Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* прошу совета -- какой промотор&вектор? --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Looby




 прочитанное сообщение 05.07.2006 13:12     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование
Проблема
Дамы и господа.
Прошу снисходительно отнестись к моему вопросу shuffle.gif . Проблема в следующем - какой вектор и с каким промотором лучше выбрать для экспрессии белка в Sacchromyces cerevisiae? Или, переформулировав вопрос, насколько подходящи вектора Qiagen (pQE-60, например) для экспрессии His-tagged белков в S.cerevisiae? Вопрос вызван тем, что производитель как-то туманно и стороной обходят выше указанную проблему (или я чего-то недопонял confused.gif ).
Заранее благодарен mol.gif , поскольку понимаю, что вопрос достаточно глупый, но умнее сфопмулировать почему-то не получается wall.gif .
Еще раз СПАСИБО
Участник оффлайн! guestA
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 05.07.2006 17:58     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Насколько я понимаю, pQE60 от Qiagen не подойдет для использования в S.cerevisiae, поскольку эти векторы содержат ориджин ColE1, работающий в E.coli. В дрожжах эти векторы не будут реплицироваться.
А вот какие есть векторы для S.cerevisiae, я не в курсе. И вообще, есть ли для этой дрожжи удобные векторы. Вроде есть векторы для Pichia с мощными промоторами, но точные их названия не могу указать, поскольку я с дрожжами не работаю. :-)
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  05.07.2006 18:36     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

pYEULCBX
pYEX-BX and pYEX-4T.
Biotechnology Letters 25: 331–334, 2003.
© 2003 Kluwer Academic Publishers. Printed in the Netherlands.
331
Saccharomyces cerevisiae expression vectors with thrombin-cleavable
N- and C-terminal 6x(His) tags
Onisha Patel1,2, Ross Fernley1 & Ian Macreadie1,2,∗
Участник оффлайн! Sergeant
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 05.07.2006 18:59     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

2 guestA
Я на заре своей туманной юнности писал диплом по конструированию векторов для дрожжей сахаромицетов. Уже тогда было сконструированно масса вакторов. umnik.gif В те дремучие времена были популярны шатл вектора на основе дрожжевой двухмикронной плазмиды. Самый популярный дрожжевой промотр был от GAPDH.
При желании добавлялись центромеры для увеличения стабильности векторов.
Плюс не забываем добавить маркер селекции - обычно гены ауксотрофности.
За отчетный период многое изменилось, но идеи все старые. Для одной только двухгибридки векторов понаделпли просто завались. Можно из них тоже делать универсальные для работы с дрожжами. Почитайте книжки для начала. если вы берете pQE60 для работы с дрожжами, то это значит у Вас в голове полная каша. confused.gif
Студентам простительно, но куда научные пуководители смотрят? Или уже никого не осталось? weep.gif
Участник оффлайн! guestA
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 05.07.2006 19:05     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

(Sergeant @ 05.07.2006 19:59)
Ссылка на исходное сообщение  2 guestA
...  если вы берете  pQE60 для работы с дрожжами, то это значит у Вас в голове полная каша. confused.gif

У меня в голове действительно каша после ваших слов, поскольку я не работаю с дрожжами и pQE для них не беру. Я работаю с E.coli и бациллами и беру pQE для E.coli. smile.gif
Участник оффлайн! Sergeant
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 05.07.2006 19:10     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

2 guestA
Извеняйте. mol.gif Естественно я все это писал для Looby, а вас неудачно через copy/paste вставил. mol.gif lol.gif lol.gif lol.gif
Участник оффлайн! Sergeant
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 05.07.2006 19:33     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

2 Looby
Найдите лучше опытных дрожжевиков и с ними посоветуйтесь. Плазмиды и штаммы поклянчте. Может и найдутся добрые люди. А еще лучше в приличное место поехать постажероваться. Мой шеф на дипломе стажировался в Колд Спринг Харбор и мгогое оттдуда понапер. Место для многих культовое. Или в Филу к Эрике Големис напроситься. Сразу просветвление наступит. umnik.gif
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 05.07.2006 20:29     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

(Sergeant @ 05.07.2006 09:10)
Ссылка на исходное сообщение  2 гуестА
Извеняйте. :мол:  Естественно я все это писал для Лообы, а вас неудачно через цопы/пасте вставил. :мол:  :лол:  :лол:  :лол:

Каша каша ты почитай что ганный участник писал в собственном топике по поводу еклрессии.... в Иколай......wink.gif
Лообы Ну имхо так далеко ездить не надо вектора для екпрессии есть и в Мааааскве во ВниГенетике, и в Питере в ЛГУ и Гатчине .... так что Пубмед в зубы тьфу в руки и шукайте ..... да привер ссылку просто как пример....
Участник оффлайн! Sergeant
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 05.07.2006 20:51     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

2 Tom1
Вектоа и штаммы найти в Москве не проблемма (кроме них у дрожжевиков еще и своя кухня существует, поэтому еще дофига чего докупать придется). . Тут ИМХО надо не с векторов начинать, а с поиска нормального найчного руководителя, такого что бы сам у стола стоял. А то сейчас начальников тьма развелось, а как правитьно пипетку держать показать некому.
Участник оффлайн! Veshka
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 05.07.2006 21:07     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

А что в коли неужели не вариант? Прям дрожжа и всё?
Участник оффлайн! Sergeant
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 05.07.2006 21:13     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

А что в коли неужели не вариант? Прям дрожжа и всё?


В один прекрасный день я понял, что плевать в чем делать: колли, дрожжи, бакуловирусы, эукариоты, вирусы, нейроны... По большому счету все одно и тоже. wink.gif
Глвавное, что бы деньги платили и публикации капали... beer.gif
Участник оффлайн! Sergeant
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 05.07.2006 21:51     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

2 Tom1

Пабмед ГОвориш... Еще и книги бывают... wink.gif

Ну и нафига мы книги окучиваем?
Участник оффлайн! guestA
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 06.07.2006 12:25     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

(Tom1 @ 05.07.2006 21:29)
Ссылка на исходное сообщение  Каша каша ты почитай что ганный участник писал в собственном топике по поводу еклрессии.... в Иколай......wink.gif

Tom1, что же вам показалось неверным в моем топике, если не секрет? shuffle.gif Расскажите, пожалуйста, поподробнее и лучше именно в том топике. Возможно, ваш рассказ даст мне новые интересные идеи. Буду благодарна. mol.gif

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 07.12.19 19:55
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft