Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Расчет количества рестриктазы
Кураторы темы:* Ольга Л.
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


Добавить сообщение в тему       Ввести решение этой задачиВнести в задачник новую задачу
Участник оффлайн! Ольга Л.




 прочитанное сообщение 21.08.2006 17:44     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail

Условие:
Вам нужно порезать 1мкг ПЦР-продукта длиной 1,6kb рестриктазой EcoRI. Для этой рестриктазы в ПЦР-продукте имеется 2 сайта рестрикции.
Какое минимальное количество ед. (u) рестриктазы EcoRI вам потребуется для проведения реакции за 1 час?

Для справки:
1.Unit Definition
One unit is defined as the amount of enzyme required to
digest 1µg of lambda DNA in 1 hour at 37°C in 50µl of
assay buffer.
2. Длина lambda DNA приблизительно 48 kb
3. Для EcoRI у lambda DNA 5 сайтов рестрикции.

Ответ округлите до целых чисел


Ответ с 2,5% точностью:   
      


/ Сборник задач,  #114205  /
Область: Молекулярная биология (биохимия, генная инженерия)
Характер и уровень: Простые (расч)


Сообщение было отредактировано Ольга Л. - 23.08.2006 08:46

Всего благодарностей: 6Поблагодарили (6): AE_, Yeaster, iliaY, Павел, Трев, ЦВТ ХИМРАР



Сообщение в колонке новостей: Информация, связанная с нашей профессиейСообщение в колонке новостей, раздел "Информация, связанная с нашей профессией"
22.08.2006 11:02
Участник оффлайн! AE
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 22.08.2006 19:26     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

(Ольга Л. @ 21.08.2006 16:44)
Ссылка на исходное сообщение  Какое минимальное количество ед. (u) рестриктазы EcoRI вам потребуется?


Народ вот решает. Некоторые даже получают ответы как у автора. Никто не ругается, что задача не корректная или не правильно решена. Тишь да гладь.
А можно я, как чайник в молекулярно-биологической кухне, задам пару провокационных вопросов.

1. Если так сложилось, что я готов ждать не час, а два часа, то могу ли я взять вдвое меньше единиц фермента?

2. Если я запихал тоже самое в 25µl то могу ли я считать, что за 30 минут реакция пройдет полностью.

Ответы, если можно, с объяснением.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Ольга Л.
Участник оффлайн! Ольга Л.




 прочитанное сообщение 23.08.2006 09:17     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Спасибо АЕ за справедливую критику.

Да, составитель задач из меня никудышний, не зря так долго не решалась ее писать.
В ответ на провокационные вопросы
1. Да, Вы можете взять единиц фермента меньше, теоретически даже вдвое. Но, практически, фермент с течением времени, и, соответственно, раундами рестрикции постепенно теряет свою активность. Насколько быстро - вероятно зависит от фермента.
2. Нет, не можете, поскольку количество сайтов рестрикции и количество фермента осталось прежними, только в меньшем объеме. С чего бы рестриктазе вдруг начать работать быстрее?

Надеюсь, я ответила на вопросы.
Участник оффлайн! nas
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 23.08.2006 11:06     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

(Ольга Л. @ 23.08.2006 10:17)
Ссылка на исходное сообщение 
2. Нет, не можете, поскольку количество сайтов рестрикции и количество фермента осталось прежними, только в меньшем объеме. С чего бы рестриктазе вдруг начать работать быстрее?

То есть, если разбавить смесь до 25 мл (буфером, ну альбумина добавить, чтобы фермент не инактивировался) - то реакция пройдет за то же время???
Участник оффлайн! Yeaster




 прочитанное сообщение 23.08.2006 13:17     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

В условиях задачи не указано еще некоторые параметры - распложение сайтов рестрикции, наличие star-activity у рестриктазы в данном буфере. Но так ли это важно? Принципиально задача сводится к проверке понимания взаимосвязи между количеством ДНК, ее размером и количеством фермента. Дополнительные параметры необходимо учитывать уже в практическом применении в онкретной ситуации.

Что до влияния объема реакционной смеси на скорость ферментативной реакции - то вопрос сложный и теоретически результат, на мой взгляд, непредсказуем. Вдвое скорость, конечно, не возрастет. Но, с одной стороны, вы сокращаете объем вдвое и уменьшаете промежуток времени, необходимый для встречи в растворе ДНК и фермента, но при этом возрастает вязкость раствора и к тому же увеличивается концентрация компонентов буфера, в котором хранится рестриктаза, что может негативно сказаться на скорости реакции.

Так что задача вполне понятная. Ну, может быть стоит дополнить ее некоторыми ограничениями, чтобы снять спорные моменты.
Еще раз спасибо Ольге.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): AE
Участник оффлайн! Urrу
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 23.08.2006 13:52     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

1. Если так сложилось, что я готов ждать не час, а два часа, то могу ли я взять вдвое меньше единиц фермента?

2. Если я запихал тоже самое в 25µl то могу ли я считать, что за 30 минут реакция пройдет полностью.

В обоих случаях нет, т.к. и там и там изменения не дадут линейного отклика на эффективности реакции. В последнем случае, вообще, может произойти снижение эффективности из-за двукратного увеличения вязкости реакционной смеси...

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): AE
Участник оффлайн! AE
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 23.08.2006 13:55     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

(Ольга Л. @ 23.08.2006 08:17)
Ссылка на исходное сообщение  Да, составитель задач из меня никудышний, не зря так долго не решалась ее писать.

Да ладно вам прибеднятся. Очень полезная задача
 
1. Да, Вы можете взять единиц фермента меньше, теоретически даже вдвое. Но, практически, фермент с течением времени, и, соответственно, раундами рестрикции постепенно теряет свою активность. Насколько быстро - вероятно зависит от фермента.

Ну это так, разминка была. Спасибо, что подправили условие.

 
2. Нет, не можете, поскольку количество сайтов рестрикции и количество фермента осталось прежними, только в меньшем объеме. С чего бы рестриктазе вдруг начать работать быстрее?


Количество осталось тем-же, но молярная концентрация сайтов увеличилась. А скорость ферментативной реакции зависит все-таки от концентраци, а не от количества субстрата. Иначе бы в определении единицы не был бы указан объем. Ну и как уже сказала nas, если объем реакции очень сильно увеличить а концентрацию сайтов соответсвенно уменшить, врядле приходится ожидать той-же скорости реакции.
Участник оффлайн! Ольга Л.




 прочитанное сообщение 23.08.2006 15:37     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Хорошо, хорошо, давайте по-порядку.
Я думаю с первым вопросом мы разобрались.
Теперь по-поводу второго. Суть вопроса заключалась в том, что если уменьшить объем реакции вдвое, то уменьшится ли время реакции вдвое? Ответ - нет. Соглашусь, объяснение я дала не совсем корректное.
Время работы молекулы рестриктазы состоит из следующих этапов:
1. Распознавание сайта рестрикции на молекуле ДНК
2. Присоединение фермента к найденному сайту
3. Разрезание сайта
4. Отсоединение фермента от ДНК.
Я полагаю, что 2-4 этапы у нас константные, т.к. состав буфера и температура не меняются. Остается 1-й этап.
С одной стороны, если концентрацию сайтов увеличить, то ферменту будет легче найти нужный и времени на это потребуется меньше. С другой стороны, при увеличении количества ДНК повышается вязкость раствора (то, о чем писали Urry и Yeaster), ферменту становится "труднее пробираться" между нитями ДНК, движение молекул в растворе замедляется и время реакции увеличивается. Т.о. если постепенно уменьшать количество реакционной смеси, то вначале мы получим ускорение реакции (но не линейное), потом будет некая точка перегиба (если представить себе график), после чего - снижение скорости реакции.
Кроме того, каждая молекула фермента способна провести определенное количество раундов гидролиза, после чего разваливается/инактивируется.

Надеюсь, такое объяснение публику устроит больше.

Помимо всего прочего, вот одно из определений ед. активности:

http://russia.sibenzyme.com/page.phtml?articlet=30
За одну единицу активности эндонуклеазы рестрикции принимают количество фермента, необходимое для полного гидролиза в течении одного часа одного микрограмма ДНК при оптимальной температуре и в оптимальном реакционном буфере.

Заметьте, здесь указано количество субстрата и не указан объем реакционной смеси, т.е. речь не идет о концентрации (можете обвинить авторов в безграмотности smile.gif).

И вот еще полезное замечание
http://www.promega.com/guides/re_guide/chaptwo/2_1.htm
Volume: Viscous DNA solutions inhibit enzyme diffusion and can reduce enzyme activity. DNA concentrations that are too dilute can fall below the Km of the restriction enzyme and also affect enzyme activity. Volume considerations must take into account final ionic strength and must result in glycerol concentrations no higher than 5-10% in order to avoid star activity. Reaction volumes of 10-50µl per microgram of DNA are recommended.

Сообщение было отредактировано Ольга Л. - 24.08.2006 09:20

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): AE
Участник оффлайн! AE
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 23.08.2006 17:20     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

(Ольга Л. @ 23.08.2006 14:37)
Ссылка на исходное сообщение  Хорошо, хорошо, давайте по-порядку.
Я думаю с первым вопросом мы разобрались.


Да разобрались. Кстати, если походить вокруг приведенной вами ссылки можно найти интересную табличку
http://www.promega.com/guides/re_guide/chaptwo/2_2.htm
из которой узнать сохранность активности некоторых рестриктаз во времени. Для EcoRI линейность ответа сохраняется как минимум от 15минут до 4х часов.
Так что на первый мой вопрос ответ Да.

 
Теперь по-поводу второго. Суть вопроса заключалась в том, что если уменьшить объем реакции вдвое, то уменьшится ли время реакции вдвое? Ответ - нет. Соглашусь, объяснение я дала не совсем корректное.
......
Т.о. если постепенно уменьшать количество реакционной смеси, то вначале мы получим ускорение реакции (но не линейное), потом будет некая точка перегиба (если представить себе график), после чего - снижение скорости реакции.
......
Надеюсь, такое объяснение публику устроит больше.


Объяснение меня не до конца устроило (про публику не знаю), однако аргументированно с ним спорить у меня не хватает знаний, но практический вывод меня вполне устраивает.

Еще раз спасибо за задачу.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Ольга Л.
Gal
IP-штамп: frYQ4K.bticsw
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  14.07.2008 18:53     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

"Molecular Cloning" 2nd edition 1989: One unit of enzyme is usually defined as the amount required ti digest 1microgram of DNA to completion in 1 hour in recommended buffer and at recommended temperature in a 20 - microliters reaction.
Guest
IP-штамп: frlscERHcuXAs
гость



 прочитанное сообщение 15.12.2017 21:10     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

Для того чтобы заняться сексом, теперь не нужно тратить
огромные суммы на ночные клубы в поисках девицы,
которая смогла бы скрасить вечер одинокого мужчины
eek.gif
yolo
IP-штамп: frCcyOQ99/O6Q
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  11.04.2019 06:42     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

true religion jeans sale
coach outlet store
coach outlet online
cheap air jordans
louis vuitton purses
kappa clothing
polo ralph lauren outlet
louis vuitton outlet online
ugg outlet
coach outlet store
louboutin outlet
durant shoes
ferragamo outlet
coach outlet online
fitflops
moncler outlet online
cheap air jordans
pandora jewelry outlet
ralph lauren outlet
air jordan
ubiq shoes
nike outlet store
adidas nmd r1
adidas outlet online
michael kors outlet
under armour shoes
yankees jerseys
kate spade outlet
moncler
air jordan 3
phillies jerseys
converse shoes
louboutin outlet
valentino
fivefingers shoes
off white clothing
ed hardy
nike outlet
adidas wings shoes
celine outlet
moncler pas cher
kendra scott
coach outlet store
true religion outlet
hermes bags
juicy couture
supreme clothing
christian louboutin sale
adidas ultra boost
christian louboutin shoes
gymshark sale
balenciaga shoes
air jordan uk
fila shoes
uggs outlet
coach factory outlet
supra shoes
fitflops outlet
fitflops sale clearance
oakley sunglasses outlet
pandora jewelry
moncler outlet online
curry 4 shoes
ravens jerseys
kate spade outlet online
air max pas cher
air max
coach outlet clearance
ugg outlet
true religion outlet store
minnesota vikings jersey
jordan shoes for sale
adidas ultra boost
fjallraven backpack
louboutin outlet
coach factory outlet online
air max shoes
adidas superstars
adidas outlet online
hermes belt
north face outlet online
ray ban sunglasses outlet
gucci outlet online
cheap mlb jerseys
seattle seahawks jersey
kate spade outlet online
air max 2015
true religion outlet
fitflops
nfl jerseys
coach outlet store online
michael kors outlet clearance
coach outlet online
yeti tumbler
coach outlet online
christian louboutin
true religion outlet store
houston texans jerseys
coach outlet online
true religion jeans
true religion
mac cosmetics
yeezy shoes
pandora charms outlet
rolex watches
ugg outlet
ferragamo belts
asics outlet
nike sneakers
christian louboutin outlet
uboutin shoes
ugg
chrome hearts outlet store
nike air max 2018
fila
mbt shoes
coach outlet
adidas neo shoes
cheap jordan shoes
cheap nike shoes
ralph lauren outlet
kobe 12
coach factory outlet online
revolution 3
cheap air max
kobe shoes
michael kors outlet online
coach outlet store
jets jersey
coach factorty outlet online
christian louboutin shoes
yeezy boost 350
lacoste outlet
nike outlet store
kate spade
coach outlet sale
pandora charms sale clearance
kate spade outlet online
versace clothing
coach factory outlet online
cubs jerseys
pandora charms
coach handbags
true religion jeans
canada goose outlet
broncos jerseys
giuseppe zanotti outlet store
le coq sportif
prada outlet
adidas yeezy boost
salvatore ferragamo shoes
converse shoes
columbia outlet store
giuseppe zanotti shoes
nike air force
ed hardy outlet
ralph lauren outlet
coach outlet online
coach outlet online
snapback hats
coach factory outlet
coach outlet online
kyrie 2
nike outlet
coach handbags outlet
canada goose
philipp plein outlet
oakley sunglasses wholesale
pandora sale clearance
hermes outlet store
coach outlet online
ralph lauren outlet online
pandora charms outlet
coach outlet online
ralph lauren outlet
celine outlet
coach factory outlet
prada outlet
coach outlet
the north face jackets
louboutin outlet
yeezy shoes
cheap maui jim sunglasses
cheap mlb jerseys
ugg boots sale
adidas slides
persol sunglasses sale
moncler jackets
moncler jacka
cardinals jerseys
ralph lauren uk
stone island sale
moncler jackets
hydro flask sale
louboutin shoes
coach factory outlet online
moncler outlet online
coach factory outlet online
nike outlet store
cheap snapbacks
thomslist
IP-штамп: frgSOQ3cPmoKc
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  13.04.2020 07:20     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

https://www.poloralphlaurensales.us.com Polo Ralph Lauren USA Factory Outlet
wholesale price coach https://www.coachfactory-outlet.com
Coach Outlet finest selection https://www.coachoutlet-handbags.com
https://www.ralphlaurenclassic.org.uk Polo Ralph Lauren ladies white
https://www.katespadeoriginals.com Discount Kate Spade Satchel
https://www.atlanticralphlauren.com Polo Ralph Lauren Hot Sale
https://www.katespadesale.us.com Kate Spade outlet shop online
Polo Ralph Lauren Plus Size https://www.poloralphoutlet.us.com
https://www.coachus.us.com Coach Wallets outlet online official
Large Discount Polo Ralph Lauren https://www.polooutletsfactorystore.us.com
https://www.coachoutlet.org.uk Coach Handbags Wholesale UK
https://www.coach-bags.org pink Coach Womens
Kate Spade black Friday https://www.katespadeoutlet-store.us.com
https://www.polooutletoutlet.us.com Lowest Price Polo Ralph Lauren Mens Clothing Online
coach crossbody designer https://www.coach-factoryoutletstore.com
Coach Handbags UK Shop https://www.coachfactory.uk
Coach Purses Discount https://www.coachcolorful.us.com
https://www.polooutlet.uk Ralph Lauren Shorts
UK official Coach online shop https://www.coachhandbagsoutlets.us.com
https://www.poloralphlauren-sale.us.com Cheapest Ralph Lauren Dresses
Sale Online Kate Spade https://www.kate-spadeoutletstore.us.com
https://www.ed-hardy.uk.com where can i buy Ed Hardy
Ed Hardy Beach Pants Discount https://www.edhardy.org.uk
Love Kills Slowly T Shirts https://www.edhardys.us
https://www.coachsurprise.us.com Coach Wallets Outlet USA
Cheapest Kate Spade https://www.katespadeoutletnewyork.us.com
Ed Hardy T Shirts USA https://www.lovekillsslowly.us
Kate Spade Handbags https://www.katespadestyle.com
https://www.atlanticcoach.co.uk Coach Shoulder For Women
https://www.atlanticpolo.co.uk Ralph Lauren Polo outfit for women
https://www.ralphlaurenholiday.com Polo Ralph Lauren New York Discount
https://www.deepedhardy.com Lowest Price ED Hardy T Shirts
https://www.katespadenew.com Kate Spade Backpack
Ed Hardy Hoodies https://www.edhardyoriginals.top
Ed Hardy official website Cheapest https://www.donedhardy.us.com
https://www.edhardysoriginals.com ED Hardy Shopping
https://www.katespademore.com Kate Spade Handbags
https://www.ralphlaurencolorful.com Ralph Lauren Sale Retailer
Official Coach https://www.newcoachoutlet.com
cheap big Polo Ralph Lauren https://www.prloutlet.co.uk
https://www.edhardy.top Ed Hardy Hoodies
Buy Cheap Polo Ralph Lauren Hoodies Online https://www.polorlpony.com
Discount ED Hardy https://www.edhardysurprise.com
sex toys
IP-штамп: frlPgpOj6xwGc
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  03.08.2020 05:56     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

Plastic inflatable dolls came about in 1968, when it became legal to sell <a href="https://www.sexdolls.today/">sex toys</a> via mail. By the 1980s, they were in sex shops. With the continual development of Artificial intelligence , the level of companionship has entered a new realm where the entire landscape of sexual toys < a href=" ">https://www.sexdolls.today/</ a> https://www.sexdolls.today/ https://www.sexdolls.today
Участник оффлайн! ycz95886

indonesia



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  13.08.2020 11:00     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

https://findery.com/abk98936



http://www.ohmstudio.com/user/325701



https://gitlab.coko.foundation/fiw00482



https://dzone.com/users/4428618/fiw00482.html



https://www.codecademy.com/profiles/net6604577558



https://express.yudu.com/library/1352908/Bo...bet88-s-Library



https://www.fanfiction.net/~fiw00482



https://www.goodreads.com/user/show/1198168...lasbobet88-bola



https://www.kongregate.com/accounts/Bolasbobet88



https://www.mobypicture.com/user/wbw11462



https://id.arduino.cc/wbw11462



https://pbase.com/wbw11462/image/170952402



https://forums.ubisoft.com/member.php/5763213-wbw11462



https://www.business.com/advice/member/p/judi-bola-4/



https://www.bitsdujour.com/profiles/LrPMfO



https://www.artfire.com/ext/people/Bolasbobet88



https://www.free-ebooks.net/profile/1016015/judi-bola



https://themehunt.com/profile/Bolasbobet88



https://steepster.com/Bolasbobet88



https://www.bombstat.com/domain/judionline8...ystrikingly.com



http://kbforum.dragondoor.com/members/hby36275.html



https://my.desktopnexus.com/hby36275/



https://www.chordie.com/forum/profile.php?id=1021290



http://www.cplusplus.com/user/hby36275/



http://forum.geonames.org/gforum/user/edit/473898.page



https://registerm88.com/forum/profile.php?id=5478



http://www.fxug.net/userinfo.php?uid=122103



https://catchthemes.com/support-forum/users/bolasbobet88/



https://torgi.gov.ru/forum/user/edit/1121120.page



https://themeegg.com/support-forum/users/Bolasbobet88



https://piqs.de/user/Bolasbobet88



http://www.cruzroja.es/creforumvolint_en/u...dit/104447.page



http://photozou.jp/user/top/3263576



http://www.aytoloja.org/jforum/user/edit/79774.page



https://www.elac.com/forums/users/Bolasbobet88



https://connect.symfony.com/profile/uzu19969



https://www.pedalroom.com/members/Bolasbobet88



https://artmight.com/user/profile/103151



https://community.act.com/t5/user/viewprofi...e/user-id/79901



https://www.misterpoll.com/users/611210



https://www.mightycause.com/user/4bvz2g/preview



https://www.mindmeister.com/account/general/prediksijituku



https://gfxcosy.com/user/Bolasbobet88/



http://massandra.su/user/liemjenny550/
bissell vacuum cleaners
IP-штамп: frlPgpOj6xwGc
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  31.08.2020 10:06     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

We’ve always been a family-owned business, so we know all the quirks (and maybe a few hard-to-reach dust bunnies) of a house that is home to a family. We know the peace of mind that comes with having a clean home for those you hold closest to your heart, whether they have two legs or four. That’s why we have a complete collection of innovative products at your disposal—from < a href=" ">https://www.bissellvacuumcleaners.com/</ a> https://www.bissellvacuumcleaners.com/ https://www.bissellvacuumcleaners.com
<a href="https://www.bissellvacuumcleaners.com/">bissell vacuum cleaners</a> to carpet deep cleaners, cleaning solutions we’ve formulated ourselves specifically for real messes we all make to pet hair removal products. We’ve got you covered. Each product is designed to help you take care of your favorite spaces and the surfaces in them. After all, what’s the point of having a floor, or a sofa, or a carpet if you can’t play on it?
Участник оффлайн! Queenswu666




 прочитанное сообщение 11.09.2020 09:31     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

если вы - свободный автор или владелец веб - сайта, то вам не следует игнорировать идентификацию плагиат.веб - сайт находится в самом начале SERP только в том случае, если он имеет оригинальное содержание.как только вы поместите сайт в каталог поисковой системы, поисковая система будет обнаруживать плагиат, и если сайт скопирует содержимое, то он будет наказан.наказание зависит от степени плагии.один из самых серьезных недостатков заключается в том, что рейтинг сайта будет снижен.Если сайт находится вверху, то благодаря копированию содержимого он находится внизу.Поэтому важно проверить содержимое репликатора перед загрузкой на сайт.
https://www.thecontentnet.com
Участник оффлайн! lopezgalindo2646




 прочитанное сообщение Сообщение на английском  30.09.2020 09:14     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

https://swalife.site
https://oklahoma-naturalgas.site/
https://ez-pass.info
https://myvanilladebitcard.site/
안전놀이
IP-штамп: frCiFXLI5jPVw
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  02.01.2021 09:30     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

안전놀이터
I happened to read your article today. It's a very good article, and it must be very helpful. As a token of appreciation, I would like to inform you of information that can help you. I hope you can go here and get some information that will help you. Thank you. I wish you luck.
안전놀이터모음
메이저놀
IP-штамп: frCiFXLI5jPVw
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  02.01.2021 09:30     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #20 множественное цитирование

메이저놀이터
I happened to read your article today. It's a very good article, and it must be very helpful. As a token of appreciation, I would like to inform you of information that can help you. I hope you can go here and get some information that will help you. Thank you. I wish you luck.
토토사이
IP-штамп: frCiFXLI5jPVw
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  02.01.2021 09:31     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #21 множественное цитирование

I saw your writing well. Thank you for good information. I will give you good information, so please refer to it. Thank you. Be full of good things.
토토사이트
Guest
IP-штамп: frJKaerpkB5o2
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  31.03.2021 19:06     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #22 множественное цитирование

먹튀검증

You can increase your blog visitors by having a fan page on facebook.
Guest
IP-штамп: frJKaerpkB5o2
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  31.03.2021 19:07     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #23 множественное цитирование

카지노쿠폰지급

Excellent website. Plenty of useful info here. I’m sending it to several friends ans also sharing in delicious. And of course, thanks for your sweat!
Guest
IP-штамп: frJKaerpkB5o2
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  31.03.2021 19:07     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #24 множественное цитирование

메리트카지노

Some times its a pain in the ass to read what website owners wrote but this site is very user friendly!
Guest
IP-штамп: frJKaerpkB5o2
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  31.03.2021 19:07     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #25 множественное цитирование

카지노사이트

hey all, I used to be just checking out this blog and I actually admire the premise of the article, and don’t have anything to do, so if anybody wish to to have an engrossing convo about it
Guest
IP-штамп: frJKaerpkB5o2
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  31.03.2021 19:07     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #26 множественное цитирование

해외문자

Amazing post – Gulvafslibning | Kurt Gulvmand however hey I having a issue we can not seem to be capable of sign up your rss feed
Guest
IP-штамп: frJKaerpkB5o2
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  31.03.2021 19:08     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #27 множественное цитирование

토토사이트

Quite insightful post. Never believed that it was this simple after all. I had spent a very good deal of my time looking for someone to explain this topic
Guest
IP-штамп: frJKaerpkB5o2
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  31.03.2021 19:08     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #28 множественное цитирование

안전바카라사이트

Hi there, I found your blog via Google while searching for first aid for a heart attack and your post looks very interesting for me.
Guest
IP-штамп: frJKaerpkB5o2
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  31.03.2021 19:08     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #29 множественное цитирование

먹튀검증

The difference between the right word and the almost right word is more than just a fine line! it's like the difference between a lightning bug and the lightning!
Guest
IP-штамп: frJKaerpkB5o2
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  31.03.2021 19:09     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #30 множественное цитирование

메이저놀이터

Comfortabl y, the post is actually the freshest on this precious topic. I concur with your conclusions and also definitely will eagerly look forward to your future updates.
Guest
IP-штамп: frJKaerpkB5o2
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  31.03.2021 19:09     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #31 множественное цитирование

우리카지노

My partner and i still can not quite assume that I could be one of those reading through the important recommendations found on this blog.
Guest
IP-штамп: frJKaerpkB5o2
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  31.03.2021 19:09     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #32 множественное цитирование

메이저놀이터

Wow I just adore her! She is so beautiful plus a really good actress. I don’t think the show V is all that good, none the less I watch it anyway just so I can see her.
Guest
IP-штамп: frJKaerpkB5o2
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  31.03.2021 19:10     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #33 множественное цитирование

먹튀검증업체

I am only commenting to let you know of the remarkable experience our girl encountered reading the blog.
Guest
IP-штамп: frJKaerpkB5o2
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  31.03.2021 19:10     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #34 множественное цитирование

I am only commenting to let you know of the remarkable experience our girl encountered reading the blog.

I am only commenting to let you know of the remarkable experience our girl encountered reading the blog.
Guest
IP-штамп: frJKaerpkB5o2
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  31.03.2021 19:10     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #35 множественное цитирование

먹튀폴리스


Do you mind if I quote a couple of your posts as long as I provide credit and sources back to your site?
먹튀검증
IP-штамп: frPtszR0RQoj2
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  10.08.2021 12:18     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #36 множественное цитирование

I have read all the comments and suggestions posted by the visitors for this article are very fine,We will wait for your next article so only.Thanks!<A HREF="https://casinoseo.net/" TARGET='_blank'>먹튀검증사이트</A>
Guest
IP-штамп: frA2HjgkwydCY
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  29.11.2021 09:20     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #37 множественное цитирование

안전놀이터 Manchester United defender Phil Jones (29) was named on the Premier League day squad in 650 days. However, as he failed to play in the end, only the bench heated up.
Guest
IP-штамп: frA2HjgkwydCY
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  29.11.2021 09:23     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #38 множественное цитирование

메이저놀이터 Jones left Blackburn Rovers in the summer of 2011 to join Manchester United. At that time, he played well, raising expectations as a defender who would lead the next
Guest
IP-штамп: frA2HjgkwydCY
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  29.11.2021 09:27     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #39 множественное цитирование

먹튀검증 However, as time passed, he often left due to frequent injuries. Hamstring injuries are basic, and they had a hard time hurting various parts such as knees, shins, ankles,
Guest
IP-штамп: frA2HjgkwydCY
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  29.11.2021 09:28     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #40 множественное цитирование

안전놀이터 As a result, there was a high possibility that he would leave this summer, and fans should also be released. However, Jones has a strong will to stay, so he will continue to
Guest
IP-штамп: frA2HjgkwydCY
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  29.11.2021 09:31     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #41 множественное цитирование

먹튀폴리스 Jones was included in the Premier League day squad for the first time in 650 days. Jones was on the substitute list at 1:30 a.m. on the 29th (Korea Standard Time) in the 13th
Guest
IP-штамп: frA2HjgkwydCY
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  29.11.2021 09:34     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #42 множественное цитирование

온라인카지노 British media The Sun said, "Jones appeared on the bench while Manchester United tied Chelsea. He was included in the squad on the day of the Premier League match in 650
Guest
IP-штамп: frA2HjgkwydCY
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  29.11.2021 09:36     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #43 множественное цитирование

메이저사이트 "ESPN" Jeff Bankruptcy reporter said on his personal Twitter account on the 29th (Korea Standard Time), "Right-hander Gaussman has agreed to a five-year, $110 million
Guest
IP-штамп: frA2HjgkwydCY
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  29.11.2021 09:37     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #44 множественное цитирование

먹튀검증 Gaussman wore a San Francisco Giants uniform this season and played 192 innings in 33 games, recording 14 wins, 6 losses, and 2.81 227 strikeouts. 14 wins were the most wins
Guest
IP-штамп: frdmv/zaJVb.U
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  01.12.2021 13:13     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #45 множественное цитирование

안전놀이터 Makanday is a young prospect born in 2001 and has grown up through Tottenham Youth Academy since childhood. He joined the U-18 team from the 2017-18 season and has been promoted
Guest
IP-штамп: frdmv/zaJVb.U
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  01.12.2021 13:14     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #46 множественное цитирование

메이저놀이터 He can play in all positions in the second line, but he mainly plays as a right winger. Macanday started playing in Premier League 2 in the 2018-19 season, showing his best performance
Guest
IP-штамп: frdmv/zaJVb.U
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  01.12.2021 13:15     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #47 множественное цитирование

먹튀검증 Tottenham is trying to renew its contract with Markanday, who showed excellent potential, but it is difficult because Markanday wants to play in the first division. It is a time when Antonio
Guest
IP-штамп: frdmv/zaJVb.U
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  01.12.2021 13:16     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #48 множественное цитирование

안전놀이터 The problem is that Makanday's contract period is until this season. From January, you can freely negotiate with other teams as a free agent. Some teams have already shown interest
Guest
IP-штамп: frdmv/zaJVb.U
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  01.12.2021 13:17     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #49 множественное цитирование

먹튀폴리스 The mentioned teams are teams that can recruit Macanday in the winter transfer market and allow him to play as a key player immediately. If the two sides are unable to renew their
Guest
IP-штамп: frdmv/zaJVb.U
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  01.12.2021 13:19     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы     
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #50 множественное цитирование

온라인카지노 KBO announced a list of candidates for the 2021 Shinhan Bank SOL KBO Golden Glove award on the 1st. 84 players will compete until the 7th for the 10 Golden Gloves given to the best

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Сборник задач · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в тему       Ввести решение этой задачиВнести в задачник новую задачу

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.03.24 06:54
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft