Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
guest: khruna IP-штамп: frW0uqO/N5.7k гость |
Так получилось, что дабы не лишиться образцов цельной крови нам пришлось их центрифугировать, а лейкоцитарную фракцию наносить на бумажный фильтр и в таком виде транспортировать. Человек, обещавший подсобить с протоколом выделения ДНК, не отвечает, а мы точно не уверены как нам поступить Может быть кому-либо приходилось уже так перевозить образцы и выделять из них потом ДНК? Подскажите, пожалуйста, приемлемую процедуру?! Заранее благодарны!!! |
Ъ IP-штамп: frNwv0U1khjS. гость |
|
khruna Участник |
Были использованы фильтры Whatman 903. Пятно, как выяснилось, имеет приличную площадь: в среднем порядка 35-40 см2. Оно соответствует 8-9 мл крови. ДНК нужна для проведения ПЦР реакций (популяционно-генетические исследования). |
Ъ IP-штамп: frNwv0U1khjS. гость |
Принцип метода общеизвестный и основан на лизисе ГТЦ, сорбции на силике и отмывке этанолом. Я в ближайшее время напишу Вам на мыло. |
khruna Участник |
Спасибо за обнадеживающий ответ! Мне, к сожалению, не известно насколько хорошо были высушены образцы, но на данный момент они выглядят сухими: хранятся в холодильнике на +4 в пакетах в присутствии сорбирующих влагу материалов. Что касается самих фильтров, то они, по информации с вебсайта, хлопковые: "The 903 paper is manufactured from 100% pure cotton linters with no wet- strength additives". |
Ъ IP-штамп: frNwv0U1khjS. гость |
(khruna @ 25.09.2007 09:29) Уважаемый Ъ! Спасибо за обнадеживающий ответ! Мне, к сожалению, не известно насколько хорошо были высушены образцы, но на данный момент они выглядят сухими: хранятся в холодильнике на +4 в пакетах в присутствии сорбирующих влагу материалов. Что касается самих фильтров, то они, по информации с вебсайта, хлопковые: "The 903 paper is manufactured from 100% pure cotton linters with no wet- strength additives". Фильтры целлюлозные, это то что надо. Вам придется решать нужна ли такая прорва ДНК (со всего пятна). Учитывая то, что при нанесении крови на фильтр клетки распределились неравномерно, придется все равно разрезать все пятно ножницами на мелкие кусочки, 2-3 мм, смешать и отобрать часть для выделения ДНК. Может быть придется начинать элюцию из пятна в больших пробирках, типа 15 мл, а затем переходить на эпперы. Какое количество всего образцов (пятен)? Сообщите, пожалуйста, ваш е.мейл. |
khruna Участник |
Позвольте еще раз выразить вам благодарность за живейшее участие в разрешении сложившейся ситуации! ДНК нам нужна по максимуму: мы собираем коллекцию образцов с целью дальнейшего использования в течении длительного времени (традиционно каждый образец ДНК выделяется из 8-9 мл цельной крови). На данный момент мы имеем 86 фильтров с пятнами лейкоцитарной фракции. E-mail для связи: cat1975@mail15.com |
Ъ IP-штамп: frNwv0U1khjS. гость |
|
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
(khruna @ 24.09.2007 14:40) то Ъ Были использованы фильтры Щхатман 903. Пятно, как выяснилось, имеет приличную площадь: в среднем порядка 35-40 см2. Оно соответствует 8-9 мл крови. ДНК нужна для проведения ПЦР реакций (популяционно-генетические исследования). 16 кб ПЦР митохондриалки и полный сиквенс ? |
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
(khruna @ 24.09.2007 14:40) то Ъ Были использованы фильтры Щхатман 903. Пятно, как выяснилось, имеет приличную площадь: в среднем порядка 35-40 см2. Оно соответствует 8-9 мл крови. ДНК нужна для проведения ПЦР реакций (популяционно-генетические исследования). для контроля - неандертальца можно взять [Click to change filter selection through My NCBI.] 1: Mol Biol Evol. 2002 Aug;19(8):1359-66.Click here to read Links A reanalysis of the ancient mitochondrial DNA sequences recovered from Neandertal bones. Gutiérrez G, Sánchez D, Marín A. Departamento de Genética, Universidad de Sevilla, Spain. ggpozo@us.es Recent reports analyzing mitochondrial DNA sequences from Neandertal bones have claimed that Neandertals and modern humans are different species. The phylogenetic analyses carried out in these articles did not take into account the high substitution rate variation among sites observed in the human mitochondrial D-loop region and also lack an estimation of the parameters of the nucleotide substitution model. The separate phylogenetic position of Neandertals is not supported when these factors are considered. Our analysis shows that Neandertal-Human and Human-Human pairwise distance distributions overlap more than what previous studies suggested. We also show that the most ancient Neandertal HVI region is the most divergent when compared with modern human sequences. However, the opposite would be expected if the sequence had not been modified since the death of the specimen. Such incongruence is discussed in the light of diagenetic modifications in ancient Neandertal DNA sequences. PMID: 12140248 [PubMed - indexed for MEDLINE] |
Ъ IP-штамп: frNwv0U1khjS. гость |
(Guest @ 26.09.2007 14:59) Я подозреваю образцы от животных (коров ), так что ты не очень впадай в задумчивость и не старайся: для чего, от кого ... Меня удивляет такое количество ДНК при желании не израсходуем на ПЦР. Не знаю, сейчас модно заниматься коллекционированием, банкингом ... |
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
(Ъ @ 26.09.2007 15:23) Я подозреваю образцы от животных (коров ), так что ты не очень впадай в задумчивость и не старайся: для чего, от кого ... Меня удивляет такое количество ДНК при желании не израсходуем на ПЦР. Не знаю, сейчас модно заниматься коллекционированием, банкингом ... предложи генсеку организовать проект "Геном коровы мужского полу" или женского раз стока лишней ДНК |
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
(Ъ @ 26.09.2007 15:23) Я подозреваю образцы от животных (коров ), так что ты не очень впадай в задумчивость и не старайся: для чего, от кого ... Меня удивляет такое количество ДНК при желании не израсходуем на ПЦР. Не знаю, сейчас модно заниматься коллекционированием, банкингом ... |
Amir |
(Ъ @ 26.09.2007 15:51) Здравствуйте, не могли бы вы мне тоже прислать. буду очень признателен, у меня похожая задача. e-mail: adaipcr@gmail.com |
-Ъ- Постоянный участник Москва |
Я скинул Вам свой мейл. |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |