Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Rob Участник |
Сообщение было отредактировано Rob - 21.11.2017 00:04 |
vb Постоянный участник |
(MMM @ 20.11.2017 18:24) Угу! Все по кругу ходите. Вопрос: Вы хотите найти некую эффективную концентрацию своего Fc белка? Или вы хотите сравнить аффинность вашего белка с неким стандартом. --Т.е. на подготовленный планшет я добавляю свое антитело Этот номер не пройдет! В данном наборе планшет уже сенсебилизирован и добавить на него чего-то своего не удастся. Вот нанести свой Fc-белок вы можете. А дальше вас может ждать либо удача, либо разочарование. Если в данном наборе антитела, которыми сенсебилизирован планшет и которые биотинилированы оба работают против Fc фрагмента, но на направлены против разных его участков - все будет хорошо, а вот если хотя бы одно из них направлено против Fab, то вы ничего не увидите. Если я правильно понимаю, у него фьюжн белка с Fc. |
MMM Постоянный участник |
А ваше антитело "получено" в человеке? А ваш Fc-белок, Fc какого зверя воспроизводит? |
Rob Участник |
|
MMM Постоянный участник |
Ну, и вообще мне непонятно, как АТ человека против Fc человека вообще могут существовать в растворе они должны выпадать в осадок или это должен быть только Fab фрагмент, но тогда не факт, что он будет связываться с АТ, сесебилизирующими планшет. |
Rob Участник |
тогда у меня другая идея... Пометить мой белок Fc (не важно человек или мышки) специальной краской.. Проинкубировать планшет антителом...сверху помеченный белок...и прочитать сигнал. |
MMM Постоянный участник |
Вы на полпути к решению. Прочтите еще раз мое сообщение в этом же топике от 15.09.2017 00:06(реплика 16): "Но на самом деле вам надо сделать не так. Вам надо мышинную химеру или просто человеческий нативный Fc пометить биотином связать ее с нижними античеловеками, а потом вытеснять тестируемым белком и белком сравнения (тем же нативным Fc или мышинной химерой, но не меченными биотином) и вытеснять эквимолярными количествами и сравнивать результаты вытеснения с помощью стрептавидин пероксидазы." |
Rob Участник |
(MMM @ 27.11.2017 20:41) -Пометить мой белок Fc (не важно человек или мышки) специальной краской..- Вы на полпути к решению. Прочтите еще раз мое сообщение в этом же топике от 15.09.2017 00:06(реплика 16): "Но на самом деле вам надо сделать не так. Вам надо мышинную химеру или просто человеческий нативный Fc пометить биотином связать ее с нижними античеловеками, а потом вытеснять тестируемым белком и белком сравнения (тем же нативным Fc или мышинной химерой, но не меченными биотином) и вытеснять эквимолярными количествами и сравнивать результаты вытеснения с помощью стрептавидин пероксидазы." Благодарю Ваше мнение, нужно ли инкубировать планшет с немеченным антителом? Или можно делать напрямую...на планшет положить тестируемое антитело, сверху - биотинилорованный протеин Fc, ...а потом Стрептавидин HRP? |
MMM Постоянный участник |
Да!! --Или можно делать напрямую...на планшет положить тестируемое антитело, сверху - биотинилорованный протеин Fc, ...а потом Стрептавидин HRP? Так можно тестировать качественно нанличие сваязывания или его отстутствие. Сравнить таким способом ничего не удасться. |
Susani Россия |
|
Xowincahi Москва |
|
osvedyua Казань |
|
Tttenenil Россия |
|
Rob Участник |
(MMM @ 02.12.2017 18:05) --нужно ли инкубировать планшет с немеченным антителом? Да!! --Или можно делать напрямую...на планшет положить тестируемое антитело, сверху - биотинилорованный протеин Fc, ...а потом Стрептавидин HRP? Так можно тестировать качественно нанличие сваязывания или его отстутствие. Сравнить таким способом ничего не удасться. А вот еще одна идея у меня...инкубировать планшет тестируемым антителом....отдельно в пробирке инкубировать это же тестируемое антитело с тестируемым белком (белок титровать). Этот микс из пробирки добавить на планшет...инкубировать...и измерять сигнал. По наличию сигнала будет видна сила связывания антитела и белка в пробирке. |
Rob Участник |
(Tttenenil @ 14.12.2017 15:34) По Вашему на форум можно только знаущим - презнающим..? |
zaravalinh Москва |
|
razhandal Краснодар |
|
nadianyana Украина |
|
nrymrtln РОССИЯ |
|
myajwfho Россия |
Покрываю плитку анти-человеческим неспецифич. антителом...потом блокирую BSA...потом, белок Fc человеческий...потом, антитело человеческое, произведенное в мышках...и сверху |
Handarin Россия |
покрываю пластик плитки goat anti-human UNLB антителом...инкубирую ночь потом, белок, у которого human Fc....инкубирую потом, антитело human Fc (mouse origin)...инкубирую потом, goat anti-human HRP..инкубирую... крашу Не будет ли HRP антитело вязаться к UNLB антителу? |
Sarodren Россия |
|
fsmgoiws Россия |
|
watchesonline89 Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |