molbiol.ru -> Проблема с трансгенными mus musculus.

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* Проблема с трансгенными mus musculus. -- Исчезновение трансгена в потомстве. --

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

Neuroscientist

01.11.2014 22:30

URL #1

Здравствуйте. Как неспециалисту в молекулярной биотехнологии (являюсь нейрофизиологом) помогите по возможности разобраться в следующей проблеме: развожу для экспериментов линию двойных трансгенных мышей: мыши этой линии содержат два трансгена: один из них, tTA, находится под промотером раннего гена c-fos и является активатором тетрациклинового оператора TetO второго, репортерного, трансгена LacZ. При гетерозиготном скрещивании трансгенной особи с мышью дикого типа (C57 black) в потомстве по результатам генотипирования обнаруживается, что часть мышей не носит трансгена вообще, как и должно быть, а часть-носит то один, то другой трансген,но весьма редко оба. В последний раз в новой волне потомства не было двойных трансгенов вообще. Картины визуализации ПЦР четкие, однозначные, всегда ставлю контроли с ДНК точно двутрансгенной особи и вряд ли это какой-то артефакт генотипирования. Какая может быть этому причина и как с этим бороться? Линия мышей коммерческая, из JaxLab , им тоже нужно отрапортовать об этом , но все-таки может и тут у кого есть соображения? Заранее благодарю.

Сообщение было отредактировано Neuroscientist - 01.11.2014 22:32

Guest
IP-штамп: fr6hE.MQFxV3g
гость

02.11.2014 05:36

URL #2

pri ukazannom skreschivanii Tg nasleduutsya nezavisimo. oni zhe skoree vsego na raznyh chromosomah i ne znaut, chto vy hotite chtoby oni vmeste nasledovalis :-)

znachit Tg1 budet v 50% sluchaev i Tg2 v 50% sluchaev nezavisimo.

to est primerno 25% myshei v potomstve voobsche bez Tg, 25% s oboimi Tg i 50% imeuschimi libo odin, libo drugoi....

25% eto vesma redko?

Flyamer
Постоянный участник
Москва

02.11.2014 11:46

URL #3

Это верно только в том случае, если исходная трансгенная мышь гетерозиготна по обоим трансгенам, иначе, если она гомозиготна, все потомки должны быть гетерозиготными по обоим трансгенам.

Neuroscientist

02.11.2014 23:23

URL #4

Как увеличить количество особей в потомстве с двумя трансгенами, т.е. как-то изменить схему скрещивания?

Сообщение было отредактировано Neuroscientist - 02.11.2014 23:25

Nameless
Постоянный участник
CA

03.11.2014 09:29

URL #5

Вы на данном этапе не можете отличить гомозигот от гетерозигот по обоим трансгенам. Ваши мыши (F0) изначально гетерозиготны по каждому из трансгенов, плюс трансгены, как сказали выше, не сцеплены. С помощью ПЦР невозможно (если неизвестен сайт интеграции) определить, несут ли особи из их потомства (F1) одну копию каждого из трансгенов или две, так как в обоих случаях будет полоса на ПЦР. Но это можно определить путём их скрещивания с мышами дикого типа. Скрещивайте ваших мышей (F0) между собой, a потомство (F1) скрещивайте с C57 (=F2). Те мыши F1, что с C57 дали потомство F2 в котором 100% мышат дают на ПЦР сигнал для обоих трансгенов, гомозиготны по обоим трансгенам, дальше скрещивайте их между собой.
Если известны сайты интеграции трансгенов, сделайте фланкирующие праймеры и скринируйте потомства F1, пока не станут попадаться мыши, с ДНК которых эти праймеры не будут давать сигнал.
В описании линии на сайте Jackson обычно пишут, гомо- или гетерозиготны мыши по данному трансгену.

Neuroscientist

03.11.2014 22:28

URL #6

Благодарю за советы. А гомозигот желательно скрещивать между собой из разных семей или внутри одной?

Сообщение было отредактировано Neuroscientist - 03.11.2014 22:31

Nameless
Постоянный участник
CA

04.11.2014 22:17

URL #7

Можно внутри одной или с родителем.

watchesbiz
Постоянный участник

27.11.2021 06:07

URL #8

https://jumpshare.com/v/QxZ9Rn2mfDCaBq2AdBG1
https://www.edocr.com/v/znnrba3z/watcheshut...lica-Watches-UK
https://www.tuugo.us/Companies/best-replica...s/0310006695505
https://topsitenet.com/article/988178-hints...ca-rolex-watch/
http://simp.ly/p/nxGlWb
https://telegra.ph/Hints-on-Choice-of-a-Hig...lex-Watch-02-22
https://replicarolexwatche2.blog.fc2.com/blog-entry-1.html
https://www.knowpia.com/s/blog_60f7e7c31014a97a
https://zenwriting.net/replicawatches24/hin...ica-rolex-watch
https://globalcatalog.com/replicawatchesuk.us/en
http://www.cplusplus.com/articles/iE1wvCM9/
https://eatsleepride.com/c/346210/hints_on_...ica_rolex_watch
https://www.myminifactory.com/users/watcheshutukcom
https://www.mioola.com/ReplicawatchesUK/post/199764/
https://en.gravatar.com/allreplicawatches24
https://8tracks.com/replicawatchesuk

watchesonline89
Постоянный участник

27.12.2022 09:34

URL #9

https://ameblo.jp/omegawatches89/entry-12756646005.html
https://omegawatches89.bigcartel.com/produc...s-replica-rolex
https://penzu.com/p/d8b4c076
https://omegawatches89.gumroad.com/p/reason...-are-so-popular
https://omegawatches89.gumroad.com/p/tips-f...replica-watches
https://omegawatches89-95.webselfsite.net/a-propos
https://anotepad.com/notes/2w2d9wgq
https://www.myminifactory.com/stories/reaso...s-6331ca21647d6
https://omegawatches89.seesaa.net/article/490300837.html
https://blog.udn.com/omegawatches89/176226733
https://62e8da780bf7c.site123.me/blog/where...-watches-online
https://wakelet.com/wake/NSGeOdLxkniZ60lTSrkpM
https://telegra.ph/Replica-Watches-Find-Hig...ms-Online-08-03
https://omegawatches89.simplesite.com/452939025

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.