Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Осаждение белков трихлоруксусной кислотой -- comments to a permanent page of the site --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Тема связана с: Осаждение белков ТХУ
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Forum robot
Постоянный участник
на сервере в Москве



 прочитанное сообщение 06.06.2005 18:54     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Осаждение белков трихлоруксусной кислотой. Метод полезен, когда концентрация белка в растворе слишком мала для анализа, или объем слишком велик, чтобы нанести нужное количество белка на гель.
к
IP-штамп: frQtbDwjgPMwo
гость



 прочитанное сообщение 06.06.2005 18:54     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

По моему опыту получается, что количество соосадителя завышено раз в 10, что приводит к существенным потерям на стадии промывания.
_Sanya_
IP-штамп: frftLGqhpFF.A
гость



 прочитанное сообщение 11.01.2006 02:33     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

К пункту 8.
Осадок белка можно промывать однократно ледяным ацетоном (80% - 100%)
Участник оффлайн! Serg-66




 прочитанное сообщение 30.11.2006 02:40     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Что-бы, при отмывке белка ацетоном не осаждались соли (что не очень хорошо при электрофорезе) можно предварительно промыть осадок 1 мл 10% ТХУ
Участник оффлайн! Layelleth




 прочитанное сообщение 25.01.2007 18:06     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Сработает ли осаждение ТХУ, если мне нужно отделить белок от липидов перед электрофорезом?
- Липиды по моему опыту очень мешают обычному денатурирующему форезу в ПААГ - если их много. А в моем случае липидов много
Участник онлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.01.2007 18:40     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

Практически нет.....
guest: ммм
IP-штамп: frHvyGooYAnV2
гость



 прочитанное сообщение 26.01.2007 13:09     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

От липидов наверное лучше избавлятся осаждением белка ацетоном.
Участник оффлайн! lirrok




 прочитанное сообщение 01.02.2007 14:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Подскажите, пожалуйста, как высаживаются белки ацетоном или дайте ссылку. Спасибо.
guest: ммм
IP-штамп: frHvyGooYAnV2
гость



 прочитанное сообщение 01.02.2007 14:34     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

---Подскажите, пожалуйста, как высаживаются белки ацетоном или дайте ссылку. Спасибо.

Ну как,как? Если количественно весь белок высаживать, то охладить раствор с белком до 00С, а ацетон градусов до -20 и медленно, в течении минутки, долить 4-5V ледяного ацетона в раствор белка, перемешивая, и на -200 - минимум на час, максимум - навсегда.

Время выдержки на -20 зависит от концентрации белка: если белка очень много то может хватить и 10', если мало, то суток обычно достаточно.

Внимание! В ацетоне практически нерастворимы неорганические соли, поэтому, если они присутствуют в высоких концентрация в исходном растворе белка, то выпадают в осадок вместе с белком и загрязняют его.
Участник оффлайн! lirrok




 прочитанное сообщение 01.02.2007 14:45     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

Простите, если задаю глупые вопросы, т.к. в работе с белками - новичок. А что дольше делать? Мыть? В чём растворять после? Нужно ли сушить и т.д.?
Участник оффлайн! lirrok




 прочитанное сообщение 01.02.2007 14:46     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

Опс
Не "дольше", а "дальше" :-)
Участник оффлайн! Oleg Klychnikov
Постоянный участник
Moscow/Amsterdam->Leiden



 прочитанное сообщение 01.02.2007 15:43     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

(guest: ммм @ 01.02.2007 11:34)
Ссылка на исходное сообщение 
Внимание!  В ацетоне практически нерастворимы неорганические соли, поэтому, если они присутствуют в высоких концентрация в исходном растворе белка, то выпадают в осадок вместе с белком и загрязняют его.

4 объема ацетона к одному объему белка (80%)
на ночь на -20 и будет вам счастье
после этого фуговать эдак 10-20(30) мин, эдак 10-20 kg при 4С
отобрать супер, сушить - можно на спидваке, можно просто
открыть эппендорфу, если нужна активность после такого
издевательства, то сушить лучше на -20 с открытыми пробирками

и фсе
надо только иметь ввиду, что как любой метод преципитации,
ацетонирование имеет свои ограничения на количество белка
(если его мкг - то надо ко-преципитировать), на всякие разные
детергенты, если есть в буфере (белок просто может не сесть),
ну и всяки другие прелести,
так, что лучше всего пробовать на не очень дорогом для сердца
образце пилотное высаживание


только в этом топике - это офф-топ tongue.gif lol.gif

Сообщение было отредактировано Oleg Klychnikov - 01.02.2007 15:54
Гость
IP-штамп: frvrUlzpAIyfs
гость



 прочитанное сообщение 26.03.2008 18:57     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

плиз, никогда не высаживайте сукрозный градиент ацетоном!
Guest
IP-штамп: frPanb9Lvzu1g
гость



 прочитанное сообщение 27.03.2008 22:29     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

Даже после солюбилизации SDS белок хорошо высаживается, если сначала проинкубировать 1 час на холоду с 10% ТХУ (в конечной концентрации), а затем разбавить равным объемом ацетона и оставит на ночь при -20 град, как здесь и советовали.
Гость
IP-штамп: frTX1Bt2UC3vE
гость



 прочитанное сообщение 08.04.2008 18:04     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

а мы промываем от ТХУ обычным охлажденным -20С этанолом
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 29.01.2009 17:36     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

А как отмыть осажденный тху осадок от тритона?
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 29.01.2009 18:11     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

-А как отмыть осажденный тху осадок от тритона?
А почему вы думаете, что он там остается. Тритон вроде в ТХУ растворим.

Ну промойте метанолом, а затем метанолом с изобутанолом, вот как-то так.
Участник оффлайн! Vadim Sharov
Постоянный участник
Россия



 прочитанное сообщение 29.01.2009 22:29     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

МММ, прав: отмойте раза два осадок тем же ТХУ, а само ТХУ холодным ацетоном.
Участник оффлайн! david
Постоянный участник
Montreal, Canada



 прочитанное сообщение 29.01.2009 22:39     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

... Но лучше этих осаждений избегать. уж хлопотное это дело растворять осаздхенный белок. Я как то взял клетки с тарелки 10 см и выделял белок разным объемом лизис буфера. вестерн вышел одинаковый. С тех пор, я всегда сначала клетки соскребываю ПБС-ом, делаю спин даун, и полученный осадок растворяю в 50-100 микроллитров лизис буфера
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 30.01.2009 11:59     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #20 множественное цитирование

ммм, думаю так, потомучто осадок в сравнении с контролем, насыщеннее раза в 3. И pH другой сильно. И оно мылкое малость.
Но тут такая система, что и не такое бывает...
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 30.01.2009 14:07     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #21 множественное цитирование

--ммм, думаю так, потомучто осадок в сравнении с контролем, насыщеннее раза в 3.

Гхм! А может это дезоксихолат или любые другие органические кислоты(или их соли).

--И pH другой сильно.
ЧТО!!! рН НЕ КИСЛЫЙ?!!
Значит вы мало льете кислоты(ТХУК) или у вас исходно сильно щелочная среда возможно имеет смысл подкислить ее перед осаждением уксусом или фосфорной кислотой. Тритон на рН не влияет и сам вроде в кислой среде растворим.
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 30.01.2009 16:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #22 множественное цитирование

Нет там солей (почти). Так, остатки незначительные, фрагменты микромолей.
Дезоксихолат не заказал ещёsmile.gif
Бум курить...
Гость
IP-штамп: fr7Ufi3qeYVAg
гость



 прочитанное сообщение 27.03.2009 10:47     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #23 множественное цитирование

Подскажите, пожалуйста!!! Я хочу выделить белок из эндотелиальных микрочастиц плазмы крови. Пробовала разрушать мембрану микрочастиц ультразвуком, а потом осадить ацетоном.После оставила на -20 на ночь, отцентрифугировала, высушила осадок, который потом растворила в буфере - но концентрация белка оказалась очень мала - что делать?
Гость
IP-штамп: frQVis2YTy5L2
гость



 прочитанное сообщение 07.04.2009 22:35     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #24 множественное цитирование

Подскажие, пожайлуста, что подойдет для мгновенной коагуляции белка для качественного анализа? Почему именно ТХУ так распространена для осаждения? Каков механизм ваимоействия ТХУ с беком?
Участник оффлайн! Vadim Sharov
Постоянный участник
Россия



 прочитанное сообщение 08.04.2009 03:11     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #25 множественное цитирование

(Гость @ 07.04.2009 21:35)
Ссылка на исходное сообщение  Подскажие, пожайлуста, что подойдет для мгновенной коагуляции белка для качественного анализа? Почему именно ТХУ так распространена для осаждения? Каков механизм ваимоействия ТХУ с беком?

Есть такой автор Остерман. Почитайте. wink.gif
guest: plotter
IP-штамп: frlnAsDr.5x7A
гость



 прочитанное сообщение 24.02.2011 18:07     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #26 множественное цитирование

Нашел в тяговом шкафу около 2-х литров ТФУ (трифтор...) Как она работает в плане осаждения? Не пробовал кто?
Участник оффлайн! Daemonarchestratygos
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 24.02.2011 18:25     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #27 множественное цитирование

(guest: plotter @ 24.02.2011 16:07)
Ссылка на исходное сообщение  Нашел в тяговом шкафу около 2-х литров ТФУ (трифтор...) Как она работает в плане осаждения? Не пробовал кто?

Зависит от плана осаждения. wink.gif
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 24.02.2011 18:50     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #28 множественное цитирование

--Нашел в тяговом шкафу около 2-х литров ТФУ (трифтор...)

Я думаю вам их с радостью обменяют на 100кг ТХУК
Seleniti
IP-штамп: frdHXkjSmVgA.
гость



 прочитанное сообщение 27.02.2012 22:10     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #29 множественное цитирование

Подскажите пожалуйста,для чего после осаждения белка 5 % ТХУ, затем охлажденным 95 % ацетоном нужно осадок растворять в 0,5 N NaOH при нагревании?Для того,чтобы избавиться от ТХУ?Или для чего другого?
guest: ммм
IP-штамп: frQlBxj4iQSg.
гость



 прочитанное сообщение 28.02.2012 06:27     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #30 множественное цитирование

---Подскажите пожалуйста,для чего после осаждения белка 5 % ТХУ, затем охлажденным 95 % ацетоном нужно осадок растворять в 0,5 N NaOH при нагревании?Для того,чтобы избавиться от ТХУ?Или для чего другого?

1) В обсуждаемом протоколе, указанные вами процедуры отсутствуют.
2) От ТХУК вы не избавитесь, просто она перейдет в соль тихлорацетат натрия.
guest: валерий
IP-штамп: fr/FWcWysIOtM
гость



 прочитанное сообщение 07.11.2012 13:02     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #31 множественное цитирование

осадил белок тху, после чего не нашел N-конца. Не может ли тху алкилировать аминогруппы белка?
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 07.11.2012 15:15     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #32 множественное цитирование

--осадил белок тху, после чего не нашел N-конца. Не может ли тху алкилировать аминогруппы белка?

Алкилировать не может, может ацилировать. Но вероятность низкая, возможно ваш белок модифицировался еще на стадии(ях) где-то до осаждения.

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 18.10.18 19:46
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft