 * |   |
|
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда |  Zbio-wikiNG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: |
|
Правила
* Вопрос по ПЦР
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.
   |
 МамаБори |
 02.04.2017 02:29
Работаю с корью и краснухой. Выделяю РНК на приборе QIACube, ставлю реал тайм с набором Invitrogen в формате мультиплексной реакции на оба вируса. Материал для выделения - носоглоточная слизь или моча. Периодически получаю отрицательные результаты ПЦР в тех случаях, когда есть все предпосылки к положительным (высокие значения IgM, материал собран в срок, доставлен с соблюдением холодовой цепи и т.д.). Рекомбинантные контроли проходят хорошо, а в образцах амплификации нет. Сломала голову уже над тем, с чем может быть это связано: 1) стоит ли использовать другой метод выделения РНК (не колоночный, а сорбентный)? 2) мультиплекс стоит заменить на монореакцию? 3) происходит ингибирование? что может быть ингибитором? стоит ли попробовать наборы, "заточенные" под мочу (такие вообще есть?)? Прошу совета опытных коллег и старших товарищей. |
|
LMP Постоянный участник |
02.04.2017 08:42
|
|
bio101 |
02.04.2017 15:35
|
|
vb Постоянный участник |
02.04.2017 22:24
а так, да, выше написали - это же не цифровая электроника. Процессы вероятностные. Бывает. |
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
03.04.2017 11:50
Наборы от Инвитрогена  .. это я понимаю киты на RT или PCR, но без праймеров и зондов? Если так, выкладывайте все олиги, обсудим... Заодно отвечу на Ваши вопросы: 1. Стоит, но колоночный метод в принципе тоже сорбентный.  2. Стоит, от простого к сложному. Если олиги самопальные или древние - не факт, что все на хрен димеризуется и т.п. 3. Стоит, попробовать наборы, "заточенные" под мочу.  Вы что их и в моче ищете!?Хотя...ищите где хотите, но  ингибирование возможно даже в "воде", поэтому всегда в хозяйстве держите Внутренний контроль.
|
|
bio101 |
04.04.2017 10:03
(-Ъ- @ 03.04.2017 12:50)  А что за рекомбинатные контроли? Если речь о плазмидах, то вся Ваша работа - сплошная халтура. Нет контроля на ревертазную реакцию!Наборы от Инвитрогена .. это я понимаю киты на RT или PCR, но без праймеров и зондов? Если так, выкладывайте все олиги, обсудим... Заодно отвечу на Ваши вопросы: 1. Стоит, но колоночный метод в принципе тоже сорбентный. 2. Стоит, от простого к сложному. Если олиги самопальные или древние - не факт, что все на хрен димеризуется и т.п. 3. Стоит, попробовать наборы, "заточенные" под мочу. Вы что их и в моче ищете!?Хотя...ищите где хотите, но ингибирование возможно даже в "воде", поэтому всегда в хозяйстве держите Внутренний контроль.ну, рекомбинантные контроли- так сейчас модно- ПЦР-продукт, клонированный или просто фрагмент (иногда отсеквенированный , разведенный до соотв. циклов, тут-то как раз все ясно. Но это в данном случае недостаточно. Надо проверять все- от конкретного лота используемого набора в сравнении с заведомо работающим (остатки старого), до- что более верятно, ошибки собственных ручек. Но голову все равно надо включать, ни в одном траблшутинге про это никогда не напишут
|
|
watchesbiz Постоянный участник |
 23.11.2021 15:35
|
| « Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |
 |
· Викимарт - все интернет-магазины в одном месте · Доска объявлений Board.com.ua ·
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Powered by Invision Power Board(Trial) v2.0.0 © 2024 IPS, Inc.