 * |   |
|
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда |  Zbio-wikiNG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: |
|
Правила
* прошу совета -- какой промотор&вектор? --
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.
   |
 Looby |
 05.07.2006 13:12
Дамы и господа.
Прошу снисходительно отнестись к моему вопросу  . Проблема в следующем - какой вектор и с каким промотором лучше выбрать для экспрессии белка в Sacchromyces cerevisiae? Или, переформулировав вопрос, насколько подходящи вектора Qiagen (pQE-60, например) для экспрессии His-tagged белков в S.cerevisiae? Вопрос вызван тем, что производитель как-то туманно и стороной обходят выше указанную проблему (или я чего-то недопонял  ).Заранее благодарен  , поскольку понимаю, что вопрос достаточно глупый, но умнее сфопмулировать почему-то не получается  .Еще раз СПАСИБО |
|
guestA Постоянный участник |
05.07.2006 17:58
А вот какие есть векторы для S.cerevisiae, я не в курсе. И вообще, есть ли для этой дрожжи удобные векторы. Вроде есть векторы для Pichia с мощными промоторами, но точные их названия не могу указать, поскольку я с дрожжами не работаю. :-) |
|
Tom1 Постоянный участник |
 05.07.2006 18:36
pYEX-BX and pYEX-4T. Biotechnology Letters 25: 331–334, 2003. © 2003 Kluwer Academic Publishers. Printed in the Netherlands. 331 Saccharomyces cerevisiae expression vectors with thrombin-cleavable N- and C-terminal 6x(His) tags Onisha Patel1,2, Ross Fernley1 & Ian Macreadie1,2,∗ |
|
Sergeant Постоянный участник |
05.07.2006 18:59
Я на заре своей туманной юнности писал диплом по конструированию векторов для дрожжей сахаромицетов. Уже тогда было сконструированно масса вакторов.  В те дремучие времена были популярны шатл вектора на основе дрожжевой двухмикронной плазмиды. Самый популярный дрожжевой промотр был от GAPDH.При желании добавлялись центромеры для увеличения стабильности векторов. Плюс не забываем добавить маркер селекции - обычно гены ауксотрофности. За отчетный период многое изменилось, но идеи все старые. Для одной только двухгибридки векторов понаделпли просто завались. Можно из них тоже делать универсальные для работы с дрожжами. Почитайте книжки для начала. если вы берете pQE60 для работы с дрожжами, то это значит у Вас в голове полная каша. Студентам простительно, но куда научные пуководители смотрят? Или уже никого не осталось? 
|
|
guestA Постоянный участник |
05.07.2006 19:05
(Sergeant @ 05.07.2006 19:59)  2 guestA... если вы берете pQE60 для работы с дрожжами, то это значит у Вас в голове полная каша. У меня в голове действительно каша после ваших слов, поскольку я не работаю с дрожжами и pQE для них не беру. Я работаю с E.coli и бациллами и беру pQE для E.coli. 
|
|
Sergeant Постоянный участник |
05.07.2006 19:10
Извеняйте. Естественно я все это писал для Looby, а вас неудачно через copy/paste вставил. 
|
|
Sergeant Постоянный участник |
05.07.2006 19:33
Найдите лучше опытных дрожжевиков и с ними посоветуйтесь. Плазмиды и штаммы поклянчте. Может и найдутся добрые люди. А еще лучше в приличное место поехать постажероваться. Мой шеф на дипломе стажировался в Колд Спринг Харбор и мгогое оттдуда понапер. Место для многих культовое. Или в Филу к Эрике Големис напроситься. Сразу просветвление наступит.
|
|
Tom1 Постоянный участник |
05.07.2006 20:29
(Sergeant @ 05.07.2006 09:10) 2 гуестАИзвеняйте. :мол: Естественно я все это писал для Лообы, а вас неудачно через цопы/пасте вставил. :мол: :лол: :лол: :лол: Каша каша ты почитай что ганный участник писал в собственном топике по поводу еклрессии.... в Иколай......  Лообы Ну имхо так далеко ездить не надо вектора для екпрессии есть и в Мааааскве во ВниГенетике, и в Питере в ЛГУ и Гатчине .... так что Пубмед в зубы тьфу в руки и шукайте ..... да привер ссылку просто как пример.... |
|
Sergeant Постоянный участник |
05.07.2006 20:51
Вектоа и штаммы найти в Москве не проблемма (кроме них у дрожжевиков еще и своя кухня существует, поэтому еще дофига чего докупать придется). . Тут ИМХО надо не с векторов начинать, а с поиска нормального найчного руководителя, такого что бы сам у стола стоял. А то сейчас начальников тьма развелось, а как правитьно пипетку держать показать некому. |
|
Veshka Постоянный участник Москва |
05.07.2006 21:07
|
|
Sergeant Постоянный участник |
05.07.2006 21:13
А что в коли неужели не вариант? Прям дрожжа и всё? В один прекрасный день я понял, что плевать в чем делать: колли, дрожжи, бакуловирусы, эукариоты, вирусы, нейроны... По большому счету все одно и тоже. Глвавное, что бы деньги платили и публикации капали... 
|
|
Sergeant Постоянный участник |
05.07.2006 21:51
Пабмед ГОвориш... Еще и книги бывают... |
|
guestA Постоянный участник |
06.07.2006 12:25
(Tom1 @ 05.07.2006 21:29) Каша каша ты почитай что ганный участник писал в собственном топике по поводу еклрессии.... в Иколай......Tom1, что же вам показалось неверным в моем топике, если не секрет? Расскажите, пожалуйста, поподробнее и лучше именно в том топике. Возможно, ваш рассказ даст мне новые интересные идеи. Буду благодарна.
|
| « Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |
 |
· Викимарт - все интернет-магазины в одном месте · Доска объявлений Board.com.ua ·
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Powered by Invision Power Board(Trial) v2.0.0 © 2019 IPS, Inc.