molbiol.ru -> Индукция экспрессии в еколях

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* Индукция экспрессии в еколях -- нужный момент ... --

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

Nameless
Постоянный участник
CA

23.08.2005 18:25

URL #1

Экспрессировал в BL21 pLysS в pGEX4T1 GST-связанный белок 24 кДа, ТВ среда, 1мМ ИПТГ. Я только начал с этой всей системой работать, выделял по методике, и белок экспрессировался как-то очень плохо. Что самое странное, вроде как соседи по лабе выделяли его в намного больших количествах, причём методика вроде как одна и та же. После долгих мучений и тыканий выяснилось, что основное различие было в том, что народ растил перед индукцией до высоких значений ОД600, больше единицы. У меня в методике было 1, я до неё доращивал и белка было мало, когда же один раз дорастил до 1.4, белка было навалом. Потом уже выяснилось

что народ тоже растил на самом деле не до единицы а дольше, но это уже детали.

Я понимаю что вроде как для разных белков это всё индивидуально, но исходя просто из опыта тех, кто больше с этим работал чем я, хочу спросить, когда обычно, в большинстве случаев вы индуцируете культуру при работе как с tac так и с T7 промотором? Естественно, речь идёт о белках которые в принципе должны экспрессироваться хорошо и быть хорошо растворимы.

Gubanov Sergey
Постоянный участник

24.08.2005 16:58

URL #2

если использовать TerrificBroth для нетоксичных белков индукция при ОD600 - 2-4- самое оптимальное- для качалки, 4-6 для ферментёра.

Поблагодарили (1): Nameless

Guest
IP-штамп: frlkSmZr37YvE
гость

24.08.2005 17:11

URL #3

ya videla forezy, gde использоваli TerrificBroth (no mozhno i druguyu bogatuyu sredu, tipa 2xYT) i voobsche ne indutsirovali, ono "samo indutsirovalos'" (rastili pri 25 i do i posle induktsii)

geiger
IP-штамп: frEPMurG/KpRk
гость

24.08.2005 18:04

URL #4

вот как китайские китайцы делают
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.f...5262&query_hl=2

Поблагодарили (1): Jeka

nigoal123
IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE
гость

23.05.2022 12:03

URL #5

The secret to 123GOAL good article writing is to 11hilo understand how สล็อต123 to plan and structure a บาคาร่าออนไลน์ piece before slotxo you write it.

A well-structured ลิงค์รับทรัพย์ article allows you to use nigoal your writing skills to sexy gaming best advantage and dreamgaming communicate your ideas nigoal 50รับ100 correctly, concisely, clearly, coherently, and completely.

guest: 123
IP-штамп: frJhOCvSv9ICE
гость

02.06.2022 12:21

URL #6

For years there 123VEGA have been FA CHAI SLOT calls for Asia - which JILI SLOT is home to some PRAGMATIC PLAY of the world's สล็อตPG biggest CO2 emitters - to ditch fossil fuels 11HILO to help tackle climate AMB CASINO change. Countries in the region - including FC SLOT its three biggest economies 88KTC China, Japan and India - were criticised last year 123GOAL for not making a bigger.

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.