишь в малой части образцов, причем на планшете они распределены случайным образом. Никакой системы я не могу увидеть... из 4 повторностей одна может дать вполне заметный сигнал, а три другие абсолютно пусты. И так каждый образец. Как исследуемый ген, так и эндогенный контроль. От методики я не отступала. Что могло дать такой результат? грешу на клетки, но пока это на уровне интуиции.

Заранее большое спасибо.
Анна

Statin
Постоянный участник

25.09.2010 10:10

URL #2

Если речь идет о РНК, то качество биологического материала является критичным и при выделении РНК и для последующей ПЦР. Единственное, что может некоторым образом смягчить эту зависимость это использование для qPCR маленьких ампликонов 70-110 bp. Качество материала, здесь важно как вы осуществляли подготовку суспензии клеток. Если сразу после культивирования осуществляете лизис клеток, а не храните их в заморозке, то все в порядке. На вскидку у вас может быть несколько проблем. 1. После разгона клетки чем-нибудь заразили. 2 выжили какие-нибудь резистентные клоны клеток и у них действительно нет экпрессии искомого гена. 3 наиболее вероятно все-таки проблемы с ПЦР, полетели реактивы (например, вместе с СО2 инкубатором выключили и холодильник, в котором они хранились), полетели праймеры (некачественнные праймеры очень не любят разморозки-заморозки, всегда аликвотируйте).

TumAnn

25.09.2010 12:40

URL #3

Спасибо большое за ответ.
Проверю каждый вариант.

Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость

27.09.2010 13:28

URL #4

(TumAnn @ 25.09.2010 12:40)

Спасибо большое за ответ.
Проверю каждый вариант.

участки однонитивой рнка при стрессе убиваются быстрее , чем участки склонные к
рнк-рнк двунитчатости

admin121
Постоянный участник

31.05.2021 05:08

URL #5

http://www.marocohra.com/img/index.html
http://www.marocohra.com/img/01.html
https://www.fineart-stories.de/images/01.html
https://www.fineart-stories.de/images/02.html
http://psm-rentik.cz/img/ssgh/02.html
http://lounskevabeni.cz/img/ssgh/index.html
http://www.obytnaauta-karavany.cz/img/karavany/03.html
http://altusvario-eshop.cz/img/parizska/03.html
http://altusvario-eshop.cz/img/parizska/index.html
http://altusvario-eshop.cz/img/parizska/02.html
http://ods12.sefredaktor.cz/img/ssgh/03.html
https://graffcolor.com.br/chat/images/03.html
https://graffcolor.com.br/chat/images/index.html
https://graffcolor.com.br/chat/images/02.html
http://foxtintas.com.br/img/01.html
http://foxtintas.com.br/img/03.html
http://ods12.sefredaktor.cz/ver.php
http://ods12.sefredaktor.cz/privacy.php
http://ods12.sefredaktor.cz/info.php
http://ods12.sefredaktor.cz/important.php

https://rb.gy/cun3ad
https://rb.gy/yg88kc
https://rb.gy/6cgeqp
https://rb.gy/devv52
https://rb.gy/xhjaot
https://rb.gy/4qrulb
https://bit.ly/3eUc2J7
https://bit.ly/3uZu1DC
https://bit.ly/3yfGAMN
https://bit.ly/3onrro7
https://bit.ly/3fkG3Rm
https://bit.ly/33P6Z6i
https://cutt.ly/Nb11Sk9
https://cutt.ly/Wb11Dk3 *
https://cutt.ly/jb11FTQ
https://cutt.ly/gb11GWp
https://cutt.ly/Mb11HSF
https://cutt.ly/lb11Jxl
https://cutt.ly/ub11J6x

watchesbiz
Постоянный участник

31.05.2021 07:04

URL #6

https://app.ex.co/stories/bestreplicawatche...-regime-for-you
https://rolexrelicawatches.hpage.com/replica-watches-uk.html
https://www.cgmimm.com/articles/hints-to-he...lica-watches-uk
https://www.deviantart.com/fakerolexwatches...es-UK-871090193
https://replicawatches24.exposure.co/best-r...eplicawatches24
https://knowyourmeme.com/users/replicawatchesuk
https://www.scoop.it/topic/bestreplicawatch...ica-rolex-watch
https://uberant.com/article/1268140-hints-o...ca-rolex-watch/
https://devpost.com/watcheshutuk
https://www.ted.com/profiles/26540630/about
https://drive.google.com/file/d/1uTx90WraSJ...iew?usp=sharing
https://ibb.co/hgfZwb0
https://writer.zohopublic.com/writer/publis...10192bd4c742ceb
https://replicawatches24.mystrikingly.com/b...ica-rolex-watch
https://my.desktopnexus.com/ReplicawatchesU...a-rolex--31049/
https://sway.office.com/Tqm7mC7s0VWLhKAl

watchesbiz
Постоянный участник

01.06.2021 05:03

URL #7

https://www.uptrennd.com/post-detail/hints-...-watch~ODY3MDU2
https://anotepad.com/note/read/mqg8p5jm
https://www.crokes.com/replicarolexwatches/profile/
https://ko-fi.com/post/Watches-Shopping-Gui...-Watc-E1E13PZV9
https://www.merchantcircle.com/blogs/replic...x-Watch/1966540
https://www.nairaland.com/6427528/watches-s...de-finding-fake
https://www.vingle.net/posts/3587193
https://fortunetelleroracle.com/sport/replica-watches-280478
https://www.goodreads.com/story/show/132736...ake-rolex-watch
https://www.diigo.com/item/note/85twz/phwr?...2395edb2dac07ea
https://github.com/ReplicawatchesUK/Replica...ake-Rolex-Watch
https://www.reddit.com/user/Bestreplicawatc...ke_rolex_watch/
https://slashdot.org/submission/13306958/wa...ake-rolex-watch
https://www.wattpad.com/1030107359-replica-...guide-finding-a
https://www.instructables.com/member/Fakero...licPreview=true

watchesbiz
Постоянный участник

25.09.2021 06:48

URL #8

http://replicarolexwatches.simpsite.nl/
https://www.smore.com/rj7kh-best-replica-watches
https://www.athleticsnation.com/users/Replicarolexwatches
https://pastebin.pl/view/ab0e458a
https://mix.com/watcheshutukcom
https://www.woddal.com/post/359216_tiny-acc...nybody-039.html
https://share.naturalnews.com/posts/3904099
https://demo.wowonder.com/post/214429_the-i...-producers.html
https://rapichat.com/post/5369_our-purpose-...ible-there.html
https://dashburst.com/replicarolexwatches/1
https://sway.office.com/KifcQvn36MK821G8
https://flipboard.com/@replicarolex24
https://getpocket.com/redirect?url=https%3A...eshut.uk.com%2F
https://www.openstreetmap.org/user/Hints%20...20Rolex%20Watch

watchesonline89
Постоянный участник

24.12.2022 11:30

URL #9

https://medium.com/@omegawatches89/exciting...ne-17c41f48bce4
https://telegra.ph/Tips-For-Buying-Replica-Watches-08-03
https://disqus.com/by/omegawatches89/about/
https://plaza.rakuten.co.jp/omegawatches89/...y/202208040004/
https://omegawatches89.bigcartel.com/product/replica-watches
https://teletype.in/@omegawatches89/p6FG7kdedpw
https://dailygram.com/index.php/blog/116219...eplica-watches/
https://www.craftsforum.co.uk/member/209770-omegawatches89
https://forum.amando.it/members/omegawatches89-165008.html
https://www.academia.edu/88309718/https_www_watchesbiz_co_
https://codepen.io/omegawatches89/pen/KKRbyKj
https://musescore.com/user/54310503/sets/5621730
https://form.jotform.com/223253838439059
https://62e8da780bf7c.site123.me/blog/amazi...-watches-online
https://teletype.in/@omegawatches89/FclnTDwlkB1

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.