Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* PAAG электрофорез белков -- comments to a permanent page of the site --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Тема связана с: SDS PAAG
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


страницы (9): « < 2 3 4 5 6 > »  
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Cruel
Участник
~



 прочитанное сообщение 15.05.2008 16:34     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес

А нужно ли подвергать воздействию 95С 5мин образец, денатурированный в 8М мочевины? Т.е. получается, что денатурация в этом случае проходит дважды?
Участник оффлайн! bukach
Постоянный участник
Geneva, Switzerland



 прочитанное сообщение 16.05.2008 00:43     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  ICQ

(Cruel @ 15.05.2008 16:34)
Ссылка на исходное сообщение  А нужно ли подвергать воздействию 95С 5мин образец, денатурированный в 8М мочевины? Т.е. получается, что денатурация в этом случае проходит дважды?

не то что бы не нужно, но нежелательно. но не из-за "дважды денатурации", а карбамоилирования и пр.
Участник оффлайн! Cruel
Участник
~



 прочитанное сообщение 19.05.2008 13:35     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес

не то что бы не нужно, но нежелательно. но не из-за "дважды денатурации", а карбамоилирования и пр.


тогда я могу эти образцы смешивать с 5хsds-page sample buf. и наносить? т.е. получается, что белки побегут в обычном белковом геле? я имею ввиду, что в геле нет мочевины и пр.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 19.05.2008 18:00     Сообщение для модератора       

-- нужно ли подвергать воздействию 95С 5мин образец, денатурированный в 8М мочевины? Т.е. получается, что денатурация в этом случае проходит дважды?

Если хотите восстановить S-S связи, то придется. Или ждать пока они востановятся сутки, другие.

Несмотря на
--"карбамоилирования и пр."


Я бы кипятиил в SDS, а потом сыпал бы сухую мочевину, до нужной концентрации.

-тогда я могу эти образцы смешивать с 5хsds-page sample buf. и наносить?

Ага, у вас образцы по ходу, до анализа в мочевине.
Ага, меня всегда весилил 5х буфер растворимый только при 60 градусах.
Можете добавить SDS чуть-чуть(0.1-0.2%) и глицерина для плотности. Не нужен вам там ведерный SDS. Просто в 8М мочевине SDS с белками практически не вяжется и его присутствие в пробе, по большому счету ничего не решает.

-- т.е. получается, что белки побегут в обычном белковом геле? я имею ввиду, что в геле нет мочевины и пр.

Если в геле будет мочевина, то это уже не будет Лэмли форез. SDS не будет связываться с белками и они будут делится не по массе, а по массе и заряду. К тому же щелочные белки вообще не войдут в гель при таком раскладе. Возможны и более размытые зоны.

У вас мочевина останется в кармане. А белочек будет входить в гель без нее. Если SDS-а не хватит, что бы растворить белок(а SDS из пробы и ЭБ будет сквозь мочевину со свистом пролетать) при вхождении в гель будут осадки(шлейфы от кармана по гелю в концентрирующем и начале разделяющего геля). С другой стороны очень много SDS в геле и в ЭБ будут рождать артефакты. Так что если будут осадки, то можно просто повысить концентрацию SDS в пробе. Возникновение осадков зависит от концентрации белка в пробе и от его личной вредности агрегировать из денатурированного состояния.
Участник оффлайн! Cruel
Участник
~



 прочитанное сообщение 20.05.2008 11:29     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес

Здрасте ВСЕ!!!

Спешу поблагодарить ответивших на мои предыдущие посты - спасибо ребята!

теперь вот,

состав моих:

30% acrylamide/0,8 bis-acrylamide;

2.5x separating gel buffer: 1.875 M Tris·Cl, 0.25% SDS pH 8.9;

5x stacking gel buffer: 0.3 M Tris·phosphate, 0.5% SDS pH 6.7;

5x electrophoresis buffer: 0.5 M Tris, 1.92 M glycine, 0.5% SDS pH 8.8;

5x SDS-PAGE sample buffer: 0.225 M Tris·Cl, pH 6.8, 50% glycerol, 5% SDS, 0.05% bromophenol blue;

делаю пробы так: 1 объем 5x SDS-PAGE sample buffer и 4 объема образца.

В методике написано, что после смешивания пробу можно наносить.

Вопрос: надо ли мне эти пробы кипятить? если образец: белок + (100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris·Cl, 8 M urea pH to 8.0).

мое мнение: не нужно.

Сообщение было отредактировано Cruel - 20.05.2008 12:19
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 20.05.2008 13:11     Сообщение для модератора       

SH- реагентов нет, значит не нужно.
Участник оффлайн! Cruel
Участник
~



 прочитанное сообщение 20.05.2008 14:12     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес

благодарствую Вам премного.
просто иногда как-то клинит, вроде все понятно, а получается, что надуманно.
Дюймовочка
IP-штамп: frzU85/cFFizQ
гость



 прочитанное сообщение 28.05.2008 22:39     Сообщение для модератора       
Вопрос
Посоветуйте, плз!!! Я пищевик и пришлось столкнуться с электрофорезом и что-то не клеится!!! tongue.gif Я выделяю белки изо ржи: сначала водорастворимые, затем солерастворимые - 10% NaCl, щелочерастворимые - 0,1 М NaOH и на последней стадии спирторастворимые-70% этанолом. Образцы белков храню в морозильнике перед проведением фореза. Использую разрешающий гель 10%, а концентрирующий-4%. Белки гоню при 15 V и 80А. Затем гель достаю из стекол, промываю дистил. водой и сразу провожу окрашивание готовой краской кумаси. После окрашивания геля дорожки получаются размытыми и неровными. А в другой раз и вообще на некоторых дорожках белков и не видно. weep.gif У меня крутятся в голове мысли, что может краска плохая или может быть экстрагенты как то влияют? Или еще что-то..... confused.gif Помогите, плз! wink.gif
Дюймовочка
IP-штамп: frzU85/cFFizQ
гость



 прочитанное сообщение 28.05.2008 22:46     Сообщение для модератора       
Вопрос
И еще вопросик насколько точно определяется концентрация белка биуретовым методом? И все ли белки можно им определить? Или может стоит рассмотреть определение концентрации белка другим методом???? Заранее спасибо!!! smile.gif
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 29.05.2008 12:54     Сообщение для модератора       

Миллиметровочка! Ток 80А - это ток электросварки, при таком токе гель, не то что закипит, он прямо таки взорвется испаряясь.

НО! Даже если учесть, что Миллимитровочка описалась и это всего лишь 80mA, для 15V ток великоват. Доложите какое у вас общее сечение и длина геля.

--После окрашивания геля дорожки получаются размытыми и неровными.
Неровными это как? Извилистыми, чи шо?
Если извилистые, то вы, Миллимитровочка, плохо исходный раствор для геля перемешиваете.

-- А в другой раз и вообще на некоторых дорожках белков и не видно.
А от того и не бачите, шо нема. Я лично сильно сомневаюсь, что на 10% геле будут видны белки растворимые в 70% спирте, они скорее всего уйдут с фронтом.

-- У меня крутятся в голове мысли, что может краска плохая
Это вряд ли, но можете попробовать перед окраской вымочить гель в 40% спирте(или метаноле).
-- или может быть экстрагенты как то влияют?
Еще как, При чем все вами описанные. Соль сильно размывает зоны и дает шмеры. Щелочь по идее тоже должна размывать зоны. А спиртовые белки могут выпадать в осадок при входе в гель.
---Или еще что-то.....

Да много чего. Например, качество акриламида, бис'а, Трис'а, SDS и глицина.

А так же правильность рН в буферах для геля.
guest: Гость
IP-штамп: frzU85/cFFizQ
гость



 прочитанное сообщение 05.06.2008 22:04     Сообщение для модератора       

Спасибо большое за ответ! smile.gif
Доложите какое у вас общее сечение и длина геля.
Длина геля где-то 7 см, ширина - 8 см, а толщина где-то 2 мм.
Соль сильно размывает зоны и дает шмеры. Щелочь по идее тоже должна размывать зоны. А спиртовые белки могут выпадать в осадок при входе в гель
Может быть стоит попробовать выделить белки экстрагентами в более низких концентрациях??? Или не поможет? wink.gif
Гость
IP-штамп: frylpe1IIoRJI
гость



 прочитанное сообщение 20.07.2008 13:13     Сообщение для модератора       

подскажите, пожалуйста, какова должна быть концентрация белка для SDS-PAGE, чтобы его можно было без проблем увидеть, а то после ионообменной хроматографии делаем форез, и ничего не получаем, хотя доподлинно известно, что перед хроматографией белок был.
и вопрос второй: на каком вольтаже нужно гнать гель?
Гость
IP-штамп: fr3fNXtWnlk/U
гость



 прочитанное сообщение 21.07.2008 14:46     Сообщение для модератора       

Для биохимиков, который занимаются электорофорез растворимых белков. Как можно определить концентрация белков при выделения и равномерно давать к каждому лунку.Если можно конкетно описать. Е. Заранее спасибо!!!
Участник оффлайн! Knizhnik




 прочитанное сообщение 21.08.2008 23:41     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Подскажите пожалуйста, бывало ли у кого-нибудь такое, что белковый фронт доходит до 15 кДа, а дальше не идет, хотя краска идет. С чем это может быть связано? Все гоню в 15% геле, так как нужный белок 16 кДа. Спасибо, заранее.
НЮСЛИК
IP-штамп: frRqrRwAZVaJ6
гость



 прочитанное сообщение 02.10.2008 12:55     Сообщение для модератора       

подскажите пожалуйста, разгоняет ли кто-нибудь на этом свете молочные белки? просто беда какая-то с ними...... :weep:
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 02.10.2008 13:47     Сообщение для модератора       

подскажите пожалуйста, разгоняет ли кто-нибудь на этом свете молочные белки? просто беда какая-то с ними......

Ктон -нибудь разгоняет, но не я. А беда от того что нада казеин сначало створожить.
НЮСЛИК
IP-штамп: frRqrRwAZVaJ6
гость



 прочитанное сообщение 03.10.2008 09:04     Сообщение для модератора       

что створожить-это само собой. это ясно. вот только как на фракции казеин разобрать. вот в чем вопрос. и как сыворочные белки по отношению к казеиновым себя ведут. помогите кто-нибудь rolleyes.gif
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 03.10.2008 14:01     Сообщение для модератора       

--вот только как на фракции казеин разобрать.
Какие фракции? Чем фракции отличаются, тем способом и разделять.
--и как сыворочные белки по отношению к казеиновым себя ведут.
Никак, плавают в молоке. В чем ваш вопрос?
нюслик
IP-штамп: frRqrRwAZVaJ6
гость



 прочитанное сообщение 16.10.2008 08:55     Сообщение для модератора       

мне нужна методика выделения и идентификации белков молочного происхождения. может быть так понятнее будет. подскажите, пожалуйста, если кто-нибудь знает. confused.gif
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 16.10.2008 13:51     Сообщение для модератора       

-может быть так понятнее будет.

Нет так еще непонятнее будет. Сколько белков столько методов как выделения, так и идентификации.

Например лактопероксидазу можно просто по активности цветной реакцией определять. Имуноглобулины А имунохимически. Ну и тд.
Участник оффлайн! aed1986




 прочитанное сообщение 19.11.2008 14:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Здравствуйте!
Хочу провести электрофорез гуминовых кислот, но никак не могу найти методику. Если есть такая информация, пожалуйста поделитесь!
guest: plotter
IP-штамп: frlnAsDr.5x7A
гость



 прочитанное сообщение 27.11.2008 16:50     Сообщение для модератора       

Народ, два раза подряд одинаковая херь. Заливаю разрешающий, полимеризуется. Заливаю концентрирующий. После типа полимеризации вытягиваю гребенку (камера уже в буфере стоит) и весь конц. гель превращается в кашу. Ессено что туда уже ничего не внесешь и час ушел в пустую. Почему такая фигня?
Камера хеликоновская (течет кстати жутко, лучше покупайте биорад), гребенки вроде тефлоневые, прилипать не должны...
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 27.11.2008 20:01     Сообщение для модератора       

--Народ, два раза подряд одинаковая херь. Заливаю разрешающий, полимеризуется. Заливаю концентрирующий. После типа полимеризации вытягиваю гребенку (камера уже в буфере стоит) и весь конц. гель превращается в кашу.

Скорее всего Бис подразвалился или ПСА(ТЕМЕД) протухли.
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 28.11.2008 12:25     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Бис был одолжен в соседней лабе (у них все ОК). Темед и пса новые совершенно (aps сухой в морозилке стоит) темед воняет темедом, как положенно (да и конц гель-то полимеризуется как положенно).
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 28.11.2008 14:00     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

кстати, а на сколько приемлемо заменять пропанол бутанолом?
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 28.11.2008 18:45     Сообщение для модератора       

--Бис был одолжен в соседней лабе (у них все ОК). Темед и пса новые совершенно (aps сухой в морозилке стоит) темед воняет темедом, как положенно (да и конц гель-то полимеризуется как положенно).

Ну, у меня больше нет мыслей, кроме как: концентрации не соблюдены, или набор кривой, или руки кривые.

Я бы все же начал с проверки Биса вполне возможно, что вам дали вовсе не тот что был в бутылочке, которой пользуются.

Разделяющий гель концентрированей концентрирующего и поэтому там не так заметно ухудшение механических свойств геля - это естественно.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 28.11.2008 18:46     Сообщение для модератора       

--кстати, а на сколько приемлемо заменять пропанол бутанолом?

В бензобаке автомобиля - приемлимо, а вы про что спрашиваете?
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 29.11.2008 17:12     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Про заливку разрешающего геля на время полимеризации буттиловым спиртом вместо пропилового. (по принципу чем богаты...)
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 01.12.2008 14:07     Сообщение для модератора       

--Про заливку разрешающего геля на время полимеризации буттиловым спиртом вместо пропилового.

Так там можно даже дистиллятом наслаивать. А бутанол(изобутанол) даже удобней, он с водой не смешивается.
Участник оффлайн! bsm
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.12.2008 21:35     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Коллеги подскажите, меркаптоэтанол в белковом растворе должен присутствовать обязательно, или могут быть варианты... и как скажется его отсутствие на активности различных ферментов в геле.
Спсб.
Участник оффлайн! Olga Vik

Бирмингем, США



 прочитанное сообщение 02.12.2008 22:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(bsm @ 02.12.2008 21:35)
Ссылка на исходное сообщение  Коллеги подскажите, меркаптоэтанол в белковом растворе должен присутствовать обязательно, или могут быть варианты... и как скажется его отсутствие на активности различных ферментов в геле.
Спсб.


вроде в геле уже нет ничего активного eek.gif

если не ошибаюсь, меркаптоэтанол способствует денатурации (наряду с SDS): под его воздействием происходит восстановление дисульфидных связей, что предотвращает выпетливание денатурированных полипептидов и повышение их подвижности. читала статью, в которой его специально не добавляли - такой "неденатурирующий" форез, использовали для проверки на наличие дисульфидных связей.

Сообщение было отредактировано Olga_Vik - 02.12.2008 22:07
Участник оффлайн! bsm
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.12.2008 22:10     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

есть информация, что меркаптоэтанол в небольших кол-вах (1-5%) добавляют в исследуемый раствор ферментов для предотвращения их от окисления и образования дисульфидных мостиков! Что как я полагаю может грозить потерей активности различных форм ферментов и как следствие их не проявлением. Поправьте если ошибаюсь.

Сообщение было отредактировано bsm - 02.12.2008 22:11
Участник оффлайн! Olga Vik

Бирмингем, США



 прочитанное сообщение 02.12.2008 23:01     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(bsm @ 02.12.2008 22:10)
Ссылка на исходное сообщение  есть информация, что меркаптоэтанол в небольших кол-вах (1-5%) добавляют в исследуемый раствор ферментов для предотвращения их от окисления и образования дисульфидных мостиков!

вообще-то это тема по электрофорез белков, поэтому сразу уточнить стоило о чем спрашиваете =)
только вот про "активность белков В ГЕЛЕ" так и не поняла... confused.gif

Сообщение было отредактировано Olga_Vik - 02.12.2008 23:03
Участник оффлайн! bsm
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.12.2008 23:30     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

выявление изоферментов посредством помещения геля (естественно после разгонки smile.gif ) в субстрат.
Участник оффлайн! Olga Vik

Бирмингем, США



 прочитанное сообщение 02.12.2008 23:36     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(bsm @ 02.12.2008 23:30)
Ссылка на исходное сообщение  выявление изоферментов посредством помещения геля (естественно после разгонки smile.gif ) в субстрат.

smile.gif
Участник оффлайн! bukach
Постоянный участник
Geneva, Switzerland



 прочитанное сообщение 02.12.2008 23:42     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  ICQ

отсутствие меркаптоэтанола/ДТТ может повлиять, а может и не повлиять. зависит от фермента. некоторым белкам от восстановителей наоборот кранты приходят. в основном это секретируемые белки, они часто зашиты дисульфидными связями (например инсулин, иммуноглобулины, лактальбумины).

полагаю, что в гель МЭ добавить не получится - он не должен полимеризоваться. ПСА пойдёт на окисление МЭ, а не на полимеризацию акриламида.
есть наверное заряженные восстановители, которые можно добавить в електродный буфер, если форезная система гомогенная (одинаковые буферы в геле и электродный), то и загнать прераном. вообще, преран лучше сделать, чтобы избавиться от остатков ПСА и растворы дегазировать - меньше кислороду - меньше окисления.

а проверить влияние восстановителей на ваш фермент можно?
Участник оффлайн! bsm
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 03.12.2008 00:36     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Дело в том, что исследуется внутриклеточный гомогенат ( в котором ессесено присутствуют протеиназы и другие нехорошести разные smile.gif ) вот и возник вопрос поможет ли мне меркаптоэтанол снизить влияние всяких нехороших вещей на ферменты (хотя бы на какое-то время) confused.gif
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 03.12.2008 17:32     Сообщение для модератора       

--поможет ли мне меркаптоэтанол снизить влияние всяких нехороших вещей на ферменты (хотя бы на какое-то время)

Легче проверить, чем дать априорный адекватный ответ.
Участник оффлайн! bsm
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 03.12.2008 20:00     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Да я понимаю. Но мало ли может кто-то сталкивался smile.gif . Бум проверять!
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 03.12.2008 20:29     Сообщение для модератора       

bsm!!!!! Меркаптоэтанол в колличестве 1-10 % в SDS электрофорезе добавляют не для сохранения активности ферментов. Надеятся на сохранение активности при кипячении с 2% SDS, особо нет ни каких причин, а для разрушения мостиковых S-S связей между субъединицами белков. Для сохранения активности концентрация SH-реагентов обчно 1 иногда 5-10мМ и не более 50mM.
Гость
IP-штамп: frt2DxpMm4dqI
гость



 прочитанное сообщение 03.12.2008 21:33     Сообщение для модератора       

Всем привет, такой вопрос если необходимо приготовить вертикальный гель с непрерывным градиентом толщиной 6 мм, как его лучше заливать в центр или с краю...
Допустим, не буду ли я иметь сдвиг градиент вниз у центра, если заливаю из миксера в центр?
Гость
IP-штамп: frt2DxpMm4dqI
гость



 прочитанное сообщение 03.12.2008 21:39     Сообщение для модератора       

Всем привет, такой вопрос если необходимо приготовить вертикальный гель с непрерывным градиентом толщиной 6 мм, как его лучше заливать в центр или с краю...
Допустим, не буду ли я иметь сдвиг градиент вниз у центра, если заливаю из миксера в центр?
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 04.12.2008 16:17     Сообщение для модератора       

Если вам так страшно поставте модельный эксперимент, добавив в один из градиентообразующих растворов какого-нибудь бромфенолового синего.

А так мое мнение такой 3% глицерин в оба раствора и не спешить с заливанием. А с какого краю в общем пофигу.
Гость
IP-штамп: frwgDuY2GuOp.
гость



 прочитанное сообщение 08.12.2008 17:12     Сообщение для модератора       

всем привет! помогите! делаю форез сывороточных белков-все хорошо,но белки входя в разделяющий гель вдруг останавливаются,непонятно то ли они теряют заряд,то ли что....хотя при проведении фореза БФС пробежала до конца...буфер нужной концентрации,возможно концентрация геля какая-то не такая? посоветуйте что-нибудь!
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 08.12.2008 18:34     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Я рэбитчью сыворотку в 7,5% геле гонял. Помоему это маловато. Лучше брать 10 или градиент.
Участник оффлайн! Raido

Москва



 прочитанное сообщение 09.12.2008 14:24     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Здравствуйте! У меня такая проблема: при разделении в 8% ПААГ-SDS фракция белков массой меньше 35 кДа "ложится" на фронт, не разделяясь, что значительно затрудняет (и даже делает невозможным) их дальнейший анализ с помощью Вестерн блоттинга. Подскажите, пожалуйста, с чем может быть связано наблюдаемое явление?
Участник оффлайн! Эмин




 прочитанное сообщение 11.12.2008 04:10     Сообщение для модератора         Личное письмо

Наверное, это связано с тем, что 8% недостаточно для разделения белков массой меньше 35 кДа.
Участник оффлайн! Raido

Москва



 прочитанное сообщение 11.12.2008 04:46     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Я тоже так думала, но самое интересное, что фирма-производитель маркера приводит изображение линейки его разделения до белка в 10 кДа для 8 - 16% геля...что, в общем-то, соответствует данным таблицы "выбора % разрешающего геля" (см. выше). Может ли рН разрешающего геля (Tris-HCl), который не 8.8, а 8.6 быть причиной наблюдаемого явления?
Guest
IP-штамп: frSyN0sznPM3.
гость



 прочитанное сообщение 11.12.2008 12:28     Сообщение для модератора       

Так то для градиентного геля. Хотя все равно странно. Белок какой массы Вам нужен и почему считаете, что белки до 35 не разделяются?
Гость
IP-штамп: fr/eFUcux3Q2c
гость



 прочитанное сообщение 12.12.2008 09:47     Сообщение для модератора       

Около 20 кДа. А вывод о том, что белки ниже 35 кДа не разделяются был сделан из наблюдения за "поведением" маркера: белки маркера массой менее 35 кДа идут в месте с фронтом.

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
страницы (9): « < 2 3 4 5 6 > » 
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.09.18 00:59
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft