Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
david Постоянный участник Montreal, Canada |
[Текст переведён с транслита] |
david Постоянный участник Montreal, Canada |
[Текст переведён с транслита] |
david Постоянный участник Montreal, Canada |
[Текст переведён с транслита] |
Gobochka Постоянный участник |
a voobc'e-to dlya kazhdoj mashinki real time est' svoya programma dlya konstruirovaniya prajmerov. vy svoi prajmery konstruirovat' ne pytalis'? izvinite, glyuchit tut translit segodnya. |
|
|
jalex Постоянный участник |
|
david Постоянный участник Montreal, Canada |
1. Работаю с SYBR green 2. Флуорофор не сдох, потому как 18s , контроль работает, 3. Гонит, значит не работает, Ct=40 ето значит нет продукта, в смысле, всего 40 циклов и никакого продукта, а 18s, например уже на 12 цикле, а то еше и раньше начинает подьем. 4. бeнды у меня не больше 200. (100 and 160) [Текст переведён с транслита] |
david Постоянный участник Montreal, Canada |
Автор - Гобочка: Вот-вот, то же самое мне посоветовала агент с фирмы , но я же брал праимеры со статьи где уже делали реал тиме..ну я вернулся к тому же да и условия те же сделал, а праимеры новые я уже получил, сегодня буду ставить, но вот те вот праимеры меня мучают, почему же они не работали а что значит реал тиме \"гонит\"? вообще никакого продуцта нет или пример димер слишком большой и продукт поэтому не видно. а вообще-то для каждой машинки реал тиме есть своя программа для конструирования праймеров. вы свои праймеры конструировать не пытались? извините, глючит тут транслит сегодня. [Текст переведён с транслита] |
Sergey S Участник Москва |
|
david Постоянный участник Montreal, Canada |
Автор - Сергей С: С разведением понятно, концентрация cДНА у меня где-то 200нг идет на реакцию, ето конечно много, но вопрос в другом. А то. что Вы на форезе видите - это. я так понимаю, после обычного ПЦР. Попробуйте поставить то же самое, но с Вашим китом для РТ - его не так уж много уйдёт на это Поварьируйте условия - например, концентрация ДНК (кДНК?) - развелите раз в сто - а то у Вас как-то её там много (судя по18с) уточните пожалуйста, что вы имели ввиду с поставить тоже самое но с китом RT?? [Текст переведён с транслита] |
Sergey S Участник Москва |
|
david Постоянный участник Montreal, Canada |
Автор - &лт;мимо шел&гт;: нет не так)))делаю ПЦР независимо от Реал тиме с одним и тем же цДНА. Так шо конкретно имелось ввиду: ПЦР работает, дбавляем в ТУ ЖЕ ПЦР-смесь СЫБР греен и оно уже не работает, так? Или как? Если да, то ты магний забыл. СЫБР ингибирует реакцию, надо много магния. 18сРНК - тонна или две - плохой контроль. Состав реакции реал тиме тако: цДНА, примеры, сыбр греен, вода. а пцр я обычно делаю с реады микс, и все красиво и хорошо А почему 18с плохой контроль? уточните [Текст переведён с транслита] [Текст переведён с транслита] |
david Постоянный участник Montreal, Canada |
[Текст переведён с транслита] |
Sergey S Участник Москва |
|
Flormar Cosmetics |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |