Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Лейкоцитарная фракция крови на бум.фильтре -- Как выделить ДНК? --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
guest: khruna
IP-штамп: frW0uqO/N5.7k
гость



 прочитанное сообщение 21.09.2007 17:09     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование
Вопрос
Коллеги!
Так получилось, что дабы не лишиться образцов цельной крови нам пришлось их центрифугировать, а лейкоцитарную фракцию наносить на бумажный фильтр и в таком виде транспортировать. Человек, обещавший подсобить с протоколом выделения ДНК, не отвечает, а мы точно не уверены как нам поступить frown.gif Может быть кому-либо приходилось уже так перевозить образцы и выделять из них потом ДНК? Подскажите, пожалуйста, приемлемую процедуру?!
Заранее благодарны!!!
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 21.09.2007 19:22     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Какую площадь занимает пятно на фильтре и какому объему крови соответствует это пятно? Для каких целей необходима выделяемая ДНК?
Участник оффлайн! khruna
Участник



 прочитанное сообщение 24.09.2007 14:40     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

to Ъ
Были использованы фильтры Whatman 903. Пятно, как выяснилось, имеет приличную площадь: в среднем порядка 35-40 см2. Оно соответствует 8-9 мл крови. ДНК нужна для проведения ПЦР реакций (популяционно-генетические исследования).
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 24.09.2007 16:53     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Уважаемый khruna. Я могу успокоить Вас, что ничего страшного не произойдет с Вашей ДНК (не считая частичной деградации пока она сохла на бумаге) и работать с ним (ПЦР-ить) можно будет без проблем. yes.gif Я могу предложить Вам киты для выделения ДНК из бумаги (в том числе) и Ваши образцы ДНК будут спасены практически без потерь. Как долго сушили образцы и хорошо ли они были высушены до запечатывания. Названный Вами фильтр это целлюлозный?
Принцип метода общеизвестный и основан на лизисе ГТЦ, сорбции на силике и отмывке этанолом. Я в ближайшее время напишу Вам на мыло.
Участник оффлайн! khruna
Участник



 прочитанное сообщение 25.09.2007 09:29     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Уважаемый Ъ!
Спасибо за обнадеживающий ответ! Мне, к сожалению, не известно насколько хорошо были высушены образцы, но на данный момент они выглядят сухими: хранятся в холодильнике на +4 в пакетах в присутствии сорбирующих влагу материалов. Что касается самих фильтров, то они, по информации с вебсайта, хлопковые: "The 903 paper is manufactured from 100% pure cotton linters with no wet- strength additives".
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 25.09.2007 13:38     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

(khruna @ 25.09.2007 09:29)
Ссылка на исходное сообщение  Уважаемый Ъ!
Спасибо за обнадеживающий ответ! Мне, к сожалению, не известно насколько хорошо были высушены образцы, но на данный момент они выглядят сухими: хранятся в холодильнике на +4 в пакетах в присутствии сорбирующих влагу материалов. Что касается самих фильтров, то они, по информации с вебсайта, хлопковые: "The 903 paper is manufactured from 100% pure cotton linters with no wet- strength additives".

Фильтры целлюлозные, это то что надо. Вам придется решать нужна ли такая прорва ДНК (со всего пятна). Учитывая то, что при нанесении крови на фильтр клетки распределились неравномерно, придется все равно разрезать все пятно ножницами на мелкие кусочки, 2-3 мм, смешать и отобрать часть для выделения ДНК. Может быть придется начинать элюцию из пятна в больших пробирках, типа 15 мл, а затем переходить на эпперы. Какое количество всего образцов (пятен)? Сообщите, пожалуйста, ваш е.мейл.
Участник оффлайн! khruna
Участник



 прочитанное сообщение 26.09.2007 09:16     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

Уважаемый Ъ!
Позвольте еще раз выразить вам благодарность за живейшее участие в разрешении сложившейся ситуации!
ДНК нам нужна по максимуму: мы собираем коллекцию образцов с целью дальнейшего использования в течении длительного времени (традиционно каждый образец ДНК выделяется из 8-9 мл цельной крови). На данный момент мы имеем 86 фильтров с пятнами лейкоцитарной фракции.
E-mail для связи: cat1975@mail15.com
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 26.09.2007 14:51     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Уважаемый khruna! Я отправил Вам письмо.
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 26.09.2007 14:59     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

(khruna @ 24.09.2007 14:40)
Ссылка на исходное сообщение  то Ъ
Были использованы фильтры Щхатман 903. Пятно, как выяснилось, имеет приличную площадь: в среднем порядка 35-40 см2. Оно соответствует 8-9 мл крови. ДНК нужна для проведения ПЦР реакций (популяционно-генетические исследования).

16 кб ПЦР митохондриалки и полный сиквенс ? smile.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 26.09.2007 15:04     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

(khruna @ 24.09.2007 14:40)
Ссылка на исходное сообщение  то Ъ
Были использованы фильтры Щхатман 903. Пятно, как выяснилось, имеет приличную площадь: в среднем порядка 35-40 см2. Оно соответствует 8-9 мл крови. ДНК нужна для проведения ПЦР реакций (популяционно-генетические исследования).

для контроля - неандертальца можно взять
[Click to change filter selection through My NCBI.]


1: Mol Biol Evol. 2002 Aug;19(8):1359-66.Click here to read Links
A reanalysis of the ancient mitochondrial DNA sequences recovered from Neandertal bones.
Gutiérrez G, Sánchez D, Marín A.

Departamento de Genética, Universidad de Sevilla, Spain. ggpozo@us.es

Recent reports analyzing mitochondrial DNA sequences from Neandertal bones have claimed that Neandertals and modern humans are different species. The phylogenetic analyses carried out in these articles did not take into account the high substitution rate variation among sites observed in the human mitochondrial D-loop region and also lack an estimation of the parameters of the nucleotide substitution model. The separate phylogenetic position of Neandertals is not supported when these factors are considered. Our analysis shows that Neandertal-Human and Human-Human pairwise distance distributions overlap more than what previous studies suggested. We also show that the most ancient Neandertal HVI region is the most divergent when compared with modern human sequences. However, the opposite would be expected if the sequence had not been modified since the death of the specimen. Such incongruence is discussed in the light of diagenetic modifications in ancient Neandertal DNA sequences.

PMID: 12140248 [PubMed - indexed for MEDLINE]
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 26.09.2007 15:23     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

(Guest @ 26.09.2007 14:59)
Ссылка на исходное сообщение  16 кб ПЦР митохондриалки и полный сиквенс ? smile.gif

Я подозреваю образцы от животных (коров confused.gif ), так что ты не очень впадай в задумчивость и не старайся: для чего, от кого ... Меня удивляет такое количество ДНК при желании не израсходуем на ПЦР. Не знаю, сейчас модно заниматься коллекционированием, банкингом ... smile.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 26.09.2007 16:27     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

(Ъ @ 26.09.2007 15:23)
Ссылка на исходное сообщение  Я подозреваю образцы от животных (коров confused.gif ), так что ты не очень впадай в задумчивость и не старайся: для чего, от кого ... Меня удивляет такое количество ДНК при желании не израсходуем на ПЦР. Не знаю, сейчас модно заниматься коллекционированием, банкингом ... smile.gif

предложи генсеку организовать проект "Геном коровы мужского полу" smile.gif или
женского confused.gif раз стока лишней ДНК smile.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 26.09.2007 16:30     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

(Ъ @ 26.09.2007 15:23)
Ссылка на исходное сообщение  Я подозреваю образцы от животных (коров confused.gif ), так что ты не очень впадай в задумчивость и не старайся: для чего, от кого ... Меня удивляет такое количество ДНК при желании не израсходуем на ПЦР. Не знаю, сейчас модно заниматься коллекционированием, банкингом ... smile.gif

http://www.hgsc.bcm.tmc.edu/projects/bovine/
Участник оффлайн! Amir




 прочитанное сообщение 28.02.2017 07:42     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

(Ъ @ 26.09.2007 15:51)
Ссылка на исходное сообщение  Уважаемый khruna! Я отправил Вам письмо.


Здравствуйте, не могли бы вы мне тоже прислать. буду очень признателен, у меня похожая задача. e-mail: adaipcr@gmail.com
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 02.03.2017 11:14     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

Нифигасе eek.gif тема воскресла через 10 лет, но самое главное - участники еще живые и даже на пенсию не вышли. smile.gif
Я скинул Вам свой мейл.
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  23.11.2021 15:41     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

https://app.ex.co/stories/bestreplicawatche...-regime-for-you
https://rolexrelicawatches.hpage.com/replica-watches-uk.html
https://www.cgmimm.com/articles/hints-to-he...lica-watches-uk
https://www.deviantart.com/fakerolexwatches...es-UK-871090193
https://replicawatches24.exposure.co/best-r...eplicawatches24
https://knowyourmeme.com/users/replicawatchesuk
https://www.scoop.it/topic/bestreplicawatch...ica-rolex-watch
https://uberant.com/article/1268140-hints-o...ca-rolex-watch/
https://devpost.com/watcheshutuk
https://www.ted.com/profiles/26540630/about
https://drive.google.com/file/d/1uTx90WraSJ...iew?usp=sharing
https://ibb.co/hgfZwb0
https://writer.zohopublic.com/writer/publis...10192bd4c742ceb
https://replicawatches24.mystrikingly.com/b...ica-rolex-watch
https://my.desktopnexus.com/ReplicawatchesU...a-rolex--31049/
https://sway.office.com/Tqm7mC7s0VWLhKAl

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 29.03.24 14:38
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft