Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Hei |
|
Hei |
Сообщение было отредактировано Hei - 13.12.2017 21:59 |
Mykhaylo Постоянный участник Україна |
Если таки это концентрация, то считаете коэф разведения ( для первого 110/20, 2го - 140/20 и т.д) и делите конечный объем Вашей смеси на эту величину. Скажем для 30 мкл первого праймера 30/(110/20) = 5,5 мкл Так считаете все компоненты (не забудьте буфер, буквы, магний) , объем "доводите" до 30 водой ЗЫ Задачи решаете? |
Hei |
|
MMM Постоянный участник |
А почему вам в смесь надо добавить всего 1мкл праймера? А не 0,2мкл? или 3 мкл? Ответьте на следующие вопросы: 1)Какой конечный объем реакционной смеси ПЦР в мкл? 2)Какова концентрация праймеров в исходных растворе 110/140пМ на мл, на мкл, на литр? 3)Какова концентрация праймеров в реакционной смеси ПЦР |
LMP Постоянный участник |
|
RNK Постоянный участник СССР |
Смотрите программу: Reaction volume : 100 µl 110 µM primer: 18.18 µl 140 µM primer: 14.29 µl 100 µM Probe: 10 µl
|
RNK Постоянный участник СССР |
Смотрите программу: Reaction volume : 100 µl 110 µM primer: 18.18 µl 140 µM primer: 14.29 µl 100 µM Probe: 10 µl
|
Hei |
|
ksm Постоянный участник |
|
sceptique Постоянный участник временной жизни |
Вы в каком хоть ВУЗе учитесь? Вы ЕГЭ по химии за деньги что ли купили? P.S. При разведении в Вашем случае разбавлять финальный объём придётся водой, это видно сразу, по отношению стоковых и конечных концентраций (они сильно отличаются, больше чем 3х). Соответственно, можно тупо посчитать их независимо по отдельности, на финальный объём реакции. Потом сложить тупо добавляемые объёмы и эту сумму вычесть из общего объёма реакции, получится объём, в который можно будет заливать другие стоки при разбавлении, после последнего реагента разницу оставшуюся между объёмами всех стоков и финальным объёмом реакции добить водой. Это неправильно в общем случае, но это гораздо быстрее, чем точно для всех объёмов решать общую задачу разбавления для всех трех стоков. Сообщение было отредактировано sceptique - 14.12.2017 23:10
|
sceptique Постоянный участник временной жизни |
(RNK @ 14.12.2017 20:30) Этому учат в школе, развбавлять растворы. Смотрите программу: Reaction volume : 100 µl 110 µM primer: 18.18 µl 140 µM primer: 14.29 µl 100 µM Probe: 10 µl Reaction volume : 25 мкл 110 мкM primer: 4,55 мкл 140 мкM primer: 3,57 мкл 100 мкM Probe: 2,5 мкл |
RNK Постоянный участник СССР |
(Hei @ 14.12.2017 21:06) естественно, остальной объем на воду до 100 мкл. |
Mykhaylo Постоянный участник Україна |
(ksm @ 14.12.2017 21:22) Какая "мерная посуда" для таких манипуляций? Как разбавлять я написал еще в 3м сообщении, но топик стартер похоже писатель, а не читатель. |
Horse-radish Участник |
(ksm @ 14.12.2017 20:22) и при приготовлении растворов не забывайте о необходимости пользоваться точной мерной посудой! Ага, объемом не меньше чем на литр. Шутку понял, я молодец. Сообщение было отредактировано Horse-radish - 15.12.2017 11:27 |
akatar |
(RNK @ 14.12.2017 20:32) А в институте, дабы меньше утруждать мозг и обходиться без программки, учат при разведении праймеров брать финальный объем разведения, номинально равный концентрации разводимого праймера. Для вышеозначенного примера это получается так: 110 µM primer: 10 мкл праймера + 100 мкл Н2О = 110 мкл 10 µM раствора 140 µM primer: 10 мкл праймера + 130 мкл Н2О = 140 мкл 10 µM раствора 100 µM Probe: 10 мкл Probe + 90 мкл Н2О = 100 мкл 10 µM раствора Ну или кратно увеличить/уменьшить финальный объем разведения по потребности, например: 140 µM primer: 5 мкл праймера + 65 мкл Н2О = 70 мкл 10 µM раствора |
ksm Постоянный участник |
(Mykhaylo @ 15.12.2017 11:52) Какая "мерная посуда" для таких манипуляций? Как разбавлять я написал еще в 3м сообщении, но топик стартер похоже писатель, а не читатель. мерная посуда тут причем!!! ОНА ВАЖНА!!! необходима точность в работе!!! |
Mykhaylo Постоянный участник Україна |
(ksm @ 15.12.2017 13:13) Угу, особенно в контексте данного топика о разведении праймеров и раскапывания ПЦР. Толсто даже для троллинга |
akatar |
(ksm @ 15.12.2017 15:13)
|
ksm Постоянный участник |
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
А может он не хочет понимать что такое "молярность" и 10-кратные стоки. Ему это не надо и читать неохота...
|
Mykhaylo Постоянный участник Україна |
А "сколько отвесить колбасы" - это в "конвеерных" только проходит да и то лучше чтобы минимальное понимание было.
|
ksm Постоянный участник |
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
(Mykhaylo @ 15.12.2017 17:57) Новичку нужно раз показать и объяснить как это считается (и желательно проверить через день-два понял ли), а не не строить из себя держателей жизненных премудростей. А "сколько отвесить колбасы" - это в "конвеерных" только проходит да и то лучше чтобы минимальное понимание было. Михайло, вот Вы попытались выше "показать" и объяснить (кстати, и я тоже не понял что вы хотели сказать) и какой результат? Если человек не понимает элементарных вещей, все потуги донести до него истину бесполезны. Таких спецов, если у него нет желания понимать, надо сразу беспощадно выбраковывать. И прошу не переходить на личности и не строить из себя Макаренко. |
ksm Постоянный участник |
|
MMM Постоянный участник |
(ksm @ 15.12.2017 18:53) Сморя чо делить, ежели НУЛЬ, то можно и полопиталить.
|
sceptique Постоянный участник временной жизни |
(MMM @ 15.12.2017 22:27) Пролопиталить-то можно, но тока накой время тратить на это, когда результат не гарантирован заранее? Нужно стремиться действовать по всеобъемлющему закону мира и минимизировать функционал своих действий. |
MMM Постоянный участник |
|
sceptique Постоянный участник временной жизни |
|
ksm Постоянный участник |
|
sceptique Постоянный участник временной жизни |
|
watchesbiz Постоянный участник |
|
watchesbiz Постоянный участник |
|
watchesbiz Постоянный участник |
|
Tylor5251121 |
|
watchesonline89 Постоянный участник |
|
nushra4 Постоянный участник |
|
guest: ghori92 IP-штамп: frJ29JTBlItMA гость |
|
aaaaa12 IP-штамп: frJ29JTBlItMA гость |
|
Shields Постоянный участник |
|
nushra4 Постоянный участник |
|
Shields Постоянный участник |
|
Shields Постоянный участник |
|
David21 Участник |
|
ghori92 Постоянный участник |
|
alam12 IP-штамп: frJ29JTBlItMA гость |
|
ghori92 Постоянный участник |
|
ghori92 Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |