Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
AlexBulldozer Участник |
Мне нужно поставить следующий эксперимент: мышам будут подсажены биоимпланты и надо будет потом определить интенсивность ангио ,остео, и хондрогенеза в местах посадки имплантов.Срезы будут парафиновые,по стандартной гистологической проводке. Понадобятся антитела на остеопонтин,остеокальцин,остенектин,коллаген 2,CD105. Собственно вопросы такие - можно ли обойтись тут только первыми антителами или лучше делать первые и вторые для усиления для усиления сигнала(неизвестно, много ли будет искомых белков после окончания эксперимента) И - не могли бы подсказать фирмы производители антител,где можно найти иммуногистохимические антитела на мышиный остеопонтин, остеонектин, остекальцин, CD105, коллаген 2. Из тех фирм,что я посмотрел (Novacastra, Chemicon, sigma,Becton Dickinson) я не нашел нужные антитела. Только в chemicon смог найти антитела на мышиный остеопонтин. |
guest: ммм IP-штамп: frQlBxj4iQSg. гость |
Это что такое? Стволовые клетки читоли? --Понадобятся антитела на остеопонтин,остеокальцин,остенектин,коллаген 2,CD105. Вы их собираетесь на одном срезе одновременно красить? Если да, то понадобится очень много умения и очень хороший флуоресцентный микроскоп(если метка флуоресцентная) с хорошим софтом. Обычно(на рутинном оборудовании с рутинными метками) больше трех цветов (синий зеленый красный(ну еще можно попытать инфракрасный)) не увидеть. На ферментной метке я вообще очень слабо представляю как это можно сделать. --Собственно вопросы такие - можно ли обойтись тут только первыми антителами или лучше делать первые и вторые для усиления для усиления сигнала(неизвестно, много ли будет искомых белков после окончания эксперимента). От того что вы примените вторые антитела сигнал не усилится. Коммерческие антитела никогда не содержат метки, если это не специальные готовые наборы для определенных исследований, так что вам по любому придется использовать непрямой метод(вторые антитела). И тут опять возникает вопрос о там, как красить одновременно несколько антигенов на одном срезе, в этом случае первичные антитела должны принадлежать разным животным, иначе неизбежна перекрестная реакция вторичных антител. Или придется вводить метку в первичные антитела. Это можно сделать самостоятельно или попросить фирму изготовителя, но тогда цена(возрастет очень существенно) и время исполнения заказа увеличится.-- --И - не могли бы подсказать фирмы производители антител,где можно найти иммуногистохимические антитела на мышиный остеопонтин, остеонектин, остекальцин, CD105, коллаген 2. Есть такой сайтик: www.biocompare.com поищите там. Навязшие в зубах конторы: Абкам, санта круз, cell signaling. Если поиски будут безуспешны. То тогда надо искать по статьям в pubmed, смотреть какие антитела используют авторы.
|
AlexBulldozer Участник |
"Это что такое? Стволовые клетки читоли?" Пока что не определился, это будут либо тканеинженерные конструкции- матрикс с клетками, или просто один матрикс. Из чего именно он будет сделан - не знаю так как его делать не я буду. "Вы их собираетесь на одном срезе одновременно красить?" Отдельно остеогенез(Остеопонтин,нектин и кальцин),отдельно хондрогенез(Еще не определился какие белки буду смотреть) и отдельно ангиогенез(CD105). Разумеется более трех меток на одном препарате смотреть не намерен. |
LabRabbit |
в остальном-стандартная методика. если что-пишите в личку. |
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
(LabRabbit @ 22.10.2012 16:03) сразу предупреждаю, я каталоги не смотрела. но я бы поискала следующее: первичные анти-маус антитела к вашим маркерам (коза, кролик или крыса, обычно). первичные антитела не крашеные всегда. а к ним-вторичные (антикролик или другие), но не с обычными флуорофорами, а с квантовыми точками. эти точки светятся так, что вы и самый минимум их увидите . я сама занимаюсь наночастицами, своими глазами видела, ФИТЦ и прочие краски уважать перестала-выгорают, трудно найти и т.д. и т.п. можно красить все виды антител на одном препарате. в остальном-стандартная методика. если что-пишите в личку. "я сама занимаюсь наночастицами" © )))))))))) |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |