Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Mingazova |
с уважением Лиля |
-Ъ- Постоянный участник Москва |
Новая генерация пользуется китами. Речь о тотальном выделении НК? |
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
А второй вопрос для чего используются в дальнейшем РНК и ДНК. Без этой информации обсуждать что либо бессмысленно. |
UBS Участник |
|
yamiren Участник |
|
RJ Dio Постоянный участник |
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
(yamiren @ 03.04.2011 09:36) Пишите в личку. |
-Ъ- Постоянный участник Москва |
(RJ Dio @ 03.04.2011 12:44) самые лучшие из несуществующих китов- определенно. Можно попробовать, понюхать там или даже лизнуть,в также получить кучу бессмысленной инфы, только купить нельзя. Русский рынок в полный рост хотя могу дать понюхать, но лизать и пробовать. |
sergeyrgmu Постоянный участник |
|
UBS Участник |
Правда мычат иногда (не для всех ПЦР методов подходят по сравнению с другими китами), но лягаться не пробуют. И то хорошо! |
sergeyrgmu Постоянный участник |
|
morbid Участник Москва |
во что превратился форум блин еще спросите как ручку держать или какой туалетной бумагой попу лучше вытирать
|
Daemonarchestratygos Постоянный участник |
(morbid @ 06.04.2011 08:59) Я предпочитаю Lambi. Гораздо комфортабельнее для ануса, чем мятая фильтровашка Filtrak или Millipore, например. |
RJ Dio Постоянный участник |
Сообщение было отредактировано RJ Dio - 06.04.2011 13:15
|
sergeyrgmu Постоянный участник |
|
RJ Dio Постоянный участник |
|
sergeyrgmu Постоянный участник |
|
RJ Dio Постоянный участник |
|
snegin Участник |
На счет выделения кустарным способом из животной ткани делаем в два этапа: 1. После инкупации с протеиназой используем хлороформ:изопентанол. С фенолом связываться не хотим (воняет шибко, да и опасен если на кожу хлюпнется). Далее осаждение изопропанолом. 2. Добавляем 1,5М NaCl, растворяем в нем ДНК. Потом 70 % холодный спирт и на 20 мин. при -20 С. Отмывка также спиртом. Мелкие детали типа центрифугирование и отсасывание в описании упустил, полагаю тем кто выделяет знает что как. |
RJ Dio Постоянный участник |
Прикольно- РНК- и без перчаток? Таких советчиков гнать... |
sergeyrgmu Постоянный участник |
А для ручного выделения на мембранах при использовании вакуумного насоса!!!! |
-Ъ- Постоянный участник Москва |
Тема топика ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК и РНК, а обсуждаюи ТУАЛЕТНУЮ бумагу от Миллипора... Да, такие повороты не для моей лошади, сказал бы мой друг. Лажа, одним словом. |
snegin Участник |
Кроме того, выделяем под ламинарами с предварительной УФ обработкой и с фенолом там работать тяжело, приходиться идти под вытяжку, а она не шибко стерильная (под ней всякие реактивы пахучие взвешиваем). Тут вот еще проблема. Выделяем ДНК и печени улиток. При выделении остается много пигмента - пробы после растворения в ТЕ порой даже темные (сама ДНК черная от них). Для ПЦР разбавляем в 100 раз. Большей частью идет хорошо (спасибо Ъ!), но в некоторых пробах (как раз темных) идет явное ингибирование (ДНК много, а колонки пустые). Как избавиться от этой гадости? Ни фенол, ни спирт эти пигменты не отмывают. |
RJ Dio Постоянный участник |
Про пахучесть фенола- слухи сильно преувеличены. Уж если что и воняет, то хлороформ, ибо на порядок более летуч. К тому же содержит фосген. Поэтому маска и перчатки- это замечательно, я бы еще и противогаз присоветовал. И ОЗК, тогда зашиворот вообще ничего попасть не сможет, как ни озорничай |
-Ъ- Постоянный участник Москва |
(snegin @ 06.04.2011 18:01) Выделяем ДНК и печени улиток. При выделении остается много пигмента - пробы после растворения в ТЕ порой даже темные (сама ДНК черная от них). Для ПЦР разбавляем в 100 раз. Большей частью идет хорошо (спасибо Ъ!), но в некоторых пробах (как раз темных) идет явное ингибирование (ДНК много, а колонки пустые). Как избавиться от этой гадости? Ни фенол, ни спирт эти пигменты не отмывают. "Из печени улиток я еще не выделял ДНК" - подумал Ъ. Не будем разбираться какими китами или же методом выделяете ДНК из ПЕЧЕНИ УЛИТОК, но скажу, что загрязнение пигментами ДНК при выделении на сорбентах на основе Силики - основной недостаток метода, независимо от формата набора - сорбции в объеме, колонки или магнитный носитель. В результате "кровопотливого" труда нам удалось устранить эту проблему раз и навсегда. и поэтому предлагаю поиспытать на "этом уникальном объекте". Если не возражаете, я Вам вышлю пробный набор... Да, а сколько весит печенка улитки? А я ведь жрал этих улиток, целых, вареных, ессно. |
RJ Dio Постоянный участник |
|
sergeyrgmu Постоянный участник |
|
sergeyrgmu Постоянный участник |
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
(sergeyrgmu @ 06.04.2011 19:23) нормальные все объекты... просто киты промега надо брать*_* они рулят!!!*3* и для растений есть и для тканей и для почв!!!!О_о!!!! Может быть в Промеге исправились уже, раз такой восторг (!!!,!!!,!!!,,о,о, ) у молодого поколена. |
RJ Dio Постоянный участник |
|
RJ Dio Постоянный участник |
Сообщение было отредактировано RJ Dio - 06.04.2011 18:43 |
-Ъ- Постоянный участник Москва |
|
RJ Dio Постоянный участник |
|
snegin Участник |
К RJ Dio Заинтересовал хлорид лития. Уточните сколько добовляют, с чем мешают, вообщем саму процедуру. Заранее спасибо. К Ъ - высылайте на тот же адрес. |
RJ Dio Постоянный участник |
п.6, если лень читать всю шнягу. Хотя полезно в любом случае |
snegin Участник |
|
RJ Dio Постоянный участник |
Сообщение было отредактировано RJ Dio - 07.04.2011 15:20 |
sergeyrgmu Постоянный участник |
|
sergeyrgmu Постоянный участник |
|
Daemonarchestratygos Постоянный участник |
|
sergeyrgmu Постоянный участник |
|
RJ Dio Постоянный участник |
|
sergeyrgmu Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |